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企鹅珍珠贝热休克蛋白70基因的克隆与序列比较分析

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热带海洋学报 2008年第1期27卷 46-51页

作者：黄桂菊喻达辉曲妮妮郭奕慧李莉好杜博童馨中国水产科学院南海水产研究所广东广州510300

采用同源克隆和锚定PCR技术,从企鹅珍珠贝Pteria penguin中克隆到热休克蛋白hsp70基因的cDNA全序列。cDNA全长2 308 bp,3’非编码区域(UTR)为234 bp,5’UTR为118 bp,开放阅读框(ORF)为1 956 bp,编码651个氨基酸,分子量为70.97 kd,理论... 详细信息

采用同源克隆和锚定PCR技术,从企鹅珍珠贝Pteria penguin中克隆到热休克蛋白hsp70基因的cDNA全序列。cDNA全长2 308 bp,3’非编码区域(UTR)为234 bp,5’UTR为118 bp,开放阅读框(ORF)为1 956 bp,编码651个氨基酸,分子量为70.97 kd,理论等电点为5.24,有2个糖基化位点:NKSI和NVSA,并含有HSP70家族的3个签名序列:IDLGTTYS,DLGGGTFD和IVLVGGSTRIPKIQK,以及C末端的保守序列EE-VD。结合BLAST分析的结果,可以确认获得的cDNA序列为企鹅珍珠贝HSP70的编码序列。与合浦珠母贝Pinctada fucata hsp70的氨基酸序列相比,企鹅珍珠贝多1个糖基化位点NVSA,少1个氨基酸,包括1个氨基酸插入和2个缺失。两者的氨基酸序列一致性高达92%,突变位点52个;两者的核苷酸序列一致性高达79%,突变位点416个。系统发育分析表明两者的亲缘关系最近,与传统分类相符,然后与太平洋牡蛎等聚合在一起。该基因的克隆和比较分析为进一步深入研究珍珠贝类的抗逆机理、抗性育种及其进化具有重要意义。

关键词：企鹅珍珠贝Pteria penguin 热休克蛋白70基因 cDNA克隆序列比较

安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因与热休克蛋白70基因的重组联合表达

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中国兽医科学 2014年第12期44卷 1217-1222页

作者：李军唐林生彭昊陶立潘艳陈泽祥许力干谢永平杨威黄维义广西兽医研究所广西南宁530001 广西畜禽疫苗新技术重点实验室广西南宁530001 广西大学动物科学技术学院广西南宁530005

利用双酶切方法将安氏隐孢子虫热休克蛋白70(HSP70)基因部分编码区连接到含有安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP)的表达质粒pET-32a-COWP上,构建了表达质粒pET-32a-COWP-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,30℃,经1.... 详细信息

利用双酶切方法将安氏隐孢子虫热休克蛋白70(HSP70)基因部分编码区连接到含有安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因(COWP)的表达质粒pET-32a-COWP上,构建了表达质粒pET-32a-COWP-HSP70。将鉴定正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,30℃,经1.5mmol/L IPTG诱导表达6h,表达产物主要以可溶的形式表达。使用小鼠抗安氏隐孢子虫超免疫血清为第一抗体进行Western-blot检测,结果有明显的目的条带出现,说明重组蛋白能被抗安氏隐孢子虫抗体识别。

关键词：安氏隐孢子虫卵囊壁蛋白基因热休克蛋白70基因表达

异丙酚对氯胺酮诱导的热休克蛋白70基因在大鼠后扣带回皮质区表达的影响

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中华麻醉学杂志 2003年第3期23卷 204-206页

作者：郭建荣崔健君陈卫民孟凌新高红中国医科大学附属第二医院麻醉科沈阳市110004 中国医科大学卫生部小儿先天畸形重点实验室沈阳市110004

目的观察异丙酚对氯胺酮诱导的热休克蛋白70(HSP70)基因在大鼠后扣带回皮质区表达的影响,探讨异丙酚抑制氯胺酮所致精神症状和神经损害的机制。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为生理盐水5 ml组、氯胺酮100 mg/kg组、异丙酚100 mg/kg组... 详细信息

