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葡萄糖调节蛋白78kD和热休克蛋白20在左半及右半结肠癌差异表达的初步研究

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中华胃肠外科杂志 2013年第1期16卷 75-79页

作者：裴海平李小龙朱红曾亮黄林生中南大学湘雅医院普通外科长沙410008 中南大学湘雅医院肿瘤科长沙410008 湖南省肿瘤医院病理科

目的分析左半结肠癌与右半结肠癌肿瘤组织中差异蛋白表达情况。方法收集人左半结肠癌和右半结肠癌组织标本各7例．提取组织蛋白并进行二维凝胶电泳、质谱分析及生物信息学分离．鉴定二者中差异表达蛋白质。应用免疫组织化学sP法检测葡... 详细信息

目的分析左半结肠癌与右半结肠癌肿瘤组织中差异蛋白表达情况。方法收集人左半结肠癌和右半结肠癌组织标本各7例．提取组织蛋白并进行二维凝胶电泳、质谱分析及生物信息学分离．鉴定二者中差异表达蛋白质。应用免疫组织化学sP法检测葡萄糖调节蛋白78kD（GRP78）和热休克蛋白20（HSP20）在50例左半和50例右半结肠癌组织中的表达情况。结果筛选并成功鉴定出左半和右半结肠癌中16种差异表达蛋白质：与右半结肠癌比较，左半结肠癌10种蛋白表达上调，6种蛋白表达下调，其中GRP78在左半结肠癌中表达上调，HSP20在左半结肠癌中表达下调。免疫组织化学检测示．GRP78在左半和右半结肠癌组织的阳性表达率分别为78％（39／50）和56％（28／50），差异有统计学意义（P〈0．05）；HSP20在左半和右半结肠癌的阳性表达率分别为34％（17／50）和72％（36／50），差异亦有统计学意义（P〈0．05）。GRP78表达与肿瘤分化程度、浸润层次、TNM分期、有无淋巴结转移以及有无肝转移有关（P〈0．05），而HSP20的表达与肿瘤大体形态、TNM分期以及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）。结论左半结肠癌和右半结肠癌的蛋白质组存在蒡异．这些可能是左半与右半结肠癌生物学行为存在差异的原因。

关键词：左半结肠肿瘤右半结肠肿瘤葡萄糖调节蛋白78 kD 热休克蛋白20 蛋白质组学

热休克蛋白20在大鼠急性尿潴留膀胱中的表达及意义

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局解手术学杂志 2012年第3期21卷 229-232页

作者：闫书贤王永权熊智勇邓建平卢根生第三军医大学西南医院全军泌尿外科研究所重庆400038

目的研究热休克蛋白20(Hsp20)在大鼠急性尿潴留(AUR)模型膀胱中的表达及其与逼尿肌收缩功能的关系。方法通过结扎尿道口的方法建立大鼠急性尿潴留动物模型,利用充盈性膀胱测压的方法检测膀胱收缩功能,采用免疫荧光染色的方法分别检测急... 详细信息

目的研究热休克蛋白20(Hsp20)在大鼠急性尿潴留(AUR)模型膀胱中的表达及其与逼尿肌收缩功能的关系。方法通过结扎尿道口的方法建立大鼠急性尿潴留动物模型,利用充盈性膀胱测压的方法检测膀胱收缩功能,采用免疫荧光染色的方法分别检测急性尿潴留膀胱排空后不同时相点(0 h、1 h、6 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d)大鼠膀胱逼尿肌Hsp20的表达情况,采用western blot的方法比较尿潴留后不同时相点Hsp20含量的差异。结果 AUR后1h、6h、12h、24h组大鼠逼尿肌收缩力呈时间依赖性递减,均较0h组显著下降(P20表达明显高于对照组,梗阻后24 h内Hsp20表达呈逐步上升趋势,而24 h至7 d则是逐渐降低的,其差异具有统计学意义(P20表达的上调很可能对逼尿肌细胞有一定的保护作用,但AUR后Hsp20的高表达可能也是逼尿肌细胞收缩功能受到抑制的重要因素之一。

关键词：热休克蛋白20 急性尿潴留膀胱收缩乏力大鼠

缺氧微环境下热休克蛋白20对犬内皮祖细胞的影响及其与PI3K/Akt信号通路的相关性探讨

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缺氧微环境下热休克蛋白20对犬内皮祖细胞的影响及其与PI3K/Akt信...

