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蚕业科学 2012年第1期38卷 65-69页

作者：万华星司马杨虎赵林川苏州大学基础医学与生物科学学院江苏苏州215123

为了调查滞育和非滞育性家蚕卵的谷胱甘肽氧化还原循环在滞育发动前是否存在差异,利用分光光度法检测滞育发动前(25℃中蚕卵产下后0～24 h)滞育与非滞育蚕卵的谷胱甘肽含量和相关代谢酶活性。滞育发动前,滞育性家蚕卵中的还原型谷胱甘肽... 详细信息

为了调查滞育和非滞育性家蚕卵的谷胱甘肽氧化还原循环在滞育发动前是否存在差异,利用分光光度法检测滞育发动前(25℃中蚕卵产下后0～24 h)滞育与非滞育蚕卵的谷胱甘肽含量和相关代谢酶活性。滞育发动前,滞育性家蚕卵中的还原型谷胱甘肽(GSH)含量、氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量、总谷胱甘肽(GSH+2GSSG)含量和GSH/GSSG比值变化不显著,谷胱甘肽S-转移酶(GST)活性变化不显著,但硫氧还蛋白过氧化物酶(TPX)活性下降23%,谷胱甘肽还原酶(GR)活性升高57%;非滞育性家蚕卵中的GSH含量及TPX和GST活性变化不显著,但GSSG含量升高61%,GSH+2GSSG含量升高41%,GSH/GSSG比值下降33%,GR活性下降16%。与非滞育性家蚕卵相比,滞育发动前滞育性家蚕卵中的GSH含量、GSSG含量和GSH+2GSSG含量较低,GSH/GSSG比值较高,TPX活性较低,GST活性无显著差异,GR活性较高。两种蚕卵中都未能检测到谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)和硫氧还蛋白还原酶(TrxR)活性。结果表明,滞育发动前滞育性家蚕卵中较低的TPX活性和较高的GR活性共同导致较高的GSH/GSSG比值,使其谷胱甘肽氧化还原循环处于相对还原态。

关键词：家蚕卵滞育发动谷胱甘肽氧化还原循环硫氧还蛋白过氧化物酶谷胱甘肽还原酶

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滞育发动阶段家蚕卵的生物氧化特性

滞育发动阶段家蚕卵的生物氧化特性

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作者：吴华静苏州大学

学位级别：硕士

25℃中,家蚕滞育性卵呼吸耗氧量在滞育发动前显著升高,相反在滞育发动开始后迅速下降,即时浸酸可以阻止其滞育发动,但是其分子机制还不清楚。本研究系统测定了家蚕滞育发动阶段有氧氧化代谢的主要指标,以探究在滞育发动阶段家蚕卵的生... 详细信息

25℃中,家蚕滞育性卵呼吸耗氧量在滞育发动前显著升高,相反在滞育发动开始后迅速下降,即时浸酸可以阻止其滞育发动,但是其分子机制还不清楚。本研究系统测定了家蚕滞育发动阶段有氧氧化代谢的主要指标,以探究在滞育发动阶段家蚕卵的生物氧化特性,主要结果如下:一、在产下的0～72 h家蚕卵中PK、PDH、SDH、SCR、AS、AC、CS和NADH共同调控有氧氧化家蚕滞育卵在产下的0～72 h中丙酮酸激酶（PK）、丙酮酸脱氢酶（PDH）、琥珀酸脱氢酶（SDH）、复合体II（SCR）、ATP合酶（AS）、乙酰-Co A（AC）、柠檬酸合酶（CS）和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）指标在滞育发动前逐渐升高,在滞育开始发动后逐渐降低,即时浸酸处理在阻止滞育发动的同时改变了上述指标的变化趋势。与呼吸耗氧量的变化趋势一致。表明上述指标通过调控有氧氧化改变了呼吸耗氧量的变化趋势。二、在产下的18～30 h家蚕滞育卵中有氧氧化变化的先导指标是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD）产下的18～30 h期间家蚕滞育卵中,葡萄糖（GLC）、α-丙酮酸脱氢酶（α-KGDH）和NAD分别是糖酵解（EMP）、三羧酸循环（TCA）和呼吸电子传递链（ETC）的先导指标,发生显著变化的时间分别为产下后20 h、23 h和19 h。可见,NAD含量是滞育发动阶段家蚕卵中有氧氧化的先导指标。三、滞育发动阶段家蚕卵的有氧氧化的限速酶、底物或者产物3-磷酸甘油酸激酶（PGK）和丙酮酸（PA）分别是EMP途径的限速酶和产物,异柠檬酸脱氢酶（ICDHm）和NADH分别是TCA途径的限速酶和产物,ATP合酶（AS）和腺嘌呤核苷三磷酸（ATP）是氧化磷酸化的限速酶和产物。其中以1/26 AS活性最低,以1/30 ATP含量最低。可见,AS是调控有氧氧化的关键限速酶,在有氧氧化的三个阶段中实际速率具有依次递减的特性。

