检索结果-南通市图书馆

刺芒柄花素在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中保护作用的研究

同方期刊数据库评论

在线全文

同方期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

临床医学进展 2024年第4期14卷 385-393页

作者：丰竹慧李翠青岛大学附属医院眼科山东青岛

刺芒柄花素(Formononetin, FMN),又称芒柄花素、芒柄花黄素,是一种异黄酮类中药单体,主要存在于黄芪、红车轴草、葛根等豆科植物中。最近的大量研究表明,刺芒柄花素具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗菌、抗肿瘤和雌激素样作用等,药用价值高... 详细信息

刺芒柄花素(Formononetin, FMN),又称芒柄花素、芒柄花黄素,是一种异黄酮类中药单体,主要存在于黄芪、红车轴草、葛根等豆科植物中。最近的大量研究表明,刺芒柄花素具有抗炎、抗氧化、抗凋亡、抗菌、抗肿瘤和雌激素样作用等,药用价值高。然而,刺芒柄花素在真菌性角膜炎中的作用尚未被报道。本文旨在研究刺芒柄花素在烟曲霉菌性角膜炎中的保护作用。方法:在体外使用CCK-8试剂盒检测刺芒柄花素的毒性作用。用灭活的烟曲霉菌菌丝预先刺激RAW264.7细胞1小时,随后将刺芒柄花素溶液或DMSO溶液加入共培养7小时,通过PCR检测RAW264.7细胞炎症因子的mRNA表达水平。为了进一步明确刺芒柄花素在体内对角膜炎的治疗作用及炎症因子水平的影响,我们将烟曲霉菌孢子通过角膜基质内注射建立小鼠烟曲霉菌角膜炎模型,并使用刺芒柄花素溶液或DMSO溶液局部点眼治疗,通过PCR实验检测炎症因子的表达水平。结果:刺芒柄花素对RAW264.7细胞的存活能力影响小。与DMSO处理组相比,刺芒柄花素处理可以降低灭活菌丝刺激导致的细胞中炎症因子的表达升高。此外,在体内实验中,刺芒柄花素可以减轻小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度,减低感染角膜中炎症因子的表达。结论:刺芒柄花素可以降低小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症因子表达水平起到抗炎保护作用。

关键词：烟曲霉菌性角膜炎刺芒柄花素抗炎

血小板细胞膜仿生纳米系统在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

临床医学进展 2024年第4期14卷 2045-2054页

作者：张芸凤刘星田怡然林静青岛大学附属医院眼科山东青岛

目的:构建一种血小板细胞膜包覆聚乳酸–羟基乙酸聚合物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA)的仿生纳米系统(PLTm@PLGA),评估其在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用。方法:制备并表征PLTm@PLGA。通过CCK-8、溶血试验检测生物安全性。实... 详细信息

目的:构建一种血小板细胞膜包覆聚乳酸–羟基乙酸聚合物(poly (lactic-co-glycolic acid), PLGA)的仿生纳米系统(PLTm@PLGA),评估其在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用。方法:制备并表征PLTm@PLGA。通过CCK-8、溶血试验检测生物安全性。实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测烟曲霉菌刺激RAW264.7细胞后炎症因子TNF-α、IL-1β的mRNA表达水平。建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,观察治疗效果并进行炎症评分。结果:PLTm@PLGA呈球形,表现为典型的“壳–核”结构,其粒径为234.3 ± 8.9 nm。PLGA、PLTm@PLGA无明显细胞毒性,血液相容性好。PLTm@PLGA显著抑制RAW264.7细胞中TNF-α、IL-1β mRNA表达。PLTm@PLGA处理组临床炎症评分显著下降。结论:PLTm@PLGA具有良好生物相容性,抑制促炎细胞因子表达,减轻了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的炎症反应。

关键词：血小板细胞膜聚乳酸–羟基乙酸聚合物抗炎烟曲霉菌性角膜炎

烟曲霉菌性角膜炎中HMGB1通过LOX-1发挥炎症放大作用

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

烟曲霉菌性角膜炎中HMGB1通过LOX-1发挥炎症放大作用

作者：蒋佳倩青岛大学

学位级别：硕士

目的:探讨高迁移率组box 1(HMGB1)在烟曲霉角膜炎中的炎症放大作用及LOX-1与HMGB1在角膜免疫应答中的关系。方法:1、BALB/c小鼠随机分为单纯PBS预处理组,单纯Boxb预处理组,PBS预处理+烟曲霉菌性角膜炎组,Boxb预处理+烟曲霉菌性角膜炎组... 详细信息