作者：韩志琪广西医科大学

学位级别：硕士

目的:牵张成骨(distraction osteogenesis,DO)又被称为牵引成骨或骨痂延长术,其过程为对目标骨进行低能量截骨术,后对带血管蒂的骨块施加持续的牵张力,最终可见牵张间隙中有新骨形成。这是一种骨的内源性组织工程学技术。除了骨的新生,... 详细信息

目的:牵张成骨(distraction osteogenesis,DO)又被称为牵引成骨或骨痂延长术,其过程为对目标骨进行低能量截骨术,后对带血管蒂的骨块施加持续的牵张力,最终可见牵张间隙中有新骨形成。这是一种骨的内源性组织工程学技术。除了骨的新生,血管的新生与生成过程对于牵张成骨技术的成功同样必不可少。此外,牵张成骨的新骨生成速率可达儿童期自然生长率的4～6倍,这可能是牵张成骨引起的局部返祖现象所导致的。热休克蛋白20(heat shock protein 20,Hsp20)是一种小热休克蛋白分子,其在人体内有着广泛的表达,其中骨骼、心脏、平滑肌中含量较高。本课题组前期通过高通量测序技术探究成年犬牵张成骨区、胚胎期犬下颌骨m RNA表达的不同,发现Hsp20在两组中皆显著高表达,我们推测Hsp20对牵张成骨过程中的血管新生产生着一定的影响,故在此研究中,我们在体外试验中通过运用含不同浓度氯化钴(CoCl)的培养基模拟缺氧微环境模型,培养犬骨髓来源的内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs),研究适宜浓度的CoCl是否会对EPCs的功能产生影响,是否会导致Hsp20表达的增高,并初步探讨此过程与PI3K/Akt信号通路的相关性,为进一步在体内实验研究Hsp20对牵张成骨过程中的血管新生过程的影响奠定基础。方法:1、犬EPCs的分离培养、功能鉴定及对CoCl模拟缺氧微环境对EPCs的影响:首先运用密度梯度离心法结合差速贴壁法对犬EPCs进行分离培养,运用免疫荧光鉴定EPCs,迁移实验检测EPCs的迁移功能,成管实验检测EPCs的成管能力;CCK-8增殖实验检测不同浓度CoCl对EPCs增殖的影响;细胞周期实验检测不同浓度CoCl对EPCs细胞周期的影响;凋亡实验检测不同浓度CoCl对EPCs凋亡的影响;细胞迁移实验检测不同浓度CoCl对EPCs迁移能力的影响;成管实验检测不同浓度CoCl对EPCs成管能力的影响;免疫荧光检测不同浓度CoCl对EPCs表达Hsp20能力的影响;RT-qPCR检测不同浓度CoCl对EPCs中HIF-1α、Hsp20、KDR、PI3K、Akt转录水平表达的影响;Western Blot检测不同浓度CoCl对EPCs中HIF-1α、Hsp20、KDR、PI3Kp110、t-Akt、p-Akt蛋白水平表达的影响。2、Hsp20对EPCs的影响与PI3K/Akt信号通路的关系:构建过表达及沉默Hsp20的慢病毒载体并进行转染实验,CCK-8增殖实验检测过表达及沉默Hsp20对EPCs增殖的影响;细胞周期实验检测过表达及沉默Hsp20对EPCs细胞周期的影响;凋亡实验检测过表达及沉默Hsp20对EPCs凋亡的影响;细胞迁移实验检测过表达及沉默Hsp20对EPCs迁移能力的影响;成管实验检测过表达及沉默Hsp20对EPCs成管能力的影响;免疫荧光检测过表达及沉默Hsp20对EPCs表达Hsp20能力的影响;RT-qPCR检测过表达及沉默Hsp20对EPCs中Hsp20、KDR、PI3K、Akt转录水平表达的影响;Western Blot检测过表达及沉默Hsp20对EPCs中Hsp20、KDR、PI3Kp110、t-Akt、p-Akt蛋白水平表达的影响。结果:1、犬EPCs的分离培养、功能鉴定及CoCl对EPCs的影响:倒置显微镜下观察到原代时EPCs成簇生长,刚贴壁时呈圆形,后来呈长梭形、多角形、纺锤形;免疫荧光结果显示EPCs表达Dil-ac-LDL与FITC-UEA-1;细胞迁移实验结果显示24h后可见细胞迁移,48h后可见迁移增多;基质胶成管实验结果显示6h后可见EPCs在基质胶中形成“管腔”样结构;CCK-8增殖实验结果显示CoCl浓度为0.1mmol/L时可促进EPCs增殖(P0.05)、进而抑制(P20(P20、KDR、PI3K转录水平的表达(P<0.001),而对

