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滚环扩增技术检测耐氟康唑白念珠菌TAC1点突变

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中华皮肤科杂志 2010年第8期43卷 529-533页

作者：王惠平孔繁荣王斌刘全忠天津医科大学总医院皮肤性病科 300052 澳大利亚悉尼大学Westmead医院感染性疾病和微生物中心澳大利亚悉尼大学逆转录病毒基因研究实验室、病毒研究中心、Westmead千年研究所

目的利用滚环扩增技术检测耐氟康唑白念珠菌的TAC1点突变,建立一种准确、快速、特异的检测核酸单点突变的方法,同时进一步了解TAC1点突变与耐药的关系.方法收集33株耐氟康唑白念珠菌（8株来自美国,25株来自澳大利亚）,根据文献报道的... 详细信息

目的利用滚环扩增技术检测耐氟康唑白念珠菌的TAC1点突变,建立一种准确、快速、特异的检测核酸单点突变的方法,同时进一步了解TAC1点突变与耐药的关系.方法收集33株耐氟康唑白念珠菌（8株来自美国,25株来自澳大利亚）,根据文献报道的与耐药有关的点突变和挂锁探针设计原则设计4个挂锁探针.提取DNA、PCR扩增获得TAC1的三个目的片段;然后用滚环扩增技术检测耐药株的点突变.将滚环扩增所得结果与测序结果进行比较.结果 33株耐氟康唑白念珠菌中,有5株TAC1出现与耐药相关的点突变,分别为T225A（1株）和A736V（4株）,其中4株菌来自美国.4株氟康唑敏感白念珠菌中TAC1未见与耐药相关的点突变.结论滚环扩增技术能准确、快速检测核酸单点突变;TAC1点突变与耐药的关系有待进一步研究.

关键词：念珠菌,白色氟康唑抗药性,真菌点突变滚环扩增技术

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滚环扩增技术及内滤效应用于荧光检测黏蛋白

分析试验室 2019年第3期38卷 275-278页

作者：刘萍郑龙坤陈一峰许铱林颖黄伟成陈伟唐淑榕福建医科大学药学院福州350108 福建医科大学临床医学部福州350108 福建医科大学公共卫生学院福州350108

将荧光内滤效应与滚环扩增放大技术相结合,构建了黏蛋白检测方法。二氧化锰纳米片可淬灭MoS2量子点荧光,加入谷胱甘肽溶解MnO2荧光恢复。通过滚环扩增产生大量的核酸酶可催化谷胱甘肽氧化,使其无法与MnO2反应而抑制荧光。适配体与黏蛋... 详细信息

将荧光内滤效应与滚环扩增放大技术相结合,构建了黏蛋白检测方法。二氧化锰纳米片可淬灭MoS2量子点荧光,加入谷胱甘肽溶解MnO2荧光恢复。通过滚环扩增产生大量的核酸酶可催化谷胱甘肽氧化,使其无法与MnO2反应而抑制荧光。适配体与黏蛋白作用后将阻碍滚环扩增反应进行,促进荧光恢复。在0. 5～80 nmol/L范围内,黏蛋白浓度与荧光强度呈良好的线性关系,检测限为15 pmol/L。该方法对黏蛋白检测具有良好的选择性及重现性。

关键词：荧光内滤效应滚环扩增技术二硫化钼量子点二氧化锰纳米片黏蛋白检测

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滚环扩增技术在食品安全检测中的研究进展

食品安全质量检测学报 2021年第2期12卷 423-429页

作者：王冲宋亚宁梁煜朱云周润肖静马力陈祥贵黄玉坤西华大学食品与生物工程学院成都610039 食品非热加工重点实验室食品非热加工工程技术研究中心宜宾西华大学研究院宜宾644004

食品安全一直受到广泛关注,在实现食品中污染物准确检出的前提下,快速方便的检测方式对食品安全的维持具有重要现实意义。滚环扩增技术(rolling circle amplification, RCA)发展于20世纪90年代中期,是一种简单高效的体外核酸扩增技术,... 详细信息