目的:探讨高迁移率组box 1(HMGB1)在烟曲霉角膜炎中的炎症放大作用及LOX-1与HMGB1在角膜免疫应答中的关系。方法:1、BALB/c小鼠随机分为单纯PBS预处理组,单纯Boxb预处理组,PBS预处理+烟曲霉菌性角膜炎组,Boxb预处理+烟曲霉菌性角膜炎组。PBS或Boxb结膜下注射对小鼠角膜进行预处理,采用直接刮上皮法建立烟曲霉菌感染BALB/c小鼠真菌性角膜炎1 d,3 d,5 d模型,观察小鼠真菌性角膜炎炎症进展并记录临床评分。采用RT-PCR法检测小鼠角膜模型中LOX-1表达。2、BALB/c小鼠腹腔内注射1 ml 9%酪蛋白,24 h后给予相同刺激,再次刺激3 h后提取腹腔中性粒细胞。分别用PBS,Boxb预处理RAW264.7巨噬细胞系或腹腔提取中性粒细胞2小时后加入灭活烟曲霉菌菌丝,采用RT-PCR技术检测菌丝刺激12 h后细胞内LOX-1,Detin-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10 mRNA变化,采用western blot技术检测菌丝刺激24 h后LOX-1,IL-1β,TNFα蛋白水平变化。3、BALB/c小鼠腹腔注射3%硫代乙醇酸钠1周,提取小鼠腹腔巨噬细胞,将细胞分为正常组,烟曲霉菌刺激组,Boxb预处理+烟曲霉菌刺激组,Boxb、Poly(I)(LOX-1抑制剂)预处理+烟曲霉菌刺激组,采用RT-PCR技术检测菌丝刺激细胞12 h后检测细胞内LOX-1,TNFα,MIP-2和IL-10 mRNA变化,采用western blot技术检测菌丝刺激24 h后LOX-1,IL-1β,TNFα蛋白水平变化。结果:1、在真菌感染模型中,与PBS对照组相比,Boxb预处理组炎症表现更重,临床评分更高,LOX-1在Boxb预处理组表达显著高于PBS对照组。在单纯用PBS和Boxb预处理模型中,LOX-1表达无明显出差异。2、在烟曲霉菌菌丝刺激的RAW264.7巨噬细胞系与腹腔提取中性粒细胞中,Boxb预处理组LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达显著升高,差距有统计学意义,Detin-1表达无明显变化;无烟曲霉菌菌丝刺激的细胞中,Boxb预处理组LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达无明显变化。3、在BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞中,与单纯加菌组相比,Boxb预处理组中LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达显著升高,差距有统计学意义;与Boxb预处理组相比,Boxb+Poly(I)预处理组LOX-1,IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达显著降低,差异有统计学意义。结论:BALB/c小鼠烟曲霉菌角膜炎中,Boxb预处理组角膜组织炎症程度加重,临床评分增加,提示HMGB1在真菌性角膜炎起促炎作用。HMGB1在真菌性角膜炎的先天免疫过程中刺激中性粒细胞和巨噬细胞LOX-1和炎症因子IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10表达增加,而Dectin-1表达无明显变化,提示HMGB1在烟曲霉菌角膜炎中的促炎作用与LOX-1有关而与Dectin-1无关。小鼠腹腔巨噬细胞系中Boxb促进上述因子表达升高,而Boxb与LOX-1抑制剂Poly(I)同时作用后可以下调LOX-1及炎症因子IL-1β,TNFα,MIP-2和IL-10的表达,进一步说明LOX-1参与HMGB1诱导的烟曲霉菌角膜炎炎症放大效应。

关键词： HMGB1 LOX-1 烟曲霉菌性角膜炎

木犀草素通过TLR4/MyD88信号通路对大鼠烟曲霉菌性角膜炎的调控作用

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

吉林大学学报（医学版） 2021年第2期47卷 315-322页

作者：张淑荣张琦颖齐齐哈尔医学院附属第三医院眼科黑龙江齐齐哈尔161000

目的:探讨木犀草素通过Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化因子88 (MyD88)信号通路对大鼠烟曲霉菌性角膜炎(AFK)的调控作用,阐明其抑制AFK炎症反应的机制。方法:100只SD大鼠随机选取15只作为假手术组[未注入烟曲霉菌(AF)孢子混悬液],其余85只... 详细信息