关键词：内皮祖细胞热休克蛋白20 血管发生缺氧 PI3K/Akt信号通路

东方巴贝斯虫热休克蛋白20基因克隆表达及功能研究

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东方巴贝斯虫热休克蛋白20基因克隆表达及功能研究

作者：余倩华中农业大学

学位级别：硕士

东方巴贝斯虫(Babesia orientalis)是寄生于水牛的一种重要的血液原虫,以镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)为传播媒介,临床症状为高热、贫血、黄疸和血红蛋白尿等,严重时导致水牛死亡。东方巴贝斯虫病在我国南方许多省份发... 详细信息

东方巴贝斯虫(Babesia orientalis)是寄生于水牛的一种重要的血液原虫,以镰形扇头蜱(Rhipicephalus haemaphysaloides)为传播媒介,临床症状为高热、贫血、黄疸和血红蛋白尿等,严重时导致水牛死亡。东方巴贝斯虫病在我国南方许多省份发生和流行,造成严重经济危害。本实验室通过对东方巴贝斯虫的形态学、生活史、传播媒介和分子分类学等多方面详细研究,确立B. orientalis为一新种。近年来,本实验室致力于***分子生物学研究,对东方巴贝斯虫进行了全基因组测序,为研究***的功能基因提供了重要途径。小分子热休克蛋白(small heat shock proteins, sHSPs)是分子量大小在12-43kDa,具有保守的约80～100氨基酸组成的α晶状体蛋白结构域的一类热休克蛋白亚家族。sHSPs与寄生虫感染具有重要的关系,其中小分子热休克蛋白HSP20影响顶复门寄生虫的移行和入侵等过程。巴贝斯虫的HSP20蛋白非常保守,是一种重要的虫体抗原,能够引起特异性T细胞的免疫应答。本研究通过比对基因组信息,找出东方巴贝斯虫HSP20基因片段,对该基因进行克隆和序列分析。随后对该基因进行表达,研究东方巴贝斯虫HSP20蛋白的免疫原性等,具体工作包括以下几个方面：(1)东方巴贝斯虫HSP20基因的克隆及序列分析通过比对东方巴贝斯虫基因组数据库找到与牛巴贝斯虫HSP20基因(AF331455.1)具有高同源性的序列片段。设计引物从东方巴贝斯虫基因组DNA中扩增得到690bp的完整东方巴贝斯虫HSP20基因(BoHsp20),其ORF为534bp,编码177个氨基酸。预测的蛋白序列中具有小分子热休克蛋白家族保守的α晶状体蛋白结构域,表明该蛋白为东方巴贝斯虫小分子热休克蛋白20(BoHSP20)。 BoHSP20序列与牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫和分歧巴贝斯虫HSP20序列的同源性分别高达94%、86%和86%,以此蛋白序列建立的分子进化分析表明东方巴贝斯虫属于独立的巴贝斯虫新种,且与牛巴贝斯虫亲缘关系最接近。生物信息学分析表明,BoHSP20具有良好的抗原性。(2)东方巴贝斯虫HSP20的原核表达、纯化及重组蛋白的抗原性本研究克隆至BoHsp20完整的开放阅读框,将其插入原核表达载体pET-28a,成功构建了原核表达质粒pET-28a-BoHSP20。将重组质粒转入大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,经SDS-PAGE分析在约20kDa位置有明显的特异性表达条带,与预期一致,表明得到高效表达的重组蛋白His-BoHSP20。经镍亲和层析柱纯化后,得到单一的目的蛋白。用纯化后的BoHSP20蛋白与感染东方巴贝斯虫的水牛血清进行Western blot反应,BoHSP20蛋白与阳性牛血清可产生特异性的反应条带,表明该重组蛋白具有良好的抗原性。(3)东方巴贝斯虫HSP20的免疫反应原性用重组BoHSP20蛋白作为抗原,检测实验感染东方巴贝斯虫的水牛血清样品的抗体水平。结果表明,在水牛感染后的第16天即可检测到东方巴贝斯虫抗体,抗体水平维持较高值至感染的62天。说明东方巴贝斯虫HSP20可以诱导体液免疫。另外,用本研究制备的BoHSP20蛋白的多克隆抗体对东方巴贝斯虫进行间接免疫荧光试验。结果表明,多抗血清能识别东方巴贝斯虫虫体蛋白,特异性荧光分布于整个虫体表面。两方面实验表明,东方巴贝斯虫HSP20蛋白具有良好的免疫反应原性,可以诱导宿主的体液免疫反应,并且可用于东方巴贝斯虫的间接免疫荧光检测。(4)东方巴贝斯虫HSP20的分子伴侣活性检测本研究发现,将BoHSP20转入大肠杆菌中大量表达可以提高菌株在50℃热激条件下的存活率达2倍以上。另外,重组BoHSP20可抑制BSA在化学变性剂作用下的变性聚集。表明东方巴贝斯虫HSP20蛋白具有分子伴侣活性。本研究成功克隆了BoHsp20基因,该基因与其他巴贝斯虫HSP20基因具有高度保守性;并验证了该蛋白具有良好的免疫反应原性,可以诱导宿主的体液免疫反应,并可用于东方巴贝斯虫的间接免疫荧光试验;最后分析了该小分子热休克蛋白的分子伴侣活性,提示东方巴贝斯虫HSP20具有重要的功能,为东方巴贝斯虫病的防控和免疫机制研究打下了基础。

