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鲤疱疹病毒Ⅱ潜伏感染的鉴定

鲤疱疹病毒Ⅱ潜伏感染的鉴定

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作者：柴文君华中农业大学

学位级别：硕士

鲤疱疹病毒Ⅱ(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)给我国鲫养殖业带来了巨大的经济损失。有研究提示CyHV-2可形成潜伏感染,但缺乏实验验证,也未见CyHV-2潜伏感染靶器官及其潜伏形式相关的研究。本研究以人工感染的方式,验证了CyHV-2在急性... 详细信息

鲤疱疹病毒Ⅱ(Cyprinid herpesvirus 2,CyHV-2)给我国鲫养殖业带来了巨大的经济损失。有研究提示CyHV-2可形成潜伏感染,但缺乏实验验证,也未见CyHV-2潜伏感染靶器官及其潜伏形式相关的研究。本研究以人工感染的方式,验证了CyHV-2在急性感染之后可形成潜伏感染,在温度应激条件下可从潜伏转为激活状态,并推测脑为CyHV-2潜伏靶组织之一。进而利用本实验室已建立的CyHV-2潜伏感染细胞系分析其潜伏形式,为进一步研究其致病机制奠定了基础。其主要内容如下:1.不同感染状态下CyHV-2相关基因的转录分析以鲫为实验对象,通过PCR和RT-PCR分别检测了急性感染濒死鱼和急性感染后存活鱼(不同时期)中CyHV-2相关基因(DNA聚合酶基因、主要结构蛋白基因ORF99)及其转录情况。结果显示在急性感染濒死和急性感染后存活5个月的样品中,均可检测到CyHV-2相关基因的转录;在急性感染后存活10个月的样品中仅能检测到病毒基因组,未能检测到病毒基因的转录,说明它们是潜伏感染样品。通过温度应激处理,发现病毒DNA聚合酶和结构蛋白基因ORF99发生转录,提示病毒由潜伏感染转为激活状态。***-2的组织分布定量研究以荧光定量PCR分析CyHV-2急性感染、慢性感染、潜伏感染及温度应激后病毒的组织分布,结果显示急性感染样品中各组织的病毒载量都在10copies/μg总DNA左右,其中脾、肾组织最高,脑病毒载量在10-10copies/μg总DNA;慢性感染各组织病毒载量在80-10copies/μg总DNA;潜伏感染鱼各组织病毒载量在0-10copies/μg总DNA之间,相比其它组织,延脑的病毒载量较高;温度应激后,各组织病毒载量都有不同程度的上升,尤其是头肾、中肾和鳃组织。鉴于潜伏感染鱼脑的病毒载量较稳定,且α疱疹病毒潜伏在神经中,推测脑可能是CyHV-2潜伏感染靶器官。***-2潜伏感染存在形式的研究通过重测序本实验室建立的CyHV-2潜伏感染细胞系(CCBLat1),跟鲫基因组(NCBI编号:ASM336829v1)和病毒基因组(SY-C1,KM200722.1)进行对比未能找到病毒相关的序列。提示CyHV-2很可能不是通过整合形式存在,有待进一步验证。

关键词：鲤疱疹病毒Ⅱ 鲫潜伏感染潜伏存在形式

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