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热带螨过敏变应性鼻炎患者皮肤点刺试验与血清特异性IgE比较

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广东医学 2013年第6期34卷 923-925页

作者：魏欣符征林霞黎菁邓慧琳李和燕王小娟海南省人民医院耳鼻咽喉头颈外科海口570311

目的比较热带螨过敏变应性鼻炎患者皮肤点刺试验与血清特异性IgE结果的相关性及阳性检出率有无差别。方法对378例可疑变应性鼻炎患者进行热带螨皮肤点刺试验和血清特异性IgE检测以及临床症状评分,对检测结果进行相关统计分析。结果两种... 详细信息

目的比较热带螨过敏变应性鼻炎患者皮肤点刺试验与血清特异性IgE结果的相关性及阳性检出率有无差别。方法对378例可疑变应性鼻炎患者进行热带螨皮肤点刺试验和血清特异性IgE检测以及临床症状评分,对检测结果进行相关统计分析。结果两种检测方法在热带螨过敏变应性鼻炎上存在显著相关性(r=0.626,P热带螨的阳性检出率上存在差异(2=22.737,P<0.01);两种检测方法的阳性程度与变应性鼻炎症状评分无相关性。结论两种检测方法不能完全替代,变应原检测阳性程度不能反映变应性鼻炎症状严重程度。

关键词：热带螨变应性鼻炎皮肤点刺试验血清特异性IgE

热带螨重组Blo t 5变应原诱导小鼠过敏模型的建立

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中国畜牧兽医 2017年第7期44卷 2171-2177页

作者：李晓烨肖正泮刘楚韦双双王大勇裴业春海南大学热带农林学院动物科技学院海口570228 海南大学热带农林学院生物学院海口570228

为了建立热带螨重组Blo t 5(rBlo t 5)变应原诱导小鼠过敏模型,试验对热带螨Blo t 5基因序列进行优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80L-Blo t 5,并在大肠杆菌中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化了rBlo t 5蛋白,Western blotting... 详细信息

为了建立热带螨重组Blo t 5(rBlo t 5)变应原诱导小鼠过敏模型,试验对热带螨Blo t 5基因序列进行优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80L-Blo t 5,并在大肠杆菌中进行表达。利用镍柱亲和层析法纯化了rBlo t 5蛋白,Western blotting结果显示,纯化的rBlo t 5蛋白能与Blo t 5鼠单克隆抗体结合。随后将12只BALB/c小鼠随机均分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 5组),通过腹腔注射致敏与气道诱导后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。诱导小鼠过敏后发现,与PBS组相比,rBlo t 5组小鼠血清总IgE水平显著升高(P<0.05),应激性过敏反应引起体温显著下降(P<0.05),肺部组织细胞浸润显著增加(P<0.05)。本研究结果表明,原核表达纯化的rBlo t 5蛋白能够成功建立小鼠过敏模型。

关键词：热带螨重组Blo t 5蛋白过敏模型

病毒样颗粒疫苗治疗热带螨过敏模型小鼠的研究

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病毒样颗粒疫苗治疗热带螨过敏模型小鼠的研究

作者：肖正泮海南大学

学位级别：硕士

全球约有40%的人口患有过敏症,我国约有2亿人患有过敏症,过敏症发病率的显著上升已经成为许多国家关注的全球性问题。同时过敏性疾病给各个国家带来的巨大的经济负担。因此,面对全世界过敏性疾病流行现状,为了降低过敏性疾病的发病率,... 详细信息