关键词：东方巴贝斯虫热休克蛋白20 原核表达免疫荧光定位抗体检测分子伴侣活性

热休克蛋白HSP20在胃癌中表达和功能的初步研究

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热休克蛋白HSP20在胃癌中表达和功能的初步研究

作者：龙子阳大连医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:在我国,尽管GC(Gastric cancer,胃癌)的发病率呈逐年递减趋势,但该疾病仍然是癌症致死的第二大原因。手术治疗的进展期患者术后复发和转移率高,且大部分患者对术后全身化疗会产生了耐药性,寻找新的治疗靶点和新的治疗方法尤... 详细信息

背景与目的:在我国,尽管GC(Gastric cancer,胃癌)的发病率呈逐年递减趋势,但该疾病仍然是癌症致死的第二大原因。手术治疗的进展期患者术后复发和转移率高,且大部分患者对术后全身化疗会产生了耐药性,寻找新的治疗靶点和新的治疗方法尤为重要,HIPEC(Hyperthermic introperitoneal chemotherapy,腹腔热灌注化疗)是近年来较新的术后辅助治疗,可将延长进展期胃癌患者的总生存时间,但其作用的分子机制尚未研究。HSP20(Heat shock proteins 20,热休克蛋白20)为热休克蛋白家族中的一员,在肝癌、卵巢癌、肠癌等肿瘤中已有相关研究,在肝癌中已有十余年的系统性研究,HSP20通过调节PI3K/AKT、NF-κB等信号通路抑制肝癌的进展,且与卵巢癌、肠癌的进展呈负相关。HIPEC集合腹腔灌注化疗、热疗和机械冲刷三大特点。HIPEC热疗利用正常胃细胞相较于胃癌细胞更高的耐热性发挥作用。在本研究中,我们的目的是分析胃癌患者癌组织及癌旁组织中HSP20的蛋白差异表达,分析其与胃癌患者临床病理特征之间关系,分析HSP20对胃癌增殖、侵袭和迁移的影响,分析HIPEC中的热疗能否促进胃癌细胞中HSP20的特异性增高。因此本研究的目的是为胃癌治疗探索新的治疗靶点,使HSP20有望成为胃癌HIPEC治疗的疗效判断标准并佐证HIPEC热疗通过促进胃癌细胞HSP20的表达而发挥的治疗效果。材料与方法:利用TCGA(The Cancer Genome Atlas,癌症基因组图谱)数据库和GTEx(Genotype-Tissue Expression,组织基因表达)数据库数据分析HSP20m RNA在胃癌组织标本和正常胃组织标本中的表达水平的差异及HSP20的表达与多个临床病理参数分组之间的关系。应用IHC(Immunocytochemistry,免疫组化)检测HSP20蛋白在癌组织及其配对的癌旁组织中的表达水平差异,并分析HSP20差异性表达与各项临床病理参数之间的关系。应用WB(Western blot,蛋白免疫印迹实验)进一步验证16例患者癌组织与配对的癌旁组织中HSP20的蛋白的差异表达。选取AGS和HGC-27两种胃癌细胞系,利用HSP20过表达质粒稳定转染,通过Western blot实验分析HSP20表达量变化,验证是否转染成功;用Western blot实验探索无血清环境下,过表达HSP20能否触动胃癌凋亡级联反应;CCK8实验和平板克隆实验分析HSP20对细胞增殖调控;划痕实验和Tanswell实验分析HSP20对细胞侵袭、迁移的调控。在模拟HIPEC高温条件(43℃)和常温条件(37℃)下,我们用Western blot实验检测HSP20在胃癌细胞、正常胃细胞、HEK-293T细胞及其它肿瘤细胞中的表达差异。