目的:探讨木犀草素通过Toll样受体4 (TLR4)/髓样分化因子88 (MyD88)信号通路对大鼠烟曲霉菌性角膜炎(AFK)的调控作用,阐明其抑制AFK炎症反应的机制。方法:100只SD大鼠随机选取15只作为假手术组[未注入烟曲霉菌(AF)孢子混悬液],其余85只大鼠采用AF孢子混悬液注入法建立AFK模型。建模成功的72只大鼠随机分为模型组14只、低剂量木犀草素组14只、中剂量木犀草素组14只、高剂量木犀草素组15只和脂多糖(LPS)+木犀草素组15只。低、中和高剂量木犀草素组大鼠给予浓度为5、10和20 g·L~(-1)木犀草素溶液局部滴眼50μL,假手术组和模型组大鼠给予等量1%DMSO溶液局部滴眼,LPS+木犀草素组大鼠给予20 g·L~(-1)木犀草素溶液50μL和LPS溶液1.0μg局部滴眼,连续7 d。观察各组大鼠角膜大体变化并评估各组大鼠角膜炎症指数;制备各组大鼠角膜组织标本,采用HE染色法观察角膜组织病理形态表现;采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组大鼠角膜组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素12(IL-12)水平,采用Western blotting法检测各组大鼠角膜组织中TLR4、MyD88和核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达水平。结果:假手术组大鼠角膜组织上皮完整,无炎性细胞浸润;模型组和LPS+木犀草素组大鼠角膜呈现白色致密溃疡灶,水肿且表面无光泽,虹膜不可见,LPS+木犀草素组溃疡灶面积更大;低、中和高剂量木犀草素组大鼠角膜溃疡灶面积逐渐变小,病变减轻。HE染色,模型组和LPS+木犀草素组大鼠角膜均可见胶原纤维肿胀、排列紊乱,大量炎性细胞浸润;低、中和高剂量木犀草素组上述变化均减轻,其中高剂量木犀草素组减轻最为明显。与模型组比较,低、中和高剂量木犀草素组大鼠角膜炎症指数和角膜组织中IL-1β、TNF-α、IL-12水平及TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达水平明显降低(P角膜炎症反应,其作用机制可能与抑制TLR4/MyD88信号通路相关蛋白表达及其下游炎症因子有关。

关键词：烟曲霉菌性角膜炎木犀草素 Toll样受体4 髓样分化因子88 炎症因子

异硫氰酸苄酯对小鼠烟曲霉菌性角膜炎治疗作用及机制的研究

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

异硫氰酸苄酯对小鼠烟曲霉菌性角膜炎治疗作用及机制的研究

作者：易雯丹青岛大学

学位级别：硕士

目的:探究异硫氰酸苄酯(Benzyl isothiocyanate,BITC)对烟曲霉菌的抗菌机制和在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中治疗作用。方法:通过CCK-8实验检测永生化人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCECs)、小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)细胞活... 详细信息

