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改进型“瑞士卷”法在小鼠肠道组织切片中的应用

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中华病理学杂志 2024年第4期53卷 393-397页

作者：张敏刘生宝张诺肖林雨李文杰王文锋徐梦真胡建国李静左芦根张小凤耿志军王炼王月月宋雪蚌埠医科大学第一附属医院中心实验室蚌埠233004 蚌埠医科大学检验医学院蚌埠233000 炎症相关性疾病基础与转化研究安徽省重点实验室蚌埠233004 蚌埠医科大学第一附属医院检验科蚌埠233004 蚌埠医科大学第一附属医院胃肠外科蚌埠233004

目的为提高小鼠肠管组织石蜡切片的整体质量,探讨一种改进型“瑞士卷”法在肠道组织病理切片中的应用。方法分别采用常规“瑞士卷”制作方法和改进型“瑞士卷”法脱水包埋小鼠回肠、结直肠组织样本,制成组织切片。HE染色用于评估组织切... 详细信息

目的为提高小鼠肠管组织石蜡切片的整体质量,探讨一种改进型“瑞士卷”法在肠道组织病理切片中的应用。方法分别采用常规“瑞士卷”制作方法和改进型“瑞士卷”法脱水包埋小鼠回肠、结直肠组织样本,制成组织切片。HE染色用于评估组织切片整体形态质量、组织器械性损伤及黏膜下层与肌层分离的情况;免疫组织化学染色LYVE-1标记淋巴管、染色CD31标记血管,分析黏膜下层结构完整性;采用免疫荧光染色对小鼠回肠潘氏细胞(溶菌酶阳性)及结直肠杯状细胞(MUC2阳性)予以标记。结果HE染色显示改进型“瑞士卷”组小鼠肠管组织切片整体形态及外观更加规整,组织未发生器械性损伤,且极少见黏膜下层与肌层分离的现象;免疫组织化学结果显示,改进型“瑞士卷”组小鼠肠管组织切片黏膜下层多见完整的淋巴管和血管结构,计数其黏膜下层完整淋巴管和血管的数量分别为(701.0±46.7)条和(881.6±58.7)条,显著高于常规方法组(149.5±23.6)条和(122.9±20.2)条(P潘氏细胞及结直肠杯状细胞定位准确,极少见细胞结构缺失的情况。结论改进型“瑞士卷”法保护全层和全段肠管的完整性,减少操作带来的组织损伤,改善黏膜下层和肌层分离的现象,为小鼠肠道疾病的研究提供了一种更为可靠的技术。

关键词：组织病理切片潘氏细胞黏膜下层血管结构组织切片 MUC2 免疫组织化学组织损伤

易感基因-潘氏细胞-肠道微生态轴在炎症性肠病中的作用

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中华炎性肠病杂志（中英文） 2022年第1期6卷 83-86页

作者：徐鹏飞周千惠廖雨晗庄文涵庄奇叶月芳杭州师范大学医学部临床医学院杭州311121 杭州师范大学附属医院消化内科杭州310015

炎症性肠病(IBD)是由环境因素作用于遗传易感人群,导致的免疫系统和肠道微生态系统失调的疾病。潘氏细胞(PC)在IBD发病过程中,尤其是在克罗恩病发展过程中处于中心地位,其形态、数量、功能容易受易感基因的影响而发生改变。在肠道中,PC... 详细信息

炎症性肠病(IBD)是由环境因素作用于遗传易感人群,导致的免疫系统和肠道微生态系统失调的疾病。潘氏细胞(PC)在IBD发病过程中,尤其是在克罗恩病发展过程中处于中心地位,其形态、数量、功能容易受易感基因的影响而发生改变。在肠道中,PC通过分泌抗菌颗粒,参与构成干细胞微环境,起到调节肠道微生态和维持肠道黏膜稳态的作用,同时PC的增殖和成熟又是依赖于肠道中的共生菌群。本文介绍易感基因、PC、肠道微生态三者之间的相互作用以及对IBD发生发展的影响。