关键词：家蚕滞育发动 EMP TCA 氧化磷酸化有氧氧化

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二化性家蚕滞育发动期间滞育性卵和非滞育性卵的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸变化

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蚕业科学 2013年第1期39卷 47-51页

作者：王启龙姚金美司马杨虎赵林川苏州大学基础医学与生物科学学院江苏苏州215123

为了探究家蚕滞育发动期间呼吸耗氧量下降与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)含量变化的关系,用高效液相色谱法和分光光度法分别检测在25℃条件下产下后12～72 h的二化性家蚕滞育性卵与非滞育性卵中的还原型NAD(NADH)含量、氧化型NAD(NAD+)含... 详细信息

为了探究家蚕滞育发动期间呼吸耗氧量下降与烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)含量变化的关系,用高效液相色谱法和分光光度法分别检测在25℃条件下产下后12～72 h的二化性家蚕滞育性卵与非滞育性卵中的还原型NAD(NADH)含量、氧化型NAD(NAD+)含量、乳酸脱氢酶(LDH)活性和胞质苹果酸脱氢酶(cMDH)活性。滞育性卵中的NADH+NAD+含量、NADH/NAD+值及LDH活性分别在产下后18、36、24 h达到峰值,而cMDH活性处于波动中。在产下后24～72 h,非滞育性卵中的NADH/NAD+值极显著低于滞育性卵,而LDH和cMDH活性极显著高于滞育性卵。据此可以推测,滞育发动期间家蚕滞育性卵的NAD+降解增强和NAD+再生下降共同导致呼吸耗氧量下降。

关键词：家蚕滞育发动呼吸耗氧量烟酰胺腺嘌呤二核苷酸乳酸脱氢酶胞质苹果酸脱氢酶

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二化性家蚕滞育发动的转录组研究

二化性家蚕滞育发动的转录组研究

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作者：刘军苏州大学

学位级别：硕士

二化性家蚕的滞育性卵的呼吸耗氧量在滞育发动前（产下后0h～24h）逐渐升高,但是在滞育发动阶段（产下后24h～72h）迅速降低,即时浸酸处理在阻止滞育发动的同时呼吸耗氧量继续升高,但是其分子机制还不清楚。本文比较了二化性家蚕滞育性... 详细信息