目的:探究异硫氰酸苄酯(Benzyl isothiocyanate,BITC)对烟曲霉菌的抗菌机制和在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中治疗作用。方法:通过CCK-8实验检测永生化人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCECs)、小鼠巨噬细胞(RAW 264.7)细胞活性及Draize眼毒性试验获得BITC体内及体外验安全浓度。在体外,采用最低抑菌浓度法、钙荧光白染色法、时间—杀菌曲线评估BITC对烟曲霉菌的抑菌活性;通过碘化丙啶摄取法、活性氧(ROS)检测试剂盒、黏附实验和结晶紫染色法检测BITC对烟曲霉菌细胞膜完整性的破坏、烟曲霉菌细胞内ROS积累量、对烟曲霉菌孢子粘附抑制作用以及对真菌生物膜破坏情况。建立烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型,使用BITC或者DMSO结膜下注射处理小鼠角膜,分别在感染后第3天和第5天在裂隙灯下观察、拍照并进行临床评分,通过临床评分和平板计数评估BITC对小鼠烟曲霉菌性角膜炎的疗效。对感染后第3天和第5天角膜进行苏木精-伊红(HE)染色评价BITC对炎症细胞浸润的影响;通过髓过氧化物酶(MPO)试剂盒对小鼠感染后3天角膜的中性粒细胞进行定量。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、Western Blot和ELISA评估感染后第3天和第5天角膜中IL-1β、TNF-α、IL-6以及Mincle的m RNA和蛋白表达情况。BITC预处理2小时后,加入灭活的烟曲霉菌菌丝刺激RAW264.7细胞,用qRT-PCR、ELISA和Western Blot分别检测烟曲霉菌刺激8小时、24小时后IL-1β、TNF-α、IL-6和M incle的m RNA和蛋白表达情况。使用BITC预处理2小时,随后加入Trehalose-6,6-dibehenate(TDB)刺激RAW264.7细胞,通过qRT-PCR和ELISA分别检测刺激8小时、24小时后IL-1β、TNF-α和IL-6的m RNA和蛋白水平表达情况,Western Bl ot和免疫荧光检测TDB刺激24小时后的Mincle蛋白的表达水平。结果:1.0-100μg/m L BITC对HCECs的细胞活性无影响,0-6μg/m L BITC对RAW264.7的细胞活性无影响;Draize眼毒性试验结果显示浓度为400μg/m L BITC对小鼠角膜无毒性。2.在体外实验中,BITC在25μg/m L以上具有抗真菌作用,对烟曲霉菌的抗菌作用具有浓度和时间依赖性。BITC损伤烟曲霉菌细胞膜完整性、线粒体形态及功能,抑制烟曲霉菌对HCECs黏附作用以及破坏生物膜。3.在小鼠真菌性角膜炎模型中,与DMSO相比,200μg/m L BITC处理组临床评分显著降低,感染角膜的真菌负荷明显减少,角膜中的炎症细胞浸润和中性粒细胞数量明显减少。qRT-PCR、Western Blot和ELISA实验结果表明,BITC组感染角膜中的炎症因子IL-1β、TNF-α及IL-6以及模式识别受体Mincle的m RNA及蛋白表达较DMSO处理组显著减少。***-PCR、Western Blot、ELISA以及免疫荧光实验结果表明,在灭活菌丝或TDB刺激RAW264.7小鼠巨噬细胞,3μg/m L BITC显著下调了Mincle以及IL-1β、TNF-α和IL-6的m RNA及蛋白表达。结论:BITC能破坏烟曲霉菌的细胞膜、线粒体、真菌粘附和生物膜的形成,对烟曲霉菌具有杀菌活性。BITC改善了烟曲霉菌性角膜炎的炎症评分,减少了感染角膜的真菌负荷,减少了角膜中炎性细胞的浸润和促炎细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-6的水平,在烟曲霉菌性角膜炎中发挥保护作用。BITC可能通过下调模式识别受体Mincle来发挥抗炎作用。