关键词：潘氏细胞炎症性肠病肠道菌群易感基因

肠炎沙门菌影响潘氏细胞α-防御素表达的关键基因筛选及其功能分析

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肠炎沙门菌影响潘氏细胞α-防御素表达的关键基因筛选及其功能分析

作者：胡凌芸扬州大学

学位级别：硕士

沙门菌是一种重要的食源性人兽共患病原菌,目前已发现2600多种血清型。近年来,肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)已代替鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)成为包括我国在内的多个国家中畜禽(尤其是家禽)和人沙门菌感染的最优势血... 详细信息

沙门菌是一种重要的食源性人兽共患病原菌,目前已发现2600多种血清型。近年来,肠炎沙门菌(Salmonella Enteritidis)已代替鼠伤寒沙门菌(Salmonella Typhimurium)成为包括我国在内的多个国家中畜禽(尤其是家禽)和人沙门菌感染的最优势血清型之一。肠上皮细胞是沙门菌等肠道病原菌实现全身感染需要突破的首个重要屏障。对肠炎沙门菌通过M细胞等途径侵入机体的相关机制已有了较深入的了解,然而与其他重要肠上皮细胞如潘氏细胞的相互作用有待进一步明确。潘氏细胞(Paneth cells,PCs)是一类高度分化的分泌性上皮细胞,分泌大量抗菌肽(Antimicrobial peptides,AMPs),是介导潘氏细胞维持肠道稳态、参与小肠固有免疫等重要功能的分子基础。在小鼠小肠中,α-防御素是主要的抗菌肽,其中DEFA5、DEFA6的含量和抗菌活性较高,是被关注的主要α-防御素类型。鼠伤寒沙门菌感染α-防御素缺失小鼠模型后,对鼠伤寒沙门菌的杀伤作用减弱,潘氏细胞在宿主抗沙门菌感染中也发挥重要作用。目前的研究大多关注于沙门菌感染潘氏细胞后的影响,还未深入到两者相互作用的分子机制。本研究通过比较不同肠炎沙门菌分离株Z11和C50041对类器官表达AMPs等的影响建立肠炎沙门菌与PCs的相互作用模型,进而利用肠炎沙门菌突变体库通过qRT-PCR筛选影响PCs表达α-防御素的关键基因并构建相应基因缺失株,通过分析其生长、生化特性、黏附和侵袭以及影响类器官抗菌肽表达等生物学特性,明确其对α-防御素表达的影响;将缺失株口服感染C57BL/6小鼠,分析其小肠肠隐窝和PCs中抗菌肽的表达以及沙门菌的体内分布与定植情况等,进一步明确关键基因对小鼠肠道抗菌肽表达及肠炎沙门菌感染的影响,为肠炎沙门菌感染致病机制的深入解析以及抗感染新型制剂的开发等奠定基础。1肠炎沙门菌影响潘氏细胞α-防御素表达的关键基因的筛选通过分离小鼠肠隐窝诱导制备小肠类器官,以此为模型比较肠炎沙门菌Z11与C50041菌株对潘氏细胞表达抗菌肽的影响,结果显示Z11对其的影响更明显,因此用于后续突变体库的构建。由于类器官制备成本较高,且筛选效率较低,通过制备含有潘氏细胞的肠隐窝并与Z11共培养,比较肠隐窝的数量以及共培养时间等对抗菌肽表达的影响,建立了每孔2000个肠隐窝,共培养0.5 h后通过qRT-PCR检测α-防御素表达的感染模型和筛选体系。通过构建肠炎沙门菌Z11转座子突变库,以小鼠肠隐窝为感染模型,利用MOI为10的不同转座子突变株与肠隐窝共培养0.5 h,通过qRT-PCR检测潘氏细胞α-防御素(α-Defensin,DEFA)中DEFA5和DEFA6的表达,通过Z分数统计进行肠炎沙门菌影响潘氏细胞抗菌肽表达的关键基因的高通量筛选。取差异较大(Z值≥2或≤-2)的突变体菌株进行2次重复验证,确定关键基因。本文共筛选了 920株突变株,初筛中共有31株显著上调DEFA5的表达,14株显著下调DEFA5的表达;24株显著上调DEFA6的表达,11株显著下调DEFA6的表达;其中,17株均显著上调DEFA5和DEFA6的表达,7株均显著下调DEFA5和DEFA6的表达。对24株均显著影响DEFA5和DEFA6表达的突变株进行2次复筛,获得9株突变株可以稳定影响DEFA5和DEFA6的表达。通过PCR、测序和比对分析对筛选出的9个转座子突变株进行基因定位,为后续研究奠定基础。2肠炎沙门菌关键基因影响潘氏细胞功能的作用分析利用框内突变技术成功构建了其中5个候选基因gdhA、SEN1928、polB、yabL和mdoG的肠炎沙门菌基因缺失株Z11ΔgdhA,Z11ΔSEN1928,Z11Δ polB,Z11ΔyabL和Z11ΔmdoG,比较其在生长速率、生化反应、黏附侵袭、抵御抗菌肽杀伤等方面与野生株Z11的差异,分析其对肠炎沙门菌生物学特性的影响,初步探究其在肠炎沙门菌感染致病中的作用。以野生株Z11为对照,5种缺失株的生长曲线、生化特性和抵御抗菌肽的杀伤的能力与野生株一致,但对巨噬细胞J774A.1的黏附和侵袭能力有不同程度下降,其中Z11ΔgdhA和Z11ΔSEN1928的黏附率和侵袭率均显著下降,显示其对细菌致病力可能产生较大影响。为了进一步验证gdhA、SEN1928、polB、yabL和mdoG基因对潘氏细胞表达α-防御素的影响,利用小肠类器官与基因缺失株Z11ΔgdhA、Z11ΔSEN1928、Z11ΔpolB、Z11ΔyabL、Z11ΔmdoG以及野生株Z11共培养,通过qRT-PCR检测不同抗菌肽的表达情况,结果显示上述5个基因缺失株能显著影响抗菌肽的表达。同时对相关细胞因子的表达进行了 qRT-PCR检测,结果显示,共培养0.5 h后,Z11ΔgdhA缺失株组类器官中IL-17A、IL-22和IFN-γ显著降低;SEN1928缺失株组类器官