二化性家蚕的滞育性卵的呼吸耗氧量在滞育发动前（产下后0h～24h）逐渐升高,但是在滞育发动阶段（产下后24h～72h）迅速降低,即时浸酸处理在阻止滞育发动的同时呼吸耗氧量继续升高,但是其分子机制还不清楚。本文比较了二化性家蚕滞育性卵滞育发动前后以及即时浸酸处理阻止滞育发动的转录组差异,侧重分析了生物氧化相关基因在转录水平的差异,结果如下。1二化性家蚕滞育发动阶段差异表达基因的数量变化产下后0h～72h滞育性卵中转录水平上调和下调的基因数量都持续增加,即时浸酸处理进一步提高了转录水平上调和下调的基因数量。可见,滞育发动阶段差异表达的基因数量未见减少,即时浸酸阻止滞育发动时差异表达的基因数量进一步增加。2二化性家蚕滞育发动阶段生物氧化相关的差异表达基因伴随着滞育发动（产下后24h～72h）,二化性家蚕滞育性卵中与生物氧化相关的基因中有11个发生转录水平的上调,6个发生转录水平的下调;即时浸酸阻止滞育发动的同时逆转了其中3个基因转录水平的变化趋势。3二化性家蚕滞育发动阶段NAD+代谢相关的差异表达基因伴随着滞育发动（产下后24h～72h）,二化性家蚕滞育性卵中与NAD+代谢相关的NAD激酶2、NAD激酶亚基X2、聚（ADP-核糖）聚合酶和NAD依赖性脱乙酰酶sirtuin2基因的转录水平都显著下调,但是即时浸酸阻止滞育发动的同时仅逆转了 NAD依赖性脱乙酰酶sirtuin2基因转录水平下降的趋势。4二化性家蚕滞育发动相关的先导基因在二化性家蚕滞育性卵中,转录水平与呼吸耗氧量变化趋势一致的基因有苹果酸脱氢酶X1、ATP合酶Fo、细胞色素c氧化酶亚基6A、甘油-3-磷酸脱氢酶、醛酮还原酶（AKR2E4 X1）和NAD依赖性脱乙酰酶sirtuin2,但是即时浸酸阻止滞育发动的同时转录水平被逆转的仅有苹果酸脱氢酶X1、细胞色素c氧化酶亚基6A、甘油-3-磷酸脱氢酶和NAD依赖性脱乙酰酶sirtuin2。其中苹果酸脱氢酶X1和甘油-3-磷酸脱氢酶基因的转录水平早在产下后18h就发生显著下降,而细胞色素c氧化酶亚基6A和NAD依赖性脱乙酰酶sirtuin2基因的转录水平直到产下后30h才发生显著变化。苹果酸脱氢酶X1基因的转录水平变化幅度大于甘油-3-磷酸脱氢酶基因。此外,苹果酸脱氢酶X1基因转录水平的变化也得到了 Real-time PCR的验证。可见,苹果酸脱氢酶X1基因是二化性家蚕滞育发动的先导基因。

关键词：家蚕滞育发动转录组生物氧化

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3-氨基三唑与过氧化氢共同处理对家蚕滞育发动的影响

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蚕业科学 2004年第3期30卷 319-322页

作者：赵林川苏州大学生命科学学院苏州215006

研究有效阻止家蚕滞育发动的措施发现 :在家蚕滞育发动期间 ,仅用过氧化氢酶 (catalase ,CAT)的专一性抑制剂 3 氨基三唑 (3 amino 1,2 ,4 triazole ,AT)处理滞育性蚕卵仍不能阻止家蚕滞育发动 ;但先用AT处理抑制CAT活性后 ,再用H2 O2... 详细信息

研究有效阻止家蚕滞育发动的措施发现 :在家蚕滞育发动期间 ,仅用过氧化氢酶 (catalase ,CAT)的专一性抑制剂 3 氨基三唑 (3 amino 1,2 ,4 triazole ,AT)处理滞育性蚕卵仍不能阻止家蚕滞育发动 ;但先用AT处理抑制CAT活性后 ,再用H2 O2 处理可有效阻止家蚕滞育发动。

关键词：家蚕滞育发动 3-氨基三唑过氧化氢

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二化性家蚕滞育诱导和滞育发动阶段的谷胱甘肽代谢研究

二化性家蚕滞育诱导和滞育发动阶段的谷胱甘肽代谢研究

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作者：孟刚苏州大学

学位级别：硕士

家蚕(Bombyx mori)是典型的卵滞育昆虫。就二化性家蚕而言,子代是否滞育取决于亲代所经历的环境条件。高温明催青诱导子代发生滞育,而低温暗催青诱导子代不发生滞育。在产下后24 h左右进行即时浸酸处理,能够有效阻止蚕卵的滞育发动,使... 详细信息