食品安全一直受到广泛关注,在实现食品中污染物准确检出的前提下,快速方便的检测方式对食品安全的维持具有重要现实意义。滚环扩增技术(rolling circle amplification, RCA)发展于20世纪90年代中期,是一种简单高效的体外核酸扩增技术,可在等温的条件下快速扩增出由模板互补序列串联而得的长单链DNA。由于其引物易于标记固定和其模板设计多样性,RCA应用于生物传感器中以及在提高传感器的检测灵敏度方面具备显著优势,因此被广泛应用于医疗诊断、环境监测以及食品安全等生物技术领域的研究中。本文综述了近几年RCA技术在食源性致病微生物、生物毒素、农药兽药残留、重金属等食品安全危害因子检测中的研究与应用进展,并展望了该技术在食品安全检测领域的发展方向。

关键词：滚环扩增技术食品安全检测生物传感器

应用滚环扩增技术检测乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的研究

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中华传染病杂志 2010年第9期28卷 513-518页

作者：赵旭刘红艳李新艳秦艳丽邬祥惠翁心华佘会元张继明复旦大学附属华山医院感染科上海200040 上海市第七人民医院感染科

目的应用滚环扩增（RCA）技术检测HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）,观察该方法的特异性和敏感性.方法以HBV全基因质粒为模板,经酶切、连接、浓缩、胶回收纯化等步骤,构建和制备HBV cccDNA标准品.抽提7例慢性乙型肝炎患者肝组织总DNA,进... 详细信息

目的应用滚环扩增（RCA）技术检测HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）,观察该方法的特异性和敏感性.方法以HBV全基因质粒为模板,经酶切、连接、浓缩、胶回收纯化等步骤,构建和制备HBV cccDNA标准品.抽提7例慢性乙型肝炎患者肝组织总DNA,进行滚环扩增.用HBV cccDNA标准品、3.2 kb线性HBV DNA、健康肝组织总DNA及15例慢性乙型肝炎患者血清总DNA作为对照,验证此方法的特异性.将HBV cccDNA标准品进行系列稀释,了解该方法的敏感性.结果成功构建了HBV cccDNA,并可用RCA方法进行扩增.RCA方法可从2 mg的慢性乙型肝炎患者肝组织中检测到HBV cccDNA,并可检测低至1×102拷贝/μL的HBV ***方法不能检测3.2 kb线性HBV DNA,在健康肝组织及15例慢性乙型肝炎患者血清中亦检测不到HBV cccDNA.结论 RCA方法操作较方便,具有很高的特异性和敏感性.

关键词：肝炎病毒,乙型滚环扩增技术 DNA,环状

基于纳米材料和滚环扩增技术的生物传感新方法的研究

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基于纳米材料和滚环扩增技术的生物传感新方法的研究

作者：李西平湖南大学

学位级别：硕士

酶、核酸及生物小分子等的活动在生命体中发挥着不可替代的作用，因此，快速、准确、实时的获取这些生命活动信息对于生命体的研究以及疾病的临床诊断和治疗具有巨大的意义，生物传感技术为这一需求提供了有力的手段。近年来，纳米技术... 详细信息