关键词：肠炎沙门菌潘氏细胞类器官抗菌肽基因缺失株

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鱼油对腹腔感染小鼠肠道潘氏细胞功能的影响

中华胃肠外科杂志 2015年第7期18卷 702-706页

作者：田锋王新颖高学金万晓南京大学医学院附属金陵医院解放军普通外科研究所 210002 南方医科大学临床学院南京军区南京总医院普通外科

目的探讨腹腔感染后肠道潘氏细胞功能的改变及鱼油的干预作用。方法将50只C57BL／6J小鼠随机分为5组，每组10只。腹腔感染组施行盲肠结扎穿孔手术；鱼油组在盲肠结扎穿孔术后给予鱼油灌胃；长链脂肪乳组在盲肠结扎穿孔术后给予大豆油脂... 详细信息

目的探讨腹腔感染后肠道潘氏细胞功能的改变及鱼油的干预作用。方法将50只C57BL／6J小鼠随机分为5组，每组10只。腹腔感染组施行盲肠结扎穿孔手术；鱼油组在盲肠结扎穿孔术后给予鱼油灌胃；长链脂肪乳组在盲肠结扎穿孔术后给予大豆油脂肪乳；假手术组只进行腹腔麻醉和外科操作，不施行盲肠结扎穿孔：正常对照组不作任何处理。术后4d处死小鼠，观察体质量变化，采用免疫组织化学染色进行病理学观察，采用qRT—PCR检测小鼠末端回肠的溶菌酶、隐窝素4和分泌型磷脂酶A2mRNA表达，Western blot法检测溶菌酶的蛋白表达水平。结果与正常对照组比较，腹腔感染组小鼠体质量明显减轻（P〈0．01），溶菌酶、隐窝素4和分泌型磷脂酶A2mRNA表达水平明显降低（0．78±0．34比1．83±0．11；0．99±0．44比2．02±0．33；0．92±0．25比1．50±0．27；均P〈0．05），溶菌酶的蛋白表达水平也明显降低（0．31±0．06比0．45±0．05；P〈0．05），小肠绒毛倒伏、断裂明显。与腹腔感染组和长链脂肪乳组比较，鱼油组的溶菌酶mRNA和蛋白表达水平明显升高（1．23±0．27比0．78±0．34和0．62±0．23；0．38±0．07比0．31±0．06和0．32±0．06：均P〈0．05）．小肠绒毛倒伏和断裂现象减轻。结论腹腔感染状态下，肠道潘氏细胞功能明显受损，鱼油能改善这一损伤。