家蚕(Bombyx mori)是典型的卵滞育昆虫。就二化性家蚕而言,子代是否滞育取决于亲代所经历的环境条件。高温明催青诱导子代发生滞育,而低温暗催青诱导子代不发生滞育。在产下后24 h左右进行即时浸酸处理,能够有效阻止蚕卵的滞育发动,使其正常发育和孵化。此前我们研究表明,过氧化氢(H2O2)代谢与蚕卵滞育诱导和发动密切相关,H2O2可能在家蚕滞育诱导和发动调控中具有重要作用。谷胱甘肽(glutathione)包括还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型(GSSG)两者类型。GSH是细胞内最重要的抗氧化小分子,在清除细胞内过氧化物、自由基和修复受损组织等方面起到重要作用。GSH/GSSG比值反映了细胞的氧化还原状态。高水平的GSH/GSSG表明细胞处于还原态,相反低水平的GSH/GSSG表明细胞处于氧化态。鉴于蚕卵滞育诱导和发动过程中H2O2水平发生显著变化,而GSH在谷胱甘肽S-转移酶(glutathione S-transferase, GST)催化下可以分解H2O2,GSH代谢可能也与家蚕滞育诱导和发动密切相关,因此,检测了二化性家蚕滞育诱导和滞育发动过程中的谷胱甘肽代谢情况,包括总谷胱甘肽(GSH+2GSSG)、GSH和GSSG含量,GSH/GSSG比值和GST活性的变化。结果如下。一、滞育诱导阶段蚕卵谷胱甘肽代谢与低温暗催青相比,高温明催青的蚕卵含有显著高水平的总谷胱甘肽和GSSG,显著低水平的GSH、GSH/GSSG和GST活性。总谷胱甘肽水平取决于GSH合成和GST催化的GSH清除。低水平的GST意味着滞育诱导阶段被GST催化清除的GSH数量较少。因此滞育发动阶段总谷胱甘肽含量的增加可能包括GSH合成增加和GSH清除减少。另一方面,GSH/GSSG比值低表明滞育诱导阶段蚕卵处于氧化态。高水平的总谷胱甘肽、低水平的GSH和高水平的GSSG,表明滞育诱导阶段GSH氧化为GSSG的反应显著增强。该结果与滞育诱导阶段蚕卵H2O2水平显著升高一致。因此,高水平的GSH氧化导致了低水平的GSH/GSSG。昆虫细胞中主要由硫氧还蛋白过氧化物酶(thioredoxin peroxidase, Prdx)和GST催化GSH被H2O2氧化为GSSG。滞育发动期间蚕卵GST处于低水平,表明GST在GSH氧化中不起重要作用。因此,GSH氧化为GSSG可能主要由Prdx催化进行。该结果暗示高温明催青可能诱导Prdx基因表达上调。二、滞育发动阶段蚕卵谷胱甘肽代谢与滞育蚕卵相比,即时浸酸蚕卵含有高水平的总谷胱甘肽、几乎相同水平的GSH、高水平的GSSG、低水平的GSH/GSSG和几乎相同水平的GST。高水平的总谷胱甘肽和几乎相同水平的GST活性表明即时浸酸显著促进了蚕卵GSH合成。与即时浸酸蚕卵相比,滞育蚕卵高水平的GSH/GSSG比值表明滞育发动阶段蚕卵处于还原态,而即时浸酸阻止滞育发动过程中蚕卵从还原态转换为氧化态。高水平的总谷胱甘肽、几乎相同水平的GSH和高水平的GSSG表明即时浸酸显著促进了GSH氧化,即新合成的GSH几乎全部被迅速氧化为GSSG。由于即时浸酸蚕卵GST活性与滞育蚕卵相比几乎一样,因此即时浸酸引起的GSH强烈氧化可能主要由Prdx负责催化。该结果表明即时浸酸可能诱导Prdx基因表达增强。相反,滞育蚕卵中GSH氧化很弱,其Prdx基因表达可能也处于很低水平。可见,谷胱甘肽代谢与家蚕滞育诱导和发动密切相关,其中滞育诱导阶段高温明催青促进Prdx基因表达增强,导致GSH强烈氧化为GSSG,表现为低水平的GSH/GSSG,表明滞育诱导阶段蚕卵处于氧化态;相反,滞育发动阶段,Prdx基因表达被显著抑制,抑制了GSH氧化为GSSG,表现为高水平的GSH/GSSG,表明滞育发动阶段蚕卵处于还原态。

关键词：二化性家蚕滞育诱导滞育发动谷胱甘肽谷胱甘肽S-转移酶

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