结果:生信分析胃癌组织中HSP20的表达显著低于正常胃组织及多个临床病理参数分组之间相关;Western blot结果客观显示胃癌组织中HSP20的表达显著低于配对癌旁组织;IHC实验结果显示胃癌组织中HSP20的表达显著低于配对癌旁组织且与多个临床病理参数分组之间呈负相关;HSP20与胃癌的TNM分期、病理分级和肿瘤大小临床病理特征有一定相关性;在胃癌细胞中,HSP20的过表达触发了胃癌细胞部分凋亡级联反应,抑制了胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。在模拟HIPEC高温条件(43℃)和常温条件(37℃)下,MKN-45、AGS、NCI-N87和MGC-803四种胃癌细胞系的HSP20表达在43℃条件下显著增加,我们还观察到在43℃条件下,胃癌细胞系HGC-27、人肾上皮细胞系HEK-293T,人膀胱癌细胞系RT4、人肠癌细胞系SW480、人肺癌细胞系A549和人乳腺癌细胞系MDA-MB-468中HSP20的表达没有明显变化。结论:1、相较于癌旁组织,HSP20在胃癌组织中低表达。2、HSP20的表达与部分临床病理特征呈负相关。3、HSP20的过表达激活了胃癌细胞凋亡级联反应的发生,抑制了胃癌细胞的增殖、侵袭和迁移。4、HIPEC高温可促进HSP20在多数胃癌细胞中的特异性高表达。

关键词：热休克蛋白20 胃癌细胞增殖细胞侵袭和迁移 HIPEC

牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exon)融合蛋白间接ELISA检测方法的建立

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新疆农业科学 2010年第5期47卷 980-985页

作者：简子健马素贞孙其喆沈炯玉苗中秋吕伟新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

【目的与方法】以纯化的牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exons)融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了检测牛双芽巴贝斯虫血清特异性抗体的新型间接ELISA方法。【结果】方阵试验确定的GST-HSP20抗原的最适包被浓度为5μg/mL,血... 详细信息

【目的与方法】以纯化的牛双芽巴贝斯虫GST-HSP20(exons)融合蛋白作为检测抗原,通过优化ELISA反应条件,建立了检测牛双芽巴贝斯虫血清特异性抗体的新型间接ELISA方法。【结果】方阵试验确定的GST-HSP20抗原的最适包被浓度为5μg/mL,血清最佳稀释倍数为40倍,ELISA阳性反应的临界值为OD450≥0.292,批内和批间重复试验的变异系数均小于10%。HSP20间接ELISA方法能排除GST的干扰,与其它梨形虫病无交叉反应,与巢式PCR检测方法的阳性符合率为96%。【结论】所建立的ELSIA检测法重复性好、特异性强、灵敏度高。这是国内首次利用重组蛋白建立的牛双芽巴贝斯病血清学诊断方法,为大规模地进行牛巴贝斯虫病的流行病学调查和血清学诊断提供有效的技术手段。

关键词：牛双芽巴贝斯虫热休克蛋白20 重组抗原间接ELISA 比对

多房棘球绦虫HSP20蛋白的生物信息学分析、重组表达及泡球蚴的体外培养

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多房棘球绦虫HSP20蛋白的生物信息学分析、重组表达及泡球蚴的体...