全球约有40%的人口患有过敏症,我国约有2亿人患有过敏症,过敏症发病率的显著上升已经成为许多国家关注的全球性问题。同时过敏性疾病给各个国家带来的巨大的经济负担。因此,面对全世界过敏性疾病流行现状,为了降低过敏性疾病的发病率,建立和制定有效的预防和治疗方法已迫在眉睫。引起过敏性疾病的主要原因之一就是尘螨,全世界将近10%的人口对尘螨敏感,超过90%的过敏性哮喘病人对尘蹒敏感。尘螨中最主要的三种是粉尘螨、屋尘螨和热带无爪螨。海南地区是我国适合热带无爪螨孳生的主要地区之一。因此,热带螨诱发的支气管哮喘是海南省内具有地区特色的、广为流传、危害较大的疾病类型。当前,对于热带无爪螨诱发的过敏反应研究甚少,对热带无爪螨主要变应原的结构及其所发挥的作用还未有明确的认识,缺少行之有效的预防和诊治方法。目的:设计重组融合变应原蛋白,取代热带螨总变应原的粗提物,为将来临床应用于热带螨过敏检测打下基础:其次,设计病毒样颗粒疫苗,研究其在热带螨过敏小鼠模型中的治疗效果,为开发热带螨过敏症的治疗性疫苗奠定基础。方法:1.通过对热带螨主要变应原B1o t 5和Blo t 21的序列进行密码子优化,构建重组蛋白表达质粒PQE80L-rBlo t 5、PQE80L-rBlo t 21、PQE80L-rBlo t 5-21,并通过镍柱纯化获得纯化蛋白;2.分别利用重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21和rBlo t 5-21诱导小鼠过敏模型,通过ELISA检测小鼠血清中IgE水平、小鼠静脉注射rBlo t 5-21观察小鼠应激反应、小鼠肺部组织切片HE染色等对小鼠模型进行评估;3.病毒样颗粒疫苗 HBcAg-rBlo t 5、HBcAg-rBlo t 21、HBcAg-rBlo t 5-21 表达载体的构建及原核表达,并通过透射电子显微镜观察样品形态,判断重组蛋白是否能够自我装配成病毒样颗粒;4.利用病毒样颗粒疫苗HBcAg-rBlo t 5-21对过敏模型小鼠进行治疗,通过ELISA检测小鼠血清中IgE、IgG、IgG1和IgG2a水平、小鼠尾静脉注射rBlo t 5-21观察小鼠应激反应、小鼠肺部组织切片HE染色等对HBcAg-rBlo t 5-21的治疗效果进行评估;5.利用生物信息学方法对热带螨主要变应原Blo t 5和Blo t 21的抗原表位进行分析,合成抗原表位多肽并对其进行免疫原性鉴定。结果:1.通过原核表达和纯化获得了可溶性的重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21和rBlo t 5-21;2.分别使用重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21和rBlo t 5-21诱导过敏模型小鼠,三组过敏模型小鼠的IgE水平均显著升高（P＜0.05）,rBlo t 5-21诱导组小鼠静脉注射rBlo t 5-21后体温显著下降（P＜0.05）,且反应相较于rBlo t 5组和rBlo t 21组更为敏感和强烈。rBlo t 5-21组小鼠的肺部组织细胞浸润显著增加（P＜0.05）;3.乙肝核心抗原HBcAg与热带螨主要变应原rBlo t 5、rBlo t 21融合表达与纯化,获得了可溶性重组蛋白 HBcAg-rBlo t 5、HBcAg-rBlo t 21、HBcAg-rBlo t 5-21,并通过电镜观察到了HBcAg-rBlo t 5-21呈现病毒样颗粒结构;4.病毒样颗粒疫苗HBcAg-rBlo t 5-21治疗组模型小鼠血清中IgE水平显著下降（P＜0.05）,但仍处于一个较高水平。治疗组模型小鼠静脉注射rBlo t 5-21后,体温变化不明显,说明其机体受到有效保护。同时治疗组模型小鼠的肺部组织细胞浸润也显著下降（P＜0.05）;5.通过生物信息学方法分析获取了热带螨主要变应原Blot5和Blo t 21的抗原表位,并通过免疫原性鉴定确定了B5EP18-37、B21EP18-31 和 B21EP36-54 为主要的抗原表位。结论:本研究成功表达出了热带螨主要变应原的重组蛋白rBlo t 5、rBlo t 21及其融合蛋白rBlo t 5-21,为取代热带螨过敏症免疫治疗中的变应原总粗提物奠定了基础。并成功利用热带螨重组变应原rBlo t 5-21诱导构建了过敏模型小鼠,为热带螨过敏的诊断与治疗奠定基础,同时也为预防与治疗热带螨过敏疾病的疫苗或者药物的研制提供了动物模型。病毒样颗粒疫苗HBcAg-rBlo t 5-21在对过敏模型小鼠的治疗中取得一定的治疗效果,为热带螨过敏症疫苗的研制提供了参考。通过生物信息学方法分析获得热带螨主要变应原Blo t5和Blo t 21的主要抗原表位为本研究后续构建病毒样颗粒表位疫苗奠定了基础,同时也为热带螨过敏症的表位疫苗的研制提供了参考。

关键词：热带螨变应原乙肝核心抗原病毒样颗粒过敏模型小鼠

重组热带螨Blo t 21变应原诱导小鼠变态反应气道炎症模型的建立

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热带生物学报 2017年第3期8卷 371-376页

作者：肖正泮刘金莹韦双双王大勇裴业春海南大学热带农林学院动物科技学院/海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海口570228 海南大学热带农林学院生物学院海口570228

