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人骨关节炎滑膜成纤维细胞差异蛋白质谱初步分析

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第三军医大学学报 2006年第11期28卷 1221-1223页

作者：柏干苹周丽娜贺伟峰罗高兴陈烯伟易绍萱胡晓红石东文陈光兴方勇飞吴军第三军医大学西南医院全军烧伤研究所第三军医大学西南医院关节外科中心重庆400038 第三军医大学西南医院风湿科重庆400038

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度(immob ilized pH grad ient,IPG)双向凝胶电泳(two-d imensional g... 详细信息

目的应用双向凝胶电泳-质谱法分析正常人及骨关节炎(osteoarthritis,OA)患者滑膜成纤维细胞蛋白质组表达差异,探讨差异蛋白在骨关节炎发病中的作用。方法采用固相pH梯度(immob ilized pH grad ient,IPG)双向凝胶电泳(two-d imensional gel electrophoresis,2-DE)分离正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞总蛋白质,银染显色,PDQuest2-DE软件分析图像,比较2种细胞蛋白质组表达差异,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱进行鉴定。结果胶图差异分析显示36个表达水平存在明显差异的蛋白质,选取15个点进行质谱鉴定,鉴定出6个表达上调蛋白质。结论正常人及骨关节炎患者滑膜成纤维细胞表达蛋白质组存在差异。这些差异蛋白可能参与骨关节炎的发病。

关键词：骨关节炎滑膜成纤维细胞蛋白质组双向电泳

Lunasin对实验性类风湿关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

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免疫学杂志 2016年第2期32卷 114-118页

作者：王凤杰樊莎莎陈显兵王玲洁谭志鑫陈宗海袁林风湿性疾病发生与干预湖北省重点实验室恩施445000 湖北民族学院医学院恩施445000 恩施州民族医院检验科 445000

目的探讨大豆多肽Lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovialfibroblasts,SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(freund’s complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建... 详细信息

目的探讨大豆多肽Lunasin对实验性类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovialfibroblasts,SFs)增殖与凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用弗氏完全佐剂(freund’s complete adjuvant,FCA)注入大鼠足跖皮内建立大鼠RA模型,造模成功后从大鼠关节滑膜组织中分离纯化出SFs,然后与不同浓度的Lunasin(0、50、100、200μmol/L)分别孵育24、48和72 h,MTT法检测SFs增殖;RT-PCR、Western blot检测Caspase3、Bax、Bcl-2基因及蛋白的表达。结果Lunasin可显著抑制体外培养的滑膜成纤维细胞增殖,增加Caspase3、Bax的表达,抑制Bcl-2基因和蛋白的表达,并呈现一定的时间和剂量依赖关系。结论 Lunasin对RA的治疗作用可能与其抑制SFs增殖和促进凋亡有关。

关键词： Lunasin 类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖凋亡

丙酮酸乙酯对类风湿性关节炎大鼠滑膜成纤维细胞增殖的影响

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免疫学杂志 2017年第4期33卷 283-287页

作者：李向阳秦苏萍颜超于倩华慧潘伟孔凡运郑葵阳汤仁仙徐州医科大学病原生物学与免疫学教研室 221004

目的探讨丙酮酸乙酯对滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法收集胶原诱导的关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)和正常大鼠滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。光镜及免疫荧光法检测Vimentin蛋白鉴定滑膜成纤维细胞;分别用1、2、5、10、20... 详细信息

目的探讨丙酮酸乙酯对滑膜成纤维细胞增殖的影响。方法收集胶原诱导的关节炎大鼠(collagen induced arthritis,CIA)和正常大鼠滑膜组织,培养滑膜成纤维细胞。光镜及免疫荧光法检测Vimentin蛋白鉴定滑膜成纤维细胞;分别用1、2、5、10、20 mmol/L浓度的丙酮酸乙酯作用于滑膜成纤维细胞;流式细胞术及CCK8法检测细胞增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果显微镜观察细胞形态特征符合滑膜成纤维细胞,且Vimentin蛋白表达阳性;5种剂量的丙酮酸乙酯均能抑制细胞增殖同时诱导细胞凋亡,但是未见明显剂量依赖效应,以5 mmol/L剂量组作用效果最为明显。结论丙酮酸乙酯能够抑制滑膜成纤维细胞增殖同时促进其凋亡,且以5 mmol/L剂量组作用最为明显。