目的观察异丙酚对氯胺酮诱导的热休克蛋白70(HSP70)基因在大鼠后扣带回皮质区表达的影响,探讨异丙酚抑制氯胺酮所致精神症状和神经损害的机制。方法雄性Wistar大鼠30只,随机分为生理盐水5 ml组、氯胺酮100 mg/kg组、异丙酚100 mg/kg组、异丙酚50 mg/kg-氯胺酮100mg/kg组、异丙酚100 mg/kg-氯胺酮100 mg/kg组。于用药后24 h,大鼠断头取脑,用半定量RT-PCR技术和免疫组织化学方法检测各组HSP70 mRNA和HSP 70蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达。结果氯胺酮可明显诱导HSP70 mRNA与HSP70蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达;异丙酚自身不能诱导HSP70基因的表达;预先给予异丙酚可显著抑制氯胺酮诱导的HSP70 mRNA和HSP70蛋白在这一区域的表达,且抑制效应呈剂量依赖性。结论异丙酚可抑制氯胺酮诱导的HSP 70 mRNA与HSP70蛋白在大鼠后扣带回皮质区的表达,这可能是其预防或减轻氯胺酮所致精神症状和神经损害的机制之一。

关键词：异丙酚氯胺酮热休克蛋白70基因大鼠扣带回皮质区实验研究

鸡热休克蛋白70基因克隆、单核苷酸多态性检测及生物信息学分析

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中国畜牧兽医 2014年第3期41卷 194-199页

作者：晁哲林哲敏刘海隆张星郑心力黄丽丽谢亮王峰海南省农业科学院畜牧兽医研究所海南海口571100 海南省热带动物繁育与疫病研究重点实验室海南海口571100

试验旨在克隆鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因,获得基因序列并分析基因结构和相关遗传变异,检测单核苷酸多态性(SNP)位点在文昌鸡和北京油鸡群体中的分布。试验利用PCR扩增鸡HSP70基因组序列,通过克隆测序寻找基因中... 详细信息

试验旨在克隆鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因,获得基因序列并分析基因结构和相关遗传变异,检测单核苷酸多态性(SNP)位点在文昌鸡和北京油鸡群体中的分布。试验利用PCR扩增鸡HSP70基因组序列,通过克隆测序寻找基因中的突变位点。在鸡HSP70基因组中共发现3处突变位点,分别位于启动子区(T-564C)、5′非翻译区(A-68G)和编码区(A-1044G)。使用PCR-RFLP方法检测T-564C位点后发现,等位基因C在文昌鸡和北京油鸡中的基因频率分别为0.87和0.55。利用生物信息学分析发现,鸡HSP70基因启动子区域存在一些潜在的转录因子结合位点,如Sp1、AP-1、GATA-1、CREB、MZF1和HSF2等。

关键词：鸡热休克蛋白70基因多态性生物信息学分析

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鸡热休克蛋白70基因启动子区CpG岛的甲基化研究

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黑龙江畜牧兽医 2019年第5期 1-4页

作者：晁哲邢漫萍孙瑞萍刘海隆林哲敏郑心力海南省农业科学院畜牧兽医研究所海口571100 海南省家畜家禽工程技术研究中心海口571100

为了获得鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因启动子区CpG岛的甲基化状态,初步探索HSP70基因在肌肉组织生长发育中的作用,试验以文昌鸡和北京油鸡为试验材料,采用MassArray质谱法检测鸡胸肌中HSP70基因启动子区CpG岛的甲... 详细信息