关键词：腹腔感染肠黏膜屏障潘氏细胞鱼油脂肪酸小鼠

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潘氏细胞

广州医学院学报 1982年第4期 104-106页

作者：邓孔昭

潘氏细胞又称肠嗜酸颗粒细胞(entercytus cum granulis acidphilis)。常见于十二指肠、空肠和回肠隐窝底部,在健康成年人的结肠近端和阑尾也有少量分布,而新生婴儿的大肠则普遍存在。其他哺乳类、鸟类、两棲类和爬虫类的整个肠道也有此... 详细信息

潘氏细胞又称肠嗜酸颗粒细胞(entercytus cum granulis acidphilis)。常见于十二指肠、空肠和回肠隐窝底部,在健康成年人的结肠近端和阑尾也有少量分布,而新生婴儿的大肠则普遍存在。其他哺乳类、鸟类、两棲类和爬虫类的整个肠道也有此细胞存在。潘氏细胞的外形如削去尖头的锥形,在顶端有短的微绒毛伸入隐窝腔中,基底部有不规则形的细胞核,核仁明显,在顶部的胞浆中有约1～3微米的分泌颗粒,为同质性或

关键词：潘氏细胞分泌颗粒杯状细胞结肠炎结肠疾病

潘氏细胞为小肠干细胞提供微环境信号因子研究进展

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生物学杂志 2021年第5期38卷 105-109页

作者：李艳丽郭煜晖刘雨熊正国张长城顿耀艳三峡大学医学院宜昌443002

潘氏细胞是重要的微环境信号分子提供者,可为小肠干细胞(intestinal stem cells,ISCs)提供Wnt、Notch、EGF、mTORC1等相关信号因子,维持干细胞的增殖和分化平衡。对潘氏细胞提供ISCs微环境信号因子,以及潘氏细胞相关信号因子变化导致的... 详细信息

潘氏细胞是重要的微环境信号分子提供者,可为小肠干细胞(intestinal stem cells,ISCs)提供Wnt、Notch、EGF、mTORC1等相关信号因子,维持干细胞的增殖和分化平衡。对潘氏细胞提供ISCs微环境信号因子,以及潘氏细胞相关信号因子变化导致的小肠上皮稳态失调进行概述,旨在为潘氏细胞和ISCs相互作用的研究提供思考,为相关小肠上皮稳态失调提供新的治疗思路。

关键词：潘氏细胞微环境小肠干细胞信号因子小肠上皮稳态

潘氏细胞在大鼠休克复苏后肠黏膜重建过程中的作用

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中华实验外科杂志 2011年第9期28卷 1498-1500页

作者：杨斌何嘉辉傅玉如常建星陈双中山大学孙逸仙纪念医院胃肠外科广州510120 中山大学孙逸仙纪念医院医学研究中心中山大学孙逸仙纪念医院急诊外科

目的观察小肠潘氏细胞在大鼠失血性休克复苏后肠黏膜重建过程中的作用。方法42只雄性Wistar大鼠建立失血性休克复苏模型，随机分为实验组（n=7）和对照组（n=35），实验组再分5组，分别于复苏后1、3、6、12、24h观察回肠黏膜的形态学改... 详细信息