酶、核酸及生物小分子等的活动在生命体中发挥着不可替代的作用，因此，快速、准确、实时的获取这些生命活动信息对于生命体的研究以及疾病的临床诊断和治疗具有巨大的意义，生物传感技术为这一需求提供了有力的手段。近年来，纳米技术和核酸扩增技术等的发展为构建高灵敏度、高选择性、快速高效的生物传感器提供了全新的平台，使生物传感技术得到更广泛的应用。本论文以microRNA、DNA甲基化修饰以及组蛋白去乙酰化酶为研究对象，结合纳米材料和滚环扩增技术发展了一系列新型的生物传感器。具体内容包括：microRNA在免疫细胞的分化发育、免疫应答的调控以及免疫系统肿瘤的发生发展等过程中发挥重要的作用，因此，研究单个细胞中microRNA的空间分布和表达水平对于考察microRNA及其调控网络的复杂性在生物学中的作用具有十分重要的意义。在第2章中，我们开发了一种基于目标物触发的等温滚环扩增技术原位检测肿瘤细胞microRNA的新方法。该方法首先利用改良的microRNA固定方法，将microRNA的5'端磷酸基团与细胞中蛋白质的氨基通过EDC共价交联，以降低microRNA在检测过程中的损失。随后以预先制备的DNA环探针与microRNA进行原位杂交，具有游离的3'末端的microRNA可以自身作为引物引发滚环扩增反应，在聚合酶的作用下产生与DNA环探针互补的含有microRNA序列的串联重复序列。最后，利用荧光检测探针对扩增产物进行识别，即可达到高灵敏度、高选择性的检测microRNA的目的。由于滚环扩增反应只能由microRNA游离的3'末端触发，因此从根本上消除了mRNA以及microRNA前体的干扰。我们使用这种方法实现了人肝癌细胞SMMC-7721和人正常细胞L02中miR-222与miR-223表达水平的高灵敏可视化检测，并进一步实现了单个细胞中不同microRNA的同时检测。DNA甲基化是表观遗传修饰的一个重要组成部分，其可通过影响DNA构象、稳定性以及与蛋白质相互作用方式等途径实现对基因表达的调节，目前已成为多种肿瘤诊断的生物标志物。在第3章中，我们将滚环扩增技术与DNA为模板合成银纳米簇相结合，发展了一种可进行多组分DNA甲基化检测的方法。该方法首先将DNA经过亚硫酸盐处理产生碱基差异后与挂锁探针杂交，再利用*** DNA连接酶对错配碱基的高特异性识别使与带有甲基化修饰的目标DNA完全互补的挂锁探针连接成环形。随后，以银纳米簇DNA模板作为引物，在具有强链置换能力的DNA聚合酶作用下启动滚环扩增反应，产生环形探针的重复互补串联序列。另外，扩增产物的茎杆区域带有HhaI内切酶的识别位点，可在酶的作用下释放出大量可以合成银纳米簇的DNA模板。在硝酸银、硼氢化钠的作用下，产生荧光信号，从而实现目标DNA甲基化的检测。该方法设计巧妙新颖，具有很好的灵敏度和选择性，检测限达6.4fM。组蛋白去乙酰化酶参与了肿瘤细胞生长、增殖与表达调控等诸多过程，且在癌细胞中高表达，使组蛋白处于低乙酰化的状态，抑制多种抑癌蛋白及凋亡分化相关基因的表达，目前已成为肿瘤治疗的靶点而日益引起学术界的重视。在第4章中，我们以组蛋白去乙酰化酶1为模型分析对象，建立了一种基于氧化石墨烯平台的组蛋白去乙酰化酶检测新方法。在该方法中，使用了具有两部分功能的多肽序列，一部分序列能够通过π-π堆积作用吸附在氧化石墨烯表面，使氧化石墨烯与荧光基团之间发生荧光共振能量转移从而淬灭荧光基团的荧光;另一部分序列则包含荧光基团及组蛋白去乙酰化酶作用的赖氨酸乙酰化位点。利用胰蛋白酶对组蛋白去乙酰化酶作用后的赖氨酸进行识别和切割，可使荧光基团游离，从而避免被氧化石墨烯淬灭荧光，通过检测反应后的荧光信号强度即可达到定量组蛋白去乙酰化酶1的目的。该方法设计简单、有较高的灵敏度和较好的选择性。

关键词：生物传感器滚环扩增技术银纳米簇氧化石墨烯 MicroRNA DNA甲基化组蛋白去乙酰化酶

基于滚环扩增技术自组装DNA/酶功能复合物及其在光电生物传感器中的应用

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基于滚环扩增技术自组装DNA/酶功能复合物及其在光电生物传感器中...