关键词：异硫氰酸苄酯烟曲霉菌性角膜炎抗真菌抗炎 Mincle

双硫仑对小鼠烟曲霉菌性角膜炎的作用及机理研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

双硫仑对小鼠烟曲霉菌性角膜炎的作用及机理研究

作者：闫海静青岛大学

学位级别：硕士

目的:探究双硫仑(Disulfiram)对感染烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus,***)的小鼠角膜炎症反应的作用和机理研究。方法:1.利用细胞增殖检测试剂盒-8(Cell counting kit-8,CCK-8)检测disulfiram对人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCECs)增殖分裂能力的影响,从而获取无毒性的disulfiram浓度范围;通过伤口愈合实验观察Disulfiram对HCECs细胞迁移能力的影响,确定无毒性并且不影响溃疡愈合的浓度作为后续实验浓度。***干预对小鼠真菌性角膜炎的影响:小鼠随机分为真菌性角膜炎组和真菌性角膜炎用药干预组。用烟曲霉菌来感染C57BL/6小鼠角膜。真菌性角膜炎用药干预组在建模前一天及建模后每天球结膜下注入浓度为20μM的Disulfiram溶液5μl,真菌性角膜炎组用相同方式给予等量DMSO。建模后第1、3、5天在裂隙灯显微镜下拍照观测小鼠角膜混浊面积、混浊程度及溃疡形态,同时进行临床评分。3.采用荧光抗体技术对中性粒细胞及巨噬细胞进行标记,利用髓过氧化物酶法(myeloperoxidase,MPO)定量监测中性粒细胞,利用一氧化氮合酶法(nitric oxide synthase,NOS)定量监测巨噬细胞,探讨Disulfiram对实验小鼠角膜基质内中性粒细胞、巨噬细胞募集水平的影响。***影响小鼠真菌性角膜炎的作用机理:用烟曲霉菌感染C57BL/6小鼠角膜。用药组及真菌性角膜炎用药干预组在感染前1天及真菌感染后每天球结膜下注入浓度为20μM的Disulfiram溶液5μl,对照组及真菌性角膜炎组球结膜下注入等量DMSO。建模3天后在无菌条件下处死实验小鼠取角膜,角膜中焦亡相关蛋白(Gasdermin D,GSDMD)、半胱氨酸蛋白酶-1(cysteine-aspartic proteases-1,caspase-1)及促炎细胞因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)m RNA的表达应用聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法检测,相应蛋白的表达采用蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)测定。***影响真菌感染的细胞模型的作用机制:将人外周血中性粒细胞、小鼠腹腔巨噬细胞根据实验需求分别分为4组。用药组和真菌刺激用药干预组的细胞培养液中加入浓度为20μM的Disulfiram。往另外两组的细胞培养液中加入等量DMSO。真菌刺激8小时后收集样本,采用PCR法测定各组细胞中IL-1βm RNA的表达量,16小时后收集样本,采用Western Blot法测定各组细胞中IL-1βp31蛋白的表达量,16小时后收集细胞上清液,采用酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测定各组细胞中IL-1βp17蛋白的分泌量。***联合那他霉素滴眼液在治疗烟曲霉菌性角膜炎中的效果:小鼠随机分为两组:单药治疗组、联合治疗组。联合治疗组采用建模后每天采取结膜下注入Disulfiram溶液(5μl,20μM),单药治疗组结膜下注入等量DMSO。二组均规律使用那他霉素滴眼液(浓度为250g/L)滴眼。通过裂隙灯观测小鼠角膜炎症反应情况,进行临床评分。结果:1.不超过20μM的Disulfiram溶液浓度对细胞增殖分裂和迁移能力无显著的抑制作用。2.与真菌性角膜炎组相比,真菌性角膜炎用药干预组在感染初期(感染后第1、3天),小鼠角膜的混浊程度较轻,临床评分也较低,第5天混浊程度较重,临床评分较高。3.真菌性角膜炎用药干预组小鼠角膜基质层中性粒细胞以及巨噬细胞的染色标记较真菌性角膜炎组减少,MPO和NOS活性明显下降。***对小鼠烟曲霉菌性角膜炎的角膜中GSDMD、caspase-1、IL-1β的m RNA及蛋白水平无明显影响。***可抑制巨噬细胞中IL-1βp17的分泌,而对中性粒细胞中IL-1βp17的分泌无明显影响。6.与单药治疗组相比,联合治疗组的小鼠角膜混浊程度明显减轻,临床评分明显降低。结论:***能够减少真菌性角膜炎早期小鼠角膜内炎性细胞的募集。***对IL-1β、GSDMD、caspase-1的m RNA及蛋白生成无明显影响。***能够抑制巨噬细胞IL-1βp17的释放,但对中性粒细胞无明显影响。***联合抗真菌药物有助于保护小鼠烟曲霉菌性角膜炎时角膜的透明性。

关键词：烟曲霉菌性角膜炎 Disulfiram 中性粒细胞巨噬细胞 IL-1β

白屈菜红碱在烟曲霉菌性角膜炎中的作用及机制的研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

白屈菜红碱在烟曲霉菌性角膜炎中的作用及机制的研究

作者：綦英合青岛大学

学位级别：硕士

目的:探讨白屈菜红碱对烟曲霉菌的抗菌活性,以及在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用及相关机制。方法:1.采用CCK-8实验和Draize眼表毒性实验分别检测不同浓度的白屈菜红碱对永生化人角膜上皮细胞(HCECs)和小鼠角膜的毒性作用。2.采用最低... 详细信息

