检索结果-南通市图书馆

生物工程学报 2009年第2期25卷 223-229页

作者：李平景庆庆邵蔚蓝南京师范大学生命科学学院南京210046 江南大学生物工程学院无锡214122

将来源于极端嗜热菌属海栖热袍杆菌Thermotoga maritima MSB8的编码碱性果胶裂解酶的结构基因pelA与新型热激质粒pHsh连接,得到重组质粒pHsh-pelA,运用mRNA二级结构预测软件对pHsh-pelA的翻译起始区的二级结构进行优化,得到了具有最佳m... 详细信息

将来源于极端嗜热菌属海栖热袍杆菌Thermotoga maritima MSB8的编码碱性果胶裂解酶的结构基因pelA与新型热激质粒pHsh连接,得到重组质粒pHsh-pelA,运用mRNA二级结构预测软件对pHsh-pelA的翻译起始区的二级结构进行优化,得到了具有最佳mRNA二级结构及自由能的质粒pHsh-pelC。将重组质粒pHsh-pelC转入大肠杆菌JM109（DE3）进行表达,得到了一种极耐热性碱性果胶裂解酶（PelC）。对重组酶的酶学性质研究发现,该酶的最适反应温度为90℃,最适反应pH为8.5,在pH 8.2-9.8之间酶活力稳定,95℃酶活半衰期为2 h,并且该酶依赖Ca^2＋作为活性离子。在工业生产常用温度60℃下,该酶能够长时间保持稳定,并具有较高的酶活力。以多聚半乳糖醛酸（PGA）为底物时,其动力学参数Km值为0.11 mmol/L,Vmax值为327 U/mg。SDS-PAGE结果显示该重组酶的分子量为43 kD,与理论值相符。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性非常好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。

关键词：耐热碱性果胶裂解酶纯化定性热激载体

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耐热纤维素酶在大肠杆菌中的高效表达及酶学特性分析

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食品与发酵工业 2014年第4期40卷 30-36页

作者：彭静静泰山学院生物与酿酒工程学院山东泰安271021

将来源于热纤梭菌（Clostridium thermocellum ATCC 27405）的编码内切β-1,4-葡聚糖酶的结构基因（celD）分别插入到pHsh和pET两个表达系统,分别得到质粒pHsh-celD和pET-20b-celD。将重组质粒转化入大肠杆菌Escherichia coli BL21-CodonPlus（DE3）-RIL中表达,在pET系统表达时形成包涵体,采用热激表达系统pHsh在大肠杆菌表达时实现了纤维素酶的可溶性表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子质量为66kD,与理论值相符。纯化的纤维素酶的最适反应pH为5.4,在特性不同的pH条件下60℃保温30 min,重组纤维素酶在5.4-7.8的pH范围内比较稳定,在75℃下酶的半衰期约为1 h,Ca^2＋可以增强酶活,而EDTA则会抑制酶的活性。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性非常好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。

关键词：纤维素酶表达包涵体热激载体

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经密码子优化的耐热纤维素酶在大肠杆菌中的表达

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江苏农业学报 2014年第3期30卷 497-502页

作者：彭静静泰山学院生物与酿酒工程学院山东泰安271021

为了提高质粒pHsh-celD在大肠杆菌中的表达量,运用mRNA二级结构预测软件对pHsh-celD翻译起始区的二级结构进行优化,得到了具有最佳mRNA二级结构及自由能的质粒pHsh-celD I。为了进一步提高纤维素酶的表达量,在不改变目的基因翻译的氨基... 详细信息

为了提高质粒pHsh-celD在大肠杆菌中的表达量,运用mRNA二级结构预测软件对pHsh-celD翻译起始区的二级结构进行优化,得到了具有最佳mRNA二级结构及自由能的质粒pHsh-celD I。为了进一步提高纤维素酶的表达量,在不改变目的基因翻译的氨基酸序列的前提下,celD的N-端氨基酸尽可能地使用大肠杆菌同义密码子,定点突变后得到质粒pHsh-celD II。优化后质粒pHsh-celD II表达的纤维素酶活[(6.4±0.4)U/ml]是未优化[(4.1±0.3)U/ml]的1.6倍。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为66 000,与理论值相符。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性好,这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。

关键词：纤维素酶 mRNA 二级结构优化热激载体

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海栖热袍菌极耐热纤维二糖磷酸化酶在大肠杆菌中的克隆和表达

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湖北农业科学 2010年第11期49卷 2640-2642页

作者：吴华伟长江大学生命科学学院湖北荆州434023

将来源于极端嗜热菌属海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的编码纤维二糖磷酸化酶的结构基因cepA与新型热激质粒pHsh连接,得到重组质粒pHsh-cepA。将重组质粒pHsh-cepA转入大肠杆菌JM109进行表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为90... 详细信息

将来源于极端嗜热菌属海栖热袍菌(Thermotoga maritima)的编码纤维二糖磷酸化酶的结构基因cepA与新型热激质粒pHsh连接,得到重组质粒pHsh-cepA。将重组质粒pHsh-cepA转入大肠杆菌JM109进行表达。SDS-PAGE结果显示,该重组酶的分子量为90kD,与理论值相符。基于热激载体pHsh的重组表达系统具有诱导表达简便、诱导方式廉价的优点,且重组酶热稳定性非常好。这对该酶的大规模发酵应用具有重要意义。

关键词：纤维二糖磷酸化酶克隆表达热激载体

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