作者：闫永存青岛大学

学位级别：硕士

滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)作为一种等温信号放大技术,具有操作简单,扩增能力强等优点,并为DNA自组装材料的设计与制备提供了新思路和新方法。本文将RCA技术应用于DNA花型结构的自组装,通过负载酶分子,将其作为信号放... 详细信息

滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)作为一种等温信号放大技术,具有操作简单,扩增能力强等优点,并为DNA自组装材料的设计与制备提供了新思路和新方法。本文将RCA技术应用于DNA花型结构的自组装,通过负载酶分子,将其作为信号放大探针,与比色法、电化学传感器相结合,实现了凝血酶、葡萄糖等生物分子的高灵敏、高特异性检测,在DNA自组装、信号放大分析检测、生物传感器的构建等方面具有广阔的应用前景。本论文主要开展了以下三方面工作:一、基于滚环扩增自组装DNA花型结构封装辣根过氧化物酶构建比色法生物传感器检测凝血酶本工作通过RCA反应自组装形成微米级DNA花,并在RCA过程中封装大量辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)分子,对其几何形态、形貌特征、封装效能、催化活性等进行了系统研究。由于RCA产物中含有大量重复的凝血酶适体(Apt29)序列,采用磁性微粒作为载体,通过双适体识别形成适体-凝血酶-DNA花三明治结构,通过封装在DNA花中的HRP催化刻蚀金纳米棒(gold nanorods,AuNRs),构建了比色法生物传感器,实现了凝血酶的高灵敏、高特异性检测。此外,通过磁性分离极大地降低了检测背景值,对凝血酶的检测限达0.22 fM,且表现出良好的选择性,并应用于实际样品中凝血酶的分析检测。二、基于滚环扩增自组装DNA花型结构封装辣根过氧化物酶构建电化学生物传感器检测凝血酶通过RCA反应制备封装HRP的亚微米级DNA花型结构,将Apt29的互补序列设计进入环状模板中,实现了Apt29的线性扩增。将凝血酶的另一条适体Apt15固定到电极表面,通过凝血酶与适体间的特异性识别作用将凝血酶捕获到电极表面,进而与封装HRP的DNA花型结构结合,形成适体-凝血酶-DNA花三明治结构。在HO存在时,HRP催化3,3’,5,5’-四甲基联苯胺(TMB)氧化,产生电子转移和电信号。由于DNA花型结构对HRP分子具有较高的封装效率,极大地提高了检测灵敏度,对凝血酶的检测限达1 fM,且表现出良好的选择性。三、基于滚环扩增自组装DNA花型结构封装双酶分子构建电化学葡萄糖传感器在RCA反应过程中同时加入HRP和葡萄糖氧化酶(glucose oxidase,GOx),得到封装两种酶的DNA花型结构(HRP-GOx-DFs)。对其内部组成、形貌形态、封装效能、催化活性进行了系统研究。由于高密度的磷酸基团和酶催化级联反应,HRP-GOx-DFs的催化活性较未封装的酶催化活性显著提高。进一步,采用HRP-GOx-DFs修饰电极,制备得到葡萄糖电化学生物传感器,极大地提高了葡萄糖的检测灵敏度,检测限为3.87μM。此外,制得的电化学生物传感器对葡萄糖具有良好的选择性。

关键词：滚环扩增技术 DNA自组装光电生物传感器信号放大核酸适体

基于滚环扩增技术构建的DNA组装体在microRNA成像分析中的应用

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基于滚环扩增技术构建的DNA组装体在microRNA成像分析中的应用