目的:探讨白屈菜红碱对烟曲霉菌的抗菌活性,以及在烟曲霉菌性角膜炎中的抗炎作用及相关机制。方法:1.采用CCK-8实验和Draize眼表毒性实验分别检测不同浓度的白屈菜红碱对永生化人角膜上皮细胞(HCECs)和小鼠角膜的毒性作用。2.采用最低抑菌浓度试验、扫描电子显微镜、透射电子显微镜、碘化丙啶摄取试验、Calcofluor white染色和结晶紫染色评估白屈菜红碱的体外抗真菌作用。3.建立C57BL/6小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,并于感染后1-5天给予实验组小鼠2μg/mL的白屈菜红碱溶液点眼处理,对照组小鼠0.1%DMSO溶液或8μg/mL那他霉素溶液点眼处理,通过裂隙灯拍照和临床评分评估白屈菜红碱对烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型的治疗作用;采用平板菌落计数法检测小鼠角膜中的真菌负荷量;采用苏木精-伊红染色检测小鼠角膜中炎症细胞浸润情况。4.通过对小鼠角膜进行免疫荧光染色观察白屈菜红碱对中性粒细胞募集、浸润的影响,采用髓过氧化物酶(MPO)实验检测中性粒细胞的活性。5.在动物及细胞烟曲霉菌炎症模型中,通过RT-PCR检测促炎细胞因子IL-1β和IL-6以及通路因子Nrf2、HO-1及LOX-1的m RNA表达;通过ELISA检测IL-1β和IL-6的蛋白表达;采用Western Blot检测LOX-1的蛋白表达以及p38 MAPK磷酸化情况。6.使用LOX-1质粒和空白质粒对HCECs进行转染,通过Western Blot检测LOX-1的蛋白表达和p38 MAPK的磷酸化,采用ELISA检测下游炎症因子IL-1β和IL-6的蛋白表达,评估白屈菜红碱对LOX-1/p38 MAPK信号通路的作用。结果:1.2μg/mL浓度范围内的白屈菜红碱不影响HCECs的细胞活性且对小鼠角膜无毒性作用。2.在体外试验中,白屈菜红碱抑制烟曲霉分生孢子的生长,减少真菌菌丝的存活,破坏真菌的形态结构,并抑制真菌生物膜的形成。3.在烟曲霉菌性角膜炎小鼠模型中,2μg/mL白屈菜红碱显著改善了小鼠烟曲霉菌性角膜炎的严重程度,减少角膜真菌负荷,并且抑制炎症细胞浸润。4.免疫荧光结果提示白屈菜红碱可减轻烟曲霉菌性角膜炎中粒细胞募集、浸润;MPO结果显示白屈菜红碱可降低中性粒细胞活性。5.在体内、外炎症反应实验中,RT-PCR结果提示2μg/mL白屈菜红碱降低IL-1β、IL-6以及LOX-1的m RNA表达,同时升高Nrf2和HO-1的m RNA表达;ELISA结果表明2μg/mL白屈菜红碱可以抑制IL-1β,L-6的蛋白表达;Western Blot结果显示2μg/mL白屈菜红碱升高Nrf2和HO-1的蛋白表达,降低LOX-1的蛋白表达,抑制p38 MAPK磷酸化。***-1过表达质粒处理显著升高LOX-1蛋白表达水平、p-p38/p38 MAPK的比率以及IL-1β、IL-6的蛋白表达水平。2μg/mL白屈菜红碱预处理下调质粒刺激引起的LOX-1蛋白质表达,p38 MAPK的磷酸化和下游炎症因子IL-1β、IL-6的表达。结论:在烟曲霉菌性角膜炎中,2μg/mL白屈菜红碱对HCECs和小鼠角膜无明显毒性作用,且可以充分发挥抗菌和抗炎作用。白屈菜红碱通过抑制烟曲霉分生孢子的生长、破坏真菌菌丝的形态结构、减少真菌菌丝的存活、阻止真菌生物膜的形成等发挥抗菌作用;减少中性粒细胞的募集和浸润、下调促炎细胞因子的表达、上调Nrf2和HO-1的表达以及抑制LOX-1/p38 MAPK的信号通路发挥抗炎作用。

