检索结果-南通市图书馆

作者：杨钰莹齐鲁工业大学

学位级别：硕士

温度对微生物进化产生了深远的影响,产生了嗜热、嗜温和嗜冷微生物。虽然嗜温微生物只在常温下正常生存,但当环境温度发生变化时,可激活一些热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)的表达,保证菌体在较高的温度下仍能进行正常的生长代谢。... 详细信息

温度对微生物进化产生了深远的影响,产生了嗜热、嗜温和嗜冷微生物。虽然嗜温微生物只在常温下正常生存,但当环境温度发生变化时,可激活一些热休克蛋白(Heat shock protein,HSP)的表达,保证菌体在较高的温度下仍能进行正常的生长代谢。这些HSP是重要的生物资源,在食品工业、环境保护、医疗健康等领域都有重要的应用价值。目前,研究人员对HSP已开展了广泛的研究,但对小热休克蛋白(s HSP)研究刚起步,仍有许多科学问题值得探讨。类球红细菌S1(Rhodobacter sphaeroides ATCC 17023)是一种重要的微生物,在食品医药、环保、农业等领域都有较多的应用。为提高该菌的耐热性能,本文主要针对类球红细菌S1中s HSP家族的热激应答蛋白开展研究。首先,通过设定不同温度(30-95℃)热激类球红细菌S1,最终确定75℃处理10 min作为后续热激处理条件。然后,将热激后的菌体采用i TRAQ蛋白质组学分析筛选出S1中产生应答的差异蛋白。对这些蛋白进行COG功能富集分析,发现属于HSP20家族的s HSP基因ibp A(RSP＿1016)、htp X(RSP＿0554)、RSP＿1572的表达水平在热激后显著上调。通过Pathway通路富集分析发现一些通路如转录翻译、信号传导等与S1的热胁迫耐受有关或产生积极作用。其中,脂肪酸合成代谢通路被全面激活,说明脂肪酸合成在S1抵御热胁迫中发挥了重要作用。通过蛋白质互作关系分析(PPI),发现ibp A、RSP＿1572和htp X编码的蛋白与Gro ES存在互作关系,Gro ES通过与这三个蛋白互作,使菌体受到热休克刺激后其胞内蛋白仍能正确折叠,从而提高细胞在热胁迫环境下的存活率。研究发现冷休克蛋白(RSP＿2346)与细胞色素c氧化还原酶Cyt o也存在互作关系,该酶是S1呼吸产能的参与者之一,对Cyt o中的关键亚基进行基因敲除,结果显示敲除基因后的细菌耐热性能下降。综合上述研究结果并结合已有的Gro ESL作用机制,初步解析了类球红细菌S1热激应答中s HSP的作用机制。基于上述研究结果,为进一步研究筛选出的差异蛋白在耐热机制中的功能,通过遗传学操作方法构建了7个基因工程菌株,分别为基因ibp A的敲除株(△ibp A)、过表达株(ibp A/op)、基因RSP＿1572的过表达株(RSP＿1572/op)、基因htp X的过表达株(htp X/op)及导入空质粒的对照株(WT/op)。以及呼吸链上Cyt o的两个关键亚基基因coxB-I(RSP＿1826)和coxB-II(RSP＿0118)的敲除株(△coxB-I△coxB-II和△coxB-II)。最后对4个工程菌株(△ibp A、ibp A/op、RSP＿1572/op、htp X/op),以及S1野生株(WT)和过表达对照株(WT/op)进行生物学功能挖掘。结果显示过表达ibp A和RSP＿1572能提高菌体在高温环境下的存活率,过表达htp X对菌体的耐热性能影响不显著。当菌体处于强酸和强碱环境时,过表达基因RSP＿1572、ibp A、htp X对细胞也具有保护效应,使菌体在强酸、强碱环境下比WT/op菌株表现出更高的存活率。当菌体处于高盐的环境时,RSP＿1572经过表达后能显著提高菌体的存活率,同时ibp A、htp X经过表达后对于菌体抵御盐胁迫的能力也有所改善。综上研究,表明RSP＿1572和ibp A在类球红细菌S1耐受高温、酸、碱和盐胁迫中都发挥了重要的功能,htp X在酸、碱和盐胁迫中起到一定的作用。

关键词：类球红细菌热激应答小热休克蛋白功能分析

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水稻幼苗热激应答中过氧化氢酶活性变化及两条快速酶带的显现

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生物化学与生物物理进展 1993年第3期20卷 210-211页

作者：刘德立禹邦超华中师范大学生物系武汉430070

热激应答是生物适应逆境的自我保护反应。近年来,热激应答中的酶学研究正在逐步受到重视。本文以温敏核不育水稻 W6154S 为材料,研究了热激过程中水稻幼苗过氧化氢酶(CAT)活性及同工酶谱的变化。将发芽三天的黄化苗整株进行热激处理,然... 详细信息

热激应答是生物适应逆境的自我保护反应。近年来,热激应答中的酶学研究正在逐步受到重视。本文以温敏核不育水稻 W6154S 为材料,研究了热激过程中水稻幼苗过氧化氢酶(CAT)活性及同工酶谱的变化。将发芽三天的黄化苗整株进行热激处理,然后,剪取幼芽,提取粗酶液,测其 CAT 活性,作 PAGE

关键词：热激应答水稻过氧化氢酶

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热激蛋白90与热激应答

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生命的化学 2008年第3期28卷 299-301页

作者：李娟杨惠周元国四川大学华西第二医院检验科成都610041 第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤烧伤及复合伤国家重点实验室分子生物学中心重庆400042

热激蛋白90(heat shock protein 90,HSP90)作为机体重要的分子伴侣之一,主要是维持机体内环境的稳态。在机体遭受内外界刺激时,体内氧化-抗氧化平衡失调诱发机体热激应答,诱导HSP90高表达来抵御刺激对机体造成的损伤。

关键词：热激蛋白90 热激应答

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肠炎沙门氏菌rpoH基因缺陷株的构建及其热激响应特性

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食品科学 2009年第11期30卷 202-206页

作者：曾庆梅张冬冬韩抒司文攻李志强魏春燕吴聪靳靖合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心安徽合肥230009

构建肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis IFO3313株的rpoH基因缺陷株IFO3313-ΔrpoH,比较不同温度下缺陷株与野生株的热激响应特性。利用λ-Red重组系统对Salmonella enteritidisIFO3313的rpoH基因进行缺失突变,并使用PCR方法对其进行... 详细信息

构建肠炎沙门氏菌Salmonella enteritidis IFO3313株的rpoH基因缺陷株IFO3313-ΔrpoH,比较不同温度下缺陷株与野生株的热激响应特性。利用λ-Red重组系统对Salmonella enteritidisIFO3313的rpoH基因进行缺失突变,并使用PCR方法对其进行验证,在此基础上使用不同培养基对缺陷株与野生株进行不同温度下的热激应答结果和亚致死热损伤修复能力的考察:野生株比缺陷株有更强的热激耐受能力,在DHL平板上对亚致死热损伤的肠炎沙门氏菌的分离检测可能具有假阴性,野生株比缺陷株在TSYA平板上有更强的修复能力。利用λ-Red重组系统敲除了肠炎沙门氏菌rpoH基因,有助于了解肠炎沙门氏菌的热激亚致死及其修复机制,对亚致死状态食源性病原微生物的检测做出初步研究。

关键词：基因敲除 λ-Red rpoH σ^32 热激应答

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