作者：孙萃萍兰州大学

学位级别：硕士

目的：利用生物信息学方法对多房棘球绦虫热休克蛋白20(EmHSP20)的结构和功能进行预测分析,并在大肠杆菌原核表达系统中表达EmHSP20重组蛋白。方法：利用多种生物信息学软件对EmHSP20的结构和功能进行预测分析。将多房棘球绦虫HSP20编... 详细信息

目的：利用生物信息学方法对多房棘球绦虫热休克蛋白20(EmHSP20)的结构和功能进行预测分析,并在大肠杆菌原核表达系统中表达EmHSP20重组蛋白。方法：利用多种生物信息学软件对EmHSP20的结构和功能进行预测分析。将多房棘球绦虫HSP20编码序列整合到pET-28b(+)载体质粒上,然后转化入DH5a菌株,双酶切和测序鉴定重组质粒,然后将其转化入Rosetta(DE3)表达菌株,经诱导表达后用镍柱纯化,Western Blot鉴定重组蛋白并进行纯度分析和浓度测定。结果：EmHSP20基因全长1261bp,编码序列长945bp,编码314个氨基酸,理论相对分子质量为35843.7Da,等电点为5.92。EmHSP20无信号肽,无跨膜区,属胞内蛋白。EmHSP20含有典型的两个α-晶体结构域;富含4种类型的蛋白质功能位点,主要是磷酸化位点,说明磷酸化是其重要的翻译后修饰;含有8个蛋白质结合位点,可与多种蛋白质相结合。成功构建了EmHSP20重组质粒及原核表达体系,经Western Blot鉴定所得蛋白确为HSP20, SDS-PAGE分析显示蛋白纯度较高,测定浓度为1.1mg/mL。结论：通过生物信息学方法获得了EmHSP20的基本信息,成功构建了EmHSP20重组子,并利用大肠杆菌原核表达系统高效表达了EmHSP20,为进一步研究其免疫保护力及生物学功能奠定了基础。目的:用不同血清和培养基体外培养泡球蚴,以寻找更适合泡球蚴生长的体外培养条件。方法:分别采用DMEM、RPMI1640培养基和脂牛血清、小鼠血清、马血清不同条件体外培养泡球蚴,记录其生长情况并观察囊泡形态和超微结构,寻找更适合泡球蚴生长的体外培养条件。结果：经不同条件体外培养泡球蚴,发现DMEM-小鼠血清的培养条件下泡球蜘生长速度最快,囊泡数达34个,DMEM-胎牛血清培养条件下囊泡数为26个,RPMI1640-小鼠血清13个,RPMI1640-胎牛血清9个,而DMEM-马血清和RPMI1640-马血清的条件下无囊泡生长。小鼠血清培养的裹泡体积整体较胎牛血清培养的窦泡体积偏小。透射电镜观察四种囊泡超微结构无差异。结论:体外培养结果显示,小鼠血清比常规使用的胎牛血清、马血清更适合泡球蚴生长,DMEM比RPMI1640更造合泡球蚴生长。

关键词：多房棘球绦虫热休克蛋白20 生物信息学泡球蚴体外培养

丹红注射液对沙鼠前脑缺血再灌注后脑组织的神经保护作用

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中国临床药理学杂志 2021年第3期37卷 255-257,261页

作者：周洁曾晓云罗志秀伍俊伊朱扬晏桂林武汉市第四医院神经内科湖北武汉430033

目的探讨丹红注射液干预后对沙鼠前脑短暂性缺血再灌注的保护作用,及对热休克蛋白20(HSP20)和促红细胞生成素(EPO)表达的影响。方法将雄性蒙古沙鼠的双侧颈总动脉分离并夹闭10 min后恢复灌注血流建立前脑缺血再灌注模型。按照体重将沙... 详细信息