关键词：丙酮酸乙酯滑膜成纤维细胞细胞增殖细胞凋亡

miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎症因子分泌和TLR4/NF-κB信号通路的影响

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郑州大学学报（医学版） 2020年第5期55卷 705-710页

作者：范文强马玲吴洁杨学华付冬冬王培山新乡市中心医院风湿免疫科河南新乡453000 新乡市第二人民医院肾病风湿科河南新乡453000 新乡市中心医院河南新乡453000

目的:探讨miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎性因子分泌的调控机制。方法:将体外培养的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-708-5p组(转染miR-708-5p模拟物)。采用qRT-PCR... 详细信息

目的:探讨miR-708-5p对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡、炎性因子分泌的调控机制。方法:将体外培养的人类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MH7A分为对照组(未处理)、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-708-5p组(转染miR-708-5p模拟物)。采用qRT-PCR法检测转染48 h后各组细胞中miR-708-5p的表达,CCK-8法检测各组细胞存活率,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,ELISA法检测细胞上清液中IL-6、IL-1β和TNF-α的含量,Western blot法检测细胞中Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Toll样受体4(TLR4)、NF-κB p65和p-NF-κB p65蛋白的表达。结果:与对照组相比,miR-708-5p组细胞中miR-708-5p的表达水平、细胞凋亡率和Bax、Cleaved Caspase-3蛋白的表达水平均升高,而细胞存活率、细胞上清液中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量以及TLR4、p-NF-κB p65蛋白的表达水平均降低(P滑膜成纤维细胞凋亡并减轻细胞炎症损伤,其作用机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路的活化有关。

关键词：类风湿关节炎 miR-708-5p 滑膜成纤维细胞炎性因子 TLR4/NF-κB信号通路

缺氧环境中RA滑膜成纤维细胞促进巨噬细胞向M2极化

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现代免疫学 2019年第4期39卷 265-270页

作者：成宇丁梦蕾叶蓓司玉莹陈存存虞珊珊宗明范列英同济大学附属东方医院检验科

研究模拟RA患者关节腔特征性缺氧环境,探索滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocyte,FLS)对巨噬细胞向经典活化型巨噬细胞(classically activated macrophage, M1)和替代活化型巨噬细胞(alternatively activated macrophage, M2)极化的影响,探讨巨噬细胞在RA进展中的作用。利用抗M1、M2特征性表面标志(CD197和CD206)抗体对RA组和对照组[骨关节炎(osteoarthritis,OA)]患者关节滑膜组织进行免疫组织化学染色,分析M1、M2数量及比值。佛波酯体外诱导人单核细胞(THP-1)为M0巨噬细胞,用Transwell非接触式共培养体系将RA-FLS与M0置于缺氧和常氧培养箱共培养,实时荧光定量PCR及免疫荧光法检测M0极化情况。免疫组织化学结果显示,RA组的M1和M2细胞数量多于OA组,M1/M2比值低于OA组,差异有统计学意义(P 细胞M1表型基因CCR7、TNF-α的mRNA表达水平高于单独培养组,NOS-2的mRNA表达水平低于单独培养组,M2表型基因IL-10、TGF-β的mRNA表达水平低于单独培养组,差异均有统计学意义(P 细胞M1和M2表型基因的mRNA表达水平均高于单独培养组,差异均有统计学意义(P 细胞免疫荧光检测结果与实时荧光定量PCR一致。以上结果提示缺氧环境下RA-FLS有促进巨噬细胞向M2极化的作用。