作者：帅新嘉西南大学

学位级别：硕士

MicroRNA(miRNA)是一类长度为21–25个核苷酸的小型、进化保守的非编码RNA分子家族,可在转录后调控中发挥重要作用。作为一类新型的生物标志物,miRNA与癌症等疾病的发生与发展有着紧密的联系,例如miR-21在多种癌症中均能发现异常表达。... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是一类长度为21–25个核苷酸的小型、进化保守的非编码RNA分子家族,可在转录后调控中发挥重要作用。作为一类新型的生物标志物,miRNA与癌症等疾病的发生与发展有着紧密的联系,例如miR-21在多种癌症中均能发现异常表达。因此实现细胞内miRNA的灵敏检测与成像分析对癌症的早期诊断具有重要意义。然而在实际检测中,由于miRNA表达丰度较低、序列较短,现有的miRNA检测方法仍存在反应时间较长,易受复杂生物环境的干扰等问题,导致如何在细胞水平上进行miRNA的快速、高灵敏检测与成像分析仍是一个巨大的挑战。随着DNA纳米技术的蓬勃发展,DNA组装体因其较好的可编程性、尺寸可控性和生物相容性被广泛应用于生物传感和成像领域。在其构建方面,许多研究通过DNA扩增技术组装形成具有不同功能的DNA组装体。其中,滚环扩增技术(Rolling circle amplification,RCA)作为一类等温酶促核酸扩增技术,其能够在短时间内产生大量具有重复序列的DNA单链,同时可以采用DNA杂交反应实现对不同DNA功能基团的高效负载,具有高灵敏度和多功能性等优点,在分子识别、生物成像等领域具有较大的应用潜力。本文基于RCA技术构建了具有可编程性与双重信号放大功能的DNA酶(DNAzyme)组装体,并将其成功应用于miRNA的快速、灵敏检测与成像分析,主要包括以下两个方面:1.基于RCA构建的可编程DNAzyme组装体用于miR-21的快速检测与成像分析在RCA产物上精确负载DNAzyme和底物链(Substrate),形成具有较好生物相容性的线性可编程DNAzyme组装体。通过对环状模板(Circular template,CT)序列的可编程设计,DNA组装体能够调控DNAzyme与底物链的相对位置以实现最快的反应速率与最佳的信号响应。当miR-21存在时,DNAzyme能够在Na辅助下对底物链进行循环切割实现对细胞内miR-21的快速检测与成像分析。长链DNA载体所产生的“限域效应”能够明显提高反应物的局域浓度从而加快反应速率。溶液中的实验结果表明,当miR-21的浓度在0.100–40.0 nmol/L时,信背比(F/F)与miR-21的浓度呈现出良好的线性关系,检测限为21.7 pmol/L。细胞成像的实验结果表明由于DNA长链的保护作用,使得该组装体具有较好的生物稳定性,同时相较于游离DNAzyme组具有更强的荧光信号。细胞内的荧光强度随着miR-21含量的上调与下调发生相应变化,表明探针能够在细胞内实现对miR-21的特异性响应和动态含量监测,同时可以成功用于正常细胞和癌细胞的鉴别。本工作对于推进RCA技术在生物传感和细胞成像领域的应用具有重要意义。2.基于RCA构建的自反馈双重信号放大器用于miR-21的高灵敏检测与成像分析利用RCA产物负载DNAzyme和带有miR-21类似物的底物链,形成具有双重信号放大功能的DNA组装体。当miR-21存在时,DNAzyme能够在Mg的驱动下对底物链进行切割进行第一重信号放大。随后不断产生的游离miR-21类似物能够持续参与反应实现自反馈信号刺激响应,形成由DNAzyme和自反馈信号刺激响应介导的双重信号放大模式,用于细胞内miRNA的高灵敏检测与成像分析。实验结果表明,当miR-21的浓度在50.0 pmol/L–30.0 nmol/L时,F/F与miR-21的浓度呈现出良好的线性关系,检测限为6.70 pmol/L。相较于没有自反馈机制的DNAzyme信号放大反应过程,该信号双重放大器的灵敏度提升了约4.2倍,检测限降低了约115倍。细胞成像结果显示该探针对细胞内miR-21具有较强的选择性,荧光强度随着细胞内miR-21的含量变化而随之改变。同时其在细胞内的荧光信号明显强于无自反馈信号刺激响应的DNAzyme探针与游离的DNAzyme,表明该探针在细胞内具有较强的信号放大能力与生物稳定性,能有效提升一维DNA组装体的灵敏度与检测范围。综上所述,本文采用RCA技术构建两种DNA组装体用于细胞内miRNA的成像分析。基于RCA构建可编程DNAzyme组装体,通过调控DNAzyme和底物链的相对位置显著提升组装体的反应速率,并成功应用于细胞内miRNA的快速检测与成像分析。通过RCA构建带有双重信号放大功能的DNA组装体,较好地提升了一维DNA纳米探针的灵敏度与检测能力,同时实现对miRNA的高灵敏检测以及肿瘤细胞的成像分析。以上方法成功拓宽了RCA技术在DNA组装体的构建以及miRNA成像分析中的应用,在癌症的早期筛查与预防等方面展示出了巨大的应用前景。