目的探讨丹红注射液干预后对沙鼠前脑短暂性缺血再灌注的保护作用,及对热休克蛋白20(HSP20)和促红细胞生成素(EPO)表达的影响。方法将雄性蒙古沙鼠的双侧颈总动脉分离并夹闭10 min后恢复灌注血流建立前脑缺血再灌注模型。按照体重将沙鼠随机分为3组:假手术组,模型组和实验组,每组10只。实验组在造模前1天腹腔注射丹红注射液(8 mL·kg^(-1),qd)。造模后,分别于再灌注后第6 h以及第1,3和7天,用改良的神经功能缺损评分(MNSs)评价小鼠的运动功能,用免疫组织化学染色法检测HSP20和EPO水平(阳性细胞计数)。结果假手术组、模型组和实验组的MNSs分别为5.17±0.31,8.63±1.02和5.47±1.03;于第3天,这3组的HSP20表达量分别为4.70±0.91,95.10±2.18和118.2±1.61;这3组的EPO表达量分别为7.80±0.87,79.10±1.51和97.10±2.46。上述指标:模型组与假手术组相比,差异均有统计学意义(均P20和EPO的表达,进而改善脑功能。

关键词：缺血再灌丹红注射液热休克蛋白20 促红细胞生成素

GRP78和HSP20在左半结肠癌和右半结肠癌差异表达的初步研究

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GRP78和HSP20在左半结肠癌和右半结肠癌差异表达的初步研究

作者：李小龙中南大学

学位级别：硕士

目的通过检测GRP78蛋白和HSP20蛋白在左半结肠癌和右半结肠癌及相应癌旁组织的表达,初步探讨其临床病理学意义及与左半结肠癌和右半结肠癌发生、发展的关系,为左半和右半结肠癌在肿瘤生物学方面的差异提供分子遗传学依据。方法 ... 详细信息

目的通过检测GRP78蛋白和HSP20蛋白在左半结肠癌和右半结肠癌及相应癌旁组织的表达,初步探讨其临床病理学意义及与左半结肠癌和右半结肠癌发生、发展的关系,为左半和右半结肠癌在肿瘤生物学方面的差异提供分子遗传学依据。方法收集经病理确诊的人左半结肠癌（LSCC）及右半结肠癌（RSCC）组织标本各50例,及LSCC、RSCC相应癌旁组织各50例;应用免疫组化染色SP法,检测GRP78和HSP20的表达,并分析其各自与结肠癌不同临床病理特征及相互之间的关系。结果 ***78的阳性表达率在结肠癌与癌旁组织分别为78%、32%,X2检验提示有显著性差异（X2=24.502,p＜0.05）;在左半结肠癌组、右半结肠癌组、左半结肠癌旁（LSPT）组、右半结肠癌旁（RSPT）组GRP78阳性表达率分别为：78%、56%、32%、36%,在LSCC组与RSCC组间（χ2=10.945, p＜0.05）、LSCC组与LSPT组之间（χ2=42.747, p＜0.05）、RSCC组与RSPT组之间（X2=8.052,p＜0.05）的差异有统计学意义。病理特征分析显示GRP78蛋白与肿瘤的分化程度、浸润层次、有无淋巴结转移、有无肝转移以及TNM分期有关（p＜0.05）,而与患者的年龄、性别、肿瘤大体形态无关。 ***20的阳性表达率在结肠癌与癌旁组织分别为53%、41%,差异无统计学意义（X2=2.890,p＞0.05）。在LSCC组、RSCC组、LSPT组、RSPT组阳性表达率分别为：34%、72%、36%、46%。在LSCC组与RSCC组间（χ2=28.984, p＜0.05）、RSCC组与RSPT组之间（X2=13.973,p＜0.05）的差异有统计学意义。病理特征分析显示HSP20的阳性率与肿瘤的大体形态、有无淋巴结转移以及TNM分期有关（p＜0.05）,而与患者的分化程度、浸润层次、年龄、性别、有无肝转移无关（p＞0.05）。 ***等级相关性分析显示GRP78与HSP20在结肠癌中的表达无明显相关性（r=-0.115,p＞0.05）。结论 ***78在结肠癌组织中表达上调,且在LSCC表达较RSCC组织上调明显;GRP78的表达与结肠癌的分化程度、浸润层次、有无淋巴结转移、有无肝转移以及TNM分期有关;***20在结肠癌组织与癌旁组织中表达无明显差异,在RSCC表达较LSCC上调;HSP20的表达与结肠癌的肿瘤大体形态、有无淋巴结转移以及TNM分期有关;3.结肠癌中GRP78和HSP20的表达无相关性。 4.左半结肠癌和右半结肠癌中GRP78和HSP20的差异表达,可能是左半和右半结肠癌生物学行为差异的原因之一。

关键词：左半结肠癌右半结肠癌葡萄糖调节蛋白78 热休克蛋白20 免疫组化