关键词：白屈菜红碱烟曲霉菌性角膜炎 LOX-1 p38 MAPK Nrf2

百里香酚在小鼠烟曲霉菌性角膜炎治疗中的作用和机制研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

百里香酚在小鼠烟曲霉菌性角膜炎治疗中的作用和机制研究

作者：王丽梅青岛大学

学位级别：硕士

目的:本实验探究百里香酚对烟曲霉菌诱导的真菌性角膜炎的抗炎作用及其分子机制。方法:1.采用最低抑菌浓度实验(MIC)、菌丝细胞壁荧光染色实验、细胞毒性(CCK-8)实验、细胞划痕实验和角膜荧光素染色实验,确定百里香酚治疗烟曲霉性角膜... 详细信息

目的:本实验探究百里香酚对烟曲霉菌诱导的真菌性角膜炎的抗炎作用及其分子机制。方法:1.采用最低抑菌浓度实验(MIC)、菌丝细胞壁荧光染色实验、细胞毒性(CCK-8)实验、细胞划痕实验和角膜荧光素染色实验,确定百里香酚治疗烟曲霉性角膜炎的安全有效浓度。2.按随机原则将实验小鼠平均分成四组,真菌性角膜炎动物模型的建立采用基质内注射法,建模前、后球结膜下分别注射百里香酚或二甲亚砜(DMSO)。感染的小鼠角膜变化情况通过裂隙灯显微镜观察并打分记录。收集小鼠角膜进行菌落平板计数实验。3.采用免疫荧光法、苏木精-伊红(HE)染色法和髓过氧化物酶(MPO)法检测小鼠角膜基质内炎症细胞的募集情况。4.收集小鼠角膜进行RT-PCR和Western blot实验,检测TLR4、MyD88、NF-kB、IL-1β、NLRP3、caspase-1、caspase-8、GSDMD、RIPK3和MLKL的mRNA及蛋白。5.随机将实验小鼠分为三组,分别为真菌性角膜炎组、百里香酚处理后真菌性角膜炎组和那他霉素处理后真菌性角膜炎组。感染的小鼠角膜变化情况通过裂隙灯显微镜观察并打分记录,然后收集角膜进行菌落平板计数实验,比较百里香酚和那他霉素的治疗效果。结果:1.从浓度为50μg/ml开始,百里香酚显著抑制了烟曲霉菌菌丝生长,并且该浓度培养下的HCECs细胞活力没有受到明显抑制。HCECs细胞划痕后50μg/ml百里香酚培养下划痕能够完全愈合。50μg/ml百里香酚药物点眼后进行角膜荧光素染色,角膜未见明显黄绿色荧光着染。2.裂隙灯下观察到,百里香酚处理后真菌性角膜炎组小鼠角膜更加透明,临床评分更低。烟曲霉菌感染三天后,收集角膜进行平板计数实验,显示百里香酚处理后显著降低了角膜组织中的烟曲霉菌负荷量。3.免疫荧光染色和HE染色显示,百里香酚处理3天后烟曲霉菌性角膜炎小鼠的角膜组织中巨噬细胞和中性粒细胞明显减少。MPO结果示百里香酚减少了中性粒细胞中髓过氧化物酶的活性。***-PCR和Western blot实验显示,百里香酚处理烟曲霉菌性角膜炎1天后,小鼠角膜中表达的TLR4、MyD88、NF-kB和IL-1β被下调。***-PCR和Western blot结果示,百里香酚显著下调了真菌性角膜炎中NLRP3、caspase-1、caspase-8和GSDMD焦亡相关mRNA和蛋白表达,以及下调p17 IL-1β蛋白。***-PCR和Western blot结果示,在烟曲霉菌性角膜炎小鼠的角膜中,百里香酚处理后下调了RIPK3和MLKL坏死性凋亡相关mRNA和蛋白的表达。7.裂隙灯显微镜下观察到,百里香酚处理后真菌性角膜炎组比那他霉素处理后真菌性角膜炎组小鼠角膜更透明,临床评分更低。两者菌落都明显减少,但未见明显差异。结论:百里香酚能直接抑制烟曲霉菌菌丝生长。在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中,百里香酚通过减少角膜中中性粒细胞和巨噬细胞的募集,抑制TLR4/MyD88/NF-kB/IL-1β信号通路,以及通过抑制细胞焦亡和坏死性凋亡通路从而抑制IL-1β的成熟和释放,发挥保护作用。