关键词：滚环扩增技术 microRNA 可编程DNA组装体 DNAzyme 细胞成像

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基于滚环扩增技术的沙门氏菌检测生物传感器

基于滚环扩增技术的沙门氏菌检测生物传感器

作者：崔洁济南大学

学位级别：硕士

食源性致病菌对食物所引起的污染引发了对人类健康的危害,同时制约着国民经济的发展,当今世界各国居民普遍被此问题所困扰。引起食物中毒的因素各种各样,其中包括病毒、细菌、真菌等,在以细菌作为感染源的食物中毒事件中,大肠杆菌和沙... 详细信息

食源性致病菌对食物所引起的污染引发了对人类健康的危害,同时制约着国民经济的发展,当今世界各国居民普遍被此问题所困扰。引起食物中毒的因素各种各样,其中包括病毒、细菌、真菌等,在以细菌作为感染源的食物中毒事件中,大肠杆菌和沙门氏菌是最主要的两类致病菌。随着沙门氏菌对人们的危害愈加增长,食品安全问题愈加引起人们的关注,越来越多的科学家和学者致力于沙门氏菌的研究与检测。常见的研究方法有微生物检测法、分子生物学检测法、仪器分析法、免疫学检测法等等,但由于这些检测方法都或多或少的存在一些缺陷。本研究详细介绍了鼠伤寒沙门氏菌的危害及常用的检测方法。核酸适配体的特点、功能与应用。滚环扩增技术的特点以及在生物传感器中的应用,并对适配体生物传感器做了相关的改进,用于检测鼠伤寒沙门氏菌。基于现存的问题检测效率低、灵敏度低和检测限高的背景下,本研究以核酸适配体为识别元件,通过滚环扩增技术构建两种用于沙门氏菌检测荧光生物传感器,创新性在于将滚环扩增技术耦合DNA酶实现信号放大,制备的银簇,通过其极强的荧光信号实现了超灵敏检测沙门氏菌。本论文研究内容如下:第一部分:该方案设计了一种简单的,成本低而且检测速度非常快的方法用来高效地选择并检测鼠伤寒沙门氏菌。这种方法是基于核酸适配体对鼠伤寒沙门氏菌的特异性的识别与捕获能力,结合滚环扩增技术构建了超灵敏检测鼠伤寒沙门氏菌的荧光生物传感器。在本实验里,成功设计了一个拱形探针,拱形部分是核酸适配体的碱基序列,互补链是引发滚环扩增的引物。当体系中有目标物存在时,拱形探针的核酸适配体部分通过构象变换并捕获目标物,导致引物得以释放。在体系中加入挂锁探针(Padlock)与T4 DNA连接酶以后,在引物的作用下,挂锁探针与引物通过碱基互补配对结合在一起,在T4 DNA连接酶的作用下连接成环。体系中加入dNTP和phi29 DNA聚合酶以及BSA和phi29 DNA缓冲溶液等,就会顺利实现滚环扩增过程,产生一条很长的,并且有无数个相同片段的DNA单链,这些单元与两端分别修饰荧光基团FAM和猝灭基团的发夹结构结合,从而打开发夹。发夹的序列包含限制性内切酶的切割位点,当发夹结合到滚环扩增产生的DNA长链上时,限制性内切酶会将发夹切断,由于结合碱基太少,剪断的发夹从长链上掉下来,一方面使得荧光释放,产生很强的荧光信号,另一方面长链可以循环使用,达到信号放大的功效。