目的观察小肠潘氏细胞在大鼠失血性休克复苏后肠黏膜重建过程中的作用。方法42只雄性Wistar大鼠建立失血性休克复苏模型，随机分为实验组（n=7）和对照组（n=35），实验组再分5组，分别于复苏后1、3、6、12、24h观察回肠黏膜的形态学改变、复苏前后潘氏细胞数量及形态变化特点及各时相电镜下潘氏细胞结构特点。结果休克复苏后小肠黏膜明显损伤，集中表现于绒毛部分。复苏后3h为明显，6h后绒毛已开始修复，至24h肠黏膜表面细胞连续性已恢复。复苏后1h，回肠黏膜潘氏细胞计数明显减少（P〈0．05），3h降至最低（P〈0．05），6h后与对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。电镜下潘氏细胞表现肠内分泌细胞超微结构特征，核无凋亡改变。结论失血性休克复苏后肠黏膜屏障早期受损，但具快速重建能力，潘氏细胞颗粒的合成和分泌可受缺血再灌注损伤的诱导。潘氏细胞对维持肠道黏膜防御机制具有重要的生理意义。

关键词：潘氏细胞肠黏膜形态学休克

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胃富含潘氏细胞的癌二例

中华病理学杂志 2006年第2期35卷 123-124页

作者：石卫东何春年翟金萍孙金海陈琛河北省人民医院病理科石家庄050051

例1 女,65岁.因进食不畅伴恶心、呕吐3个月,于2004年12月30日入院.胸外科体检:胸廓对称无畸形,心肺检查无异常.患者自发病以来饮食差,体重减轻10 kg.周身浅表淋巴结未触及肿大.胃镜检查:近贲门处见浅表溃疡性占位,浸及整个胃壁全周,胃... 详细信息

例1 女,65岁.因进食不畅伴恶心、呕吐3个月,于2004年12月30日入院.胸外科体检:胸廓对称无畸形,心肺检查无异常.患者自发病以来饮食差,体重减轻10 kg.周身浅表淋巴结未触及肿大.胃镜检查:近贲门处见浅表溃疡性占位,浸及整个胃壁全周,胃镜刚可通过;胃底及鞍部黏膜皱襞粗大,扩张及收缩受限.胃镜活检病理诊断:印戒细胞癌及低分化腺癌伴坏死,部分黏膜腺体肠化.行贲门癌根治术,手术见肿物位于贲门部,约10 cm×10 cm×8 cm,侵透胃壁。

关键词：胃镜检查潘氏细胞浅表淋巴结心肺检查体重减轻癌 65岁胸外科溃疡性贲门处

小肠潘氏细胞的功能特性及与畜禽肠道疾病的关系研究

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四川畜牧兽医 2023年第2期50卷 28-31页

作者：薛才斌谢伟胡利琴彭艳怜周可磊王钢沈雪梅四川省乐山市农业农村局四川乐山614000 四川省夹江县农业农村局四川夹江614100 四川省凉山州动物疫病预防控制中心四川西昌615000 乐山师范学院川南地方品种鸡产业化四川省高等学校工程研究中心四川乐山614000

潘氏细胞位于小肠隐窝(又名小肠腺)基底部,是高度特化的分泌性上皮细胞,能够分泌α-防御素、溶菌酶、分泌性磷脂酶A2等抗菌物质。潘氏细胞在维持肠道稳态和调节小肠微生物群等方面具有重要作用。本文综述了潘氏细胞的发生与特性、α-防... 详细信息

潘氏细胞位于小肠隐窝(又名小肠腺)基底部,是高度特化的分泌性上皮细胞,能够分泌α-防御素、溶菌酶、分泌性磷脂酶A2等抗菌物质。潘氏细胞在维持肠道稳态和调节小肠微生物群等方面具有重要作用。本文综述了潘氏细胞的发生与特性、α-防御素的重要作用,潘氏细胞与畜禽肠道炎症及功能障碍的关系。

关键词：潘氏细胞 α-防御素肠道微生物群先天免疫炎症性肠病