为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t ... 详细信息

为了建立热带螨重组变应原Blo t 21(rBlo t 21)诱导小鼠变态反应气道炎症模型,笔者利用从NCBI Gen Bank库里获得的热带螨Blo t 21基因序列,进行了序列优化与全基因合成,构建了原核表达载体PQE80LrBlo t 21,在大肠杆菌内诱导表达rBlo t 21,利用镍柱亲和层析纯化rBlo t 21蛋白。12只BALB/c小鼠随机分为对照组(PBS组)与诱导组(rBlo t 21组),每组6只,通过腹腔注射致敏与气道诱导后,分别通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清总IgE水平;鼠尾静脉注射变应原诱发应激性过敏反应;HE染色观察小鼠肺部炎症严重程度。本试验成功表达与纯化了重组热带螨变应原Blo t 21。利用纯化的rBlo t 21诱导小鼠变态反应气道炎症模型,与PBS组相比,rBlo t 21组的小鼠血清总IgE水平显著升高,肺部组织细胞侵润明显增加(P<0.05)。原核表达纯化的重组Blo t 21变应原能够诱导小鼠产生变态反应气道炎症。

关键词：热带螨重组Blo t 21蛋白气道炎症

海南变态反应性疾病患儿对屋尘螨/粉尘螨和仓储螨的特异性IgE

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中华临床免疫和变态反应杂志 2010年第3期4卷 191-195页

作者：陈实郑轶武王灵陈冰林小珍 Birgitte Gjesing 钟南山 Michael D.Spangfort 海南省人民医院儿童哮喘免疫治疗中心海口570102 爱尔开-阿贝优亚太研究部广州510230 广州医学院第一附属医院国家呼吸疾病重点实验室广州510230

目的探讨海南变态反应性疾病患儿对尘螨和仓储螨的特异性IgE水平。方法对海南变态反应性疾病患儿进行13种常见变应原皮肤点刺和7种螨的体外特异性IgE检测。结果 121例患儿中对屋尘螨和粉尘螨的皮肤点刺阳性率为100%,而对热带无爪螨的阳... 详细信息

目的探讨海南变态反应性疾病患儿对尘螨和仓储螨的特异性IgE水平。方法对海南变态反应性疾病患儿进行13种常见变应原皮肤点刺和7种螨的体外特异性IgE检测。结果 121例患儿中对屋尘螨和粉尘螨的皮肤点刺阳性率为100%,而对热带无爪螨的阳性率为85.8%。7种螨的体外特异性IgE依次为屋尘螨99.2%、粉尘螨95.0%、热带无爪螨87.6%、家嗜甜螨79.7%、害嗜鳞螨67.8%、腐食酪螨59.5%和粗脚粉螨52.9%。对仓储螨过敏的患儿同时都对屋尘螨和热带无爪螨过敏,并且IgE水平更高。除热带无爪螨外,其他仓储螨的特异性IgE有很好的相关性。结论除屋尘螨和粉尘螨外,热带无爪螨也是海南地区的重要致敏原,其他仓储螨亦有可能引起慢性变态反应性疾病。

关键词：屋尘螨粉尘螨热带螨仓储螨特异性IgE 交叉反应

不同螨致敏原对变应性鼻炎患者生活质量的影响

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中国眼耳鼻喉科杂志 2010年第1期10卷 18-20页

作者：丁国强刘颖李厚勇赵可庆蔺林汪毅复旦大学附属眼耳鼻喉科医院耳鼻喉科上海200031

目的探讨屋尘螨(Dermatophagoides pteronyssinus,Der p)、粉尘螨(Dermatophagoides farinae,Der f)和热带螨(Blomia tropicalis,Blot)对变应性鼻炎患者生活质量的影响是否存在差异。方法对236例变应性鼻炎患者行标准化屋尘螨疫苗特异性免疫治疗,观察患者皮肤点刺试验(skin prick test,SPT)结果。在免疫治疗前分别进行鼻结膜炎症状问卷调查(rhinoconjunctivitis symptom questionnaire,RSQ)和鼻结膜炎患者生活质量问卷调查(rhinoconjunctivitis quality of life questionnaire,RQLQ)。通过对调查结果的分析判断,对比3种螨对患者RSQ和RQLQ的影响。结果SPT结果在Der p、Der f和Blo t中的总阳性率分别为97.87%(231例)、97.87%(231例)和61.28%(145例);患者的RSQ和RQLQ评分分别为(9.64±3.72)分和(26.56±15.30)分。通过多元线性回归分析,3种螨对患者RSQ和RQLQ的影响差异均无统计学意义(P>0.05)。结论Der p、Der f和Blo t对变应性鼻炎患者生活质量的影响无差别。

关键词：屋尘螨粉尘螨热带螨变应性鼻炎生活质量