为了获得鸡热休克蛋白70(heat shock protein 70,HSP70)基因启动子区CpG岛的甲基化状态,初步探索HSP70基因在肌肉组织生长发育中的作用,试验以文昌鸡和北京油鸡为试验材料,采用MassArray质谱法检测鸡胸肌中HSP70基因启动子区CpG岛的甲基化水平,比较分析文昌鸡和北京油鸡HSP70基因的甲基化差异。结果表明:在HSP70基因启动子中共检测到65个CpG位点的甲基化水平;文昌鸡胸肌生长发育过程中有8个CpG位点甲基化水平发生明显改变,其甲基化密度从第30天到第120天基本呈下降趋势;北京油鸡胸肌生长发育过程中只有3个CpG位点甲基化水平发生明显改变,其甲基化密度从第30天到第120天基本呈升高趋势,第120天时甲基化水平达到最高。说明文昌鸡与北京油鸡HSP70基因启动子区CpG岛的甲基化模式和水平不同,这可能导致两种鸡对应激反应产生不同的耐受程度。

关键词：文昌鸡北京油鸡热休克蛋白70基因启动子甲基化肌肉

美金胺对脑缺氧缺血新生大鼠热休克蛋白70基因表达的影响

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中国神经科学杂志 2001年第1期17卷 72-76,83页

作者：陈惠金蒋明华钱龙华周建德周泽汉周伟上海市儿科医学研究所上海200092 上海第二医科大学生物医学工程系

近来报道非竞争性NMDA受体拮抗剂美金胺 (Memantine)对缺氧缺血损伤 (HI)具有脑保护作用。在对HI新生大鼠先行进行了HSP70基因表达的研究基础上 ,对新生大鼠在HI前后对照应用美金胺 ,通过观察HSP70基因表达的变化 ,进一步从分子水平评... 详细信息

近来报道非竞争性NMDA受体拮抗剂美金胺 (Memantine)对缺氧缺血损伤 (HI)具有脑保护作用。在对HI新生大鼠先行进行了HSP70基因表达的研究基础上 ,对新生大鼠在HI前后对照应用美金胺 ,通过观察HSP70基因表达的变化 ,进一步从分子水平评估美金胺的脑保护效果。结果显示 ,HSP70mRNA在正常情况下仅有极微弱表达 ,HI后可引起其表达明显增加。应用美金胺后 ,其HSP70基因表达虽较正常对照组增高 ,但显著弱于HI组 ,提示美金胺的应用具有一定的脑保护作用 ,可能减轻了HI的脑损伤 ,因而使作为一种敏感的脑缺氧缺血标志的HSP70基因的表达降低。数据显示美金胺在HI前应用较之HI后应用似有更明显的脑保护效果 ,尽管统计显示其差异无显著性意义。结合已完成的脑病理研究和病理量化评分 ,初步证实美金胺作为较安全有效的NMDA受体离子通道非竞争性拮抗剂。

关键词：美金胺热休克蛋白70基因新生大鼠缺氧缺血性脑病

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柞蚕热休克蛋白70基因的克隆和序列分析

激光生物学报 2011年第2期20卷 207-211,218页

作者：孙茜刘朝良朱保健刘秋宁安徽农业大学生命科学学院安徽合肥230036

HSP70蛋白是受热等因素刺激后而诱导产生的蛋白质,是热休克蛋白家族中最重要的一员。采用RT-PCR方法克隆了柞蚕(Antheraea pernyi)热休克蛋白70基因(HSP70)的ORF序列(GenBank登录号:GU945199),该片段的序列长度为1905bp。生物信息学分... 详细信息

HSP70蛋白是受热等因素刺激后而诱导产生的蛋白质,是热休克蛋白家族中最重要的一员。采用RT-PCR方法克隆了柞蚕(Antheraea pernyi)热休克蛋白70基因(HSP70)的ORF序列(GenBank登录号:GU945199),该片段的序列长度为1905bp。生物信息学分析表明,该序列共编码634个氨基酸,预测蛋白的等电点和分子量大小分别为5.62kD和69.5kD。具有HSP70的保守性结构特征,与天蚕(Antheraea yamamai)、家蚕(Bombyx mor)、甘蓝夜蛾(Mamestra brassicae)、棉铃虫(Heliothis viriplaca)、甜菜夜蛾(Spodoptera exigua)、烟草夜蛾(Manduca sexta1)、膜翅目寄生蜂(Cotesia rubecula)的同源性分别为95.7%、78.5%、76.1%、77.3%、76.6%、74.7%、65.9%。根据它们的一级结构构建了系统进化树,进一步确立了它们之间的亲缘关系。