在适当的环境中,此生物传感器可以超灵敏检测鼠伤寒沙门氏菌,最低检测限是7.8 cfu/m L,而且检测范围是四个数量级。此外,该生物传感器对鼠伤寒沙门氏菌表现出了非常高的选择性,而且具有成本低、检测速度快、操作简单等优点,最重要的是,这种生物传感器可以应用于奶粉中鼠伤寒沙门试剂的检测。第二部分:该方案将银簇引入滚环复制扩增技术,构建了一个简单的,无标签,成本低的方法用来高效地筛选并检测鼠伤寒沙门氏菌。该方案通过滚环扩增放大技术完成银簇模板的指数倍扩增,并利用银簇自身产生荧光信号的特性,实现沙门氏菌的高灵敏检测。方案所设计的发夹结构包括鼠伤寒沙门氏菌的适配体和一段引物,这段引物可以与含有一个银簇单元的挂锁探针碱基互补配对,用来识别鼠伤寒沙门氏菌并引发指数增长的滚环扩增放大。挂锁探针是由银簇单元与内切酶剪切位点组成。由于指数型滚环扩增放大和DNA酶信号放大技术的使用,当体系存在鼠伤寒沙门氏菌的时候会导致发夹打开,适配体识别并捕获鼠伤寒沙门氏菌,从而使得引物部分暴露出来进而引物与挂锁探针结合,体系中加入dNTP和DNA聚合酶就能产生无数个相同的单元,这些单元被限制性内切酶切割成段,体系中加入硝酸银和硼氢化钠后,就会产生大量银簇,可以检测到非常强的荧光信号。在适当的环境中,这个生物传感器超灵敏地检测鼠伤寒沙门氏菌,最低检测限为10 cfu/m L,而且检测范围达到四个数量级。除此之外,本研究的生物传感器表现出了对鼠伤寒沙门氏菌具有非常高的选择性,而且具有快速、低成本、操作简单等优势,能够成功用于实际样品检测。

关键词：沙门氏菌核酸适配体滚环扩增技术生物传感器

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滚环扩增技术在电化学生物传感器中的应用

生物技术进展 2023年第6期13卷 863-867页

作者：杨玉琦何秀霞长春理工大学生命科学技术学院长春130022

在电化学生物传感器的设计中,信号放大是实验环节中的重要步骤,特别是对靶标进行灵敏度分析时更是不可或缺。滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)能够在短时间内得到大量产物,并在电极表面进行扩增或孵育,然后通过一定的设计使... 详细信息

在电化学生物传感器的设计中,信号放大是实验环节中的重要步骤,特别是对靶标进行灵敏度分析时更是不可或缺。滚环扩增(rolling circle amplification,RCA)能够在短时间内得到大量产物,并在电极表面进行扩增或孵育,然后通过一定的设计使电化学信号被快速放大。RCA技术具有高度的灵敏性和特异性,电化学生物传感器则可提供实时、快速、低成本的检测。为了更好的了解RCA,介绍了RCA环化的基本原理、RCA种类,重点总结了RCA与电化学生物传感器结合的不同技术类型及应用,并对未来相关研究领域的发展趋势进行了展望,旨在为RCA技术在电化学生物传感器中的进一步发展和应用提供参考。

关键词：滚环扩增技术快速检测等温扩增电化学生物传感器