关键词：烟曲霉菌性角膜炎百里香酚炎症焦亡坏死性凋亡

山奈酚在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中抗菌和抗炎作用的实验研究

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

山奈酚在小鼠烟曲霉菌性角膜炎中抗菌和抗炎作用的实验研究

作者：贾奕奕青岛大学

学位级别：硕士

目的:探讨山奈酚(Kaempferol,KAE)在烟曲霉菌(Aspergullus fumigatus,***)性角膜炎中的抗菌和抗炎作用及其潜在机制。方法:(1)使用CCK-8试剂盒检测不同浓度的KAE对小鼠巨噬细胞RAW264.7和永生化的人角膜上皮细胞(human corneal epitheli... 详细信息

目的:探讨山奈酚(Kaempferol,KAE)在烟曲霉菌(Aspergullus fumigatus,***)性角膜炎中的抗菌和抗炎作用及其潜在机制。方法:(1)使用CCK-8试剂盒检测不同浓度的KAE对小鼠巨噬细胞RAW264.7和永生化的人角膜上皮细胞(human corneal epithelial cells,HCECs)是否有细胞毒性作用,并为后续实验浓度确定药用浓度;(2)建立C57BL/6小鼠烟曲霉菌性角膜炎模型,分别给予KAE和DMSO处理。在感染后第1、3天通过裂隙灯观察两组角膜炎症情况,进行临床炎症评分并拍照记录,并于感染后第3天取角膜行HE染色和平板菌落计数分别观察KAE对角膜组织炎症浸润和真菌负荷的影响;(3)使用免疫荧光法、MPO试剂盒检测KAE对真菌性角膜炎中巨噬细胞和中性粒细胞浸润的影响;(4)通过实时荧光定量PCR(q RT-PCR)评估感染后3天角膜中IL-1β、TNF-α、MIP-2以及模式识别受体TLR4、Dectin-1的m RNA表达水平,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测检测IL-1β、TNF-α、MIP-2的蛋白表达水平,Western Blot检测TLR4、Dectin-1的蛋白表达和p38 MAPK蛋白磷酸化水平;(5)KAE预处理2小时后,使用灭活的烟曲霉菌菌丝刺激小鼠巨噬细胞,分别检测烟曲霉菌刺激8小时、24小时后IL-1β、TNF-α、MIP-2在m RNA和蛋白水平的表达情况,以及烟曲霉菌刺激1小时后的p38 MAPK蛋白磷酸化情况;(6)使用KAE预处理后,Dectin-1特异性激动剂Curdlan刺激RAW264.7细胞,再次检测分别刺激8小时、24小时后TNF-α和MIP-2的m RNA和蛋白水平表达情况,以及刺激1小时后的p38 MAPK磷酸化情况。结果:(1)KAE浓度低于60μg/m L时不影响HCECs的细胞活性,KAE浓度低于30μg/m L时不影响RAW264.7的细胞活性;(2)与DMSO对照组相比,60μg/m L KAE处理组的小鼠的烟曲霉菌性角膜炎病程进展明显变缓,感染后第3天临床评分和角膜真菌负荷均显著降低;(3)与DMSO相比,经过KAE处理的小鼠角膜在感染后3天水肿明显减轻,炎性细胞如中性粒细胞和巨噬细胞的浸润明显减少;(4)q RT-PCR、ELISA和Western Blot结果显示60μg/m L KAE下调了烟曲霉菌诱导的小鼠角膜炎中模式识别受体TLR-4、Dectin-1及炎症相关介质IL-1β、TNF-α、MIP-2的表达,同时减少了促炎通路p38 MAPK的磷酸化激活;(5)30μg/m L KAE下调烟曲霉菌诱导的小鼠巨噬细胞炎症模型中IL-1β、TNF-α、MIP-2的表达,抑制了通路p38 MAPK的磷酸化激活;(6)30μg/m L KAE下调Curdlan诱导的RAW264.7小鼠巨噬细胞炎症模型中TNF-α、MIP-2的表达,抑制了通路p38 MAPK的磷酸化激活。结论:KAE减少烟曲霉菌性角膜炎的小鼠角膜中的真菌负荷、减轻炎症过程中炎性细胞的募集以及减少炎症相关介质IL-1β、TNF-α、MIP-2的表达,从而在真菌性角膜炎中发挥保护作用;KAE的抗炎作用是通过发挥对模式识别受体Dectin-1和促炎通路p38 MAPK的抑制性调控来实现的。

关键词：山奈酚烟曲霉菌性角膜炎 Dectin-1 p38 MAPK