关键词：柞蚕热休克蛋白70基因基因克隆同源性分析序列分析

飞蝗热休克蛋白70cDNA片段的克隆和序列分析

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Zoological Research 2003年第5期24卷 349-354页

作者：王宪辉陈兵康乐中国科学院动物研究所

采用RT PCR方法对海南、河北和辽宁 3个飞蝗 (LocustamigratoriaL )种群的热休克蛋白 70(HSP70 )基因cDNA片段进行克隆。在事先优化的条件下 ,通过简并性上游引物和下游引物扩增出了河北种群飞蝗HSP70基因的 6 0 4bpcDNA片段 (GenBank... 详细信息

采用RT PCR方法对海南、河北和辽宁 3个飞蝗 (LocustamigratoriaL )种群的热休克蛋白 70(HSP70 )基因cDNA片段进行克隆。在事先优化的条件下 ,通过简并性上游引物和下游引物扩增出了河北种群飞蝗HSP70基因的 6 0 4bpcDNA片段 (GenBank登录号为AY2 996 37) ,推导的氨基酸序列包含 2 0 1个氨基酸残基。分析表明 ,由飞蝗该片段推导的氨基酸序列与其他昆虫的同源性较高 ;3个种群该片段的核苷酸序列相似性更高达 98 75 %。由此推测 ,飞蝗种群间抗寒性的差异可能不是HSP70的序列变异引起的 ,而与HSP70的诱导表达有关。

关键词：飞蝗抗寒性热休克蛋白70基因基因序列

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象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能分析

基因组学与应用生物学 2016年第10期35卷 2653-2661页

作者：陈慧王会芳赵志祥陈绵才海南大学环境与植物保护学院海口571101 海南省农业科学院植物保护研究所海南省植物病虫害防控重点实验室海口571100

Hsp70基因的表达量在研究中常作为一个重要的生理指标来反映机体的状况。为了研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能,本研究前期成功构建了p EASY-E1-Me Hsp70和p ET30a-Me Hsp70两个原核表达载体,通过热激转化将其分别转入大肠杆菌(Esch... 详细信息

Hsp70基因的表达量在研究中常作为一个重要的生理指标来反映机体的状况。为了研究象耳豆根结线虫Hsp70基因相关功能,本研究前期成功构建了p EASY-E1-Me Hsp70和p ET30a-Me Hsp70两个原核表达载体,通过热激转化将其分别转入大肠杆菌(Escherichia coli)BL21进行表达。对转入Me Hsp70基因的大场杆菌BL21、转入空载的大肠杆菌BL21和大肠杆菌BL21原始菌种在55℃、65℃进行热稳定性测定,在37℃、200 r/min条件下进行生长曲线测定。热稳定性试验结果表明,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌生存时间较长,而转入p EASY-E1-Me Hsp70的菌株、转入空载的菌株和原始菌株热稳定性都相对较差。通过荧光定量PCR测定发现Me Hsp70基因均有上调表达,转入p ET30a-Me Hsp70基因的大场杆菌Hsp70基因水平高于其他菌株。生长曲线测定试验结果表明,重组菌株与原始菌株生长曲线基本一致,转入p ET30a-Me Hsp70载体的菌株调整期滞留时间长于其他菌株。该项研究表明Me Hsp70基因能够提升大肠杆菌BL21的抗应激能力和影响大肠杆菌BL21的生长,为进一步开展Me Hsp70基因在象耳豆根结线虫生长过程的功能研究提供了一定的理论基础。

关键词：象耳豆根结线虫热休克蛋白70基因大肠杆菌抗逆性生长曲线