关键词：类风湿关节炎滑膜成纤维细胞缺氧替代活化型巨噬细胞

类风湿关节炎滑膜成纤维细胞MICA及其受体NKG2D表达的初步研究

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中国免疫学杂志 2013年第5期29卷 514-517页

作者：赵文君崔爽爽邢国胜于顺禄天津市天津医院骨科研究所天津300211

目的:探讨共育培养体系中RA患者滑膜成纤维细胞MICA mRNA及T淋巴细胞表面活化受体NKG2D mRNA表达的改变及其在RA免疫机制中的作用。方法:RA滑膜成纤维细胞与Jurkat T细胞株以相同浓度共育培养。MTT法测定共育培养后T淋巴细胞的扩增能力... 详细信息

目的:探讨共育培养体系中RA患者滑膜成纤维细胞MICA mRNA及T淋巴细胞表面活化受体NKG2D mRNA表达的改变及其在RA免疫机制中的作用。方法:RA滑膜成纤维细胞与Jurkat T细胞株以相同浓度共育培养。MTT法测定共育培养后T淋巴细胞的扩增能力,实时荧光定量PCR方法测定T淋巴细胞NKG2D mRNA的表达水平及滑膜成纤维细胞MICA mRNA、TNF-αmRNA的表达水平,并分别与单纯培养组比较。结果:共育培养组与单纯培养组比较,第4天T淋巴细胞增殖率明显增加(P滑膜成纤维细胞MICA mRNA及TNF-αmRNA表达水平也升高。结论:共育培养的RA滑膜成纤维细胞和T淋巴细胞可能通过MICA-NKG2D结合激活T淋巴细胞,RA滑膜成纤维细胞分泌的TNF-α很可能在诱导T淋巴细胞NKG2D表达升高中发挥着重要作用。

关键词：类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 T淋巴细胞共育培养

IHH-Gli信号通路在CIA大鼠滑膜成纤维细胞增殖中的作用

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免疫学杂志 2015年第11期31卷 937-940页

作者：秦苏萍孙德旭李慧李向阳潘伟郑葵阳汤仁仙徐州医学院病原生物学与免疫学教研室 221004 徐州医学院人体解剖学教研室 221004

目的初步探讨IHH-Gli信号通路在胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast,SF)增殖中的作用。方法注射胶原诱导CIA大鼠模型,采用组织块贴壁法培养大鼠膝关节SF,免疫荧光法检测Vimentin... 详细信息

目的初步探讨IHH-Gli信号通路在胶原诱导型关节炎(collagen induced arthritis,CIA)大鼠滑膜成纤维细胞(synovial fibroblast,SF)增殖中的作用。方法注射胶原诱导CIA大鼠模型,采用组织块贴壁法培养大鼠膝关节SF,免疫荧光法检测Vimentin鉴定细胞纯度,免疫荧光法检测IHH-Gli通路相关分子(IHH、Ptc、Smo及Gli1)的表达情况,给予GANT61阻断IHH-Gli信号通路,观察细胞形态变化、CCK8法检测细胞增殖情况、免疫荧光法检测糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)表达变化情况。结果病理及影像学检查显示CIA模型建立成功,培养的细胞95%以上均表达Vimentin,CIA-SF表达IHH、Ptc、Smo及Gli1蛋白,且CIA-SF表达IHH蛋白较正常SF高,10μmol/L及15μmol/L的GANT61能显著抑制CIA-SF的增殖,且降低GSK-3β的蛋白表达水平。结论 IHH-Gli信号通路参与CIA-SF的增殖机制,可能成为研究RA治疗药物的新靶点。

关键词：滑膜成纤维细胞关节炎细胞增殖 IHH-Gli信号通路

类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡与自噬研究进展

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中华风湿病学杂志 2014年第5期18卷 341-344,I0002页

作者：蔡永松许鹏西安交通大学医学院附属红会医院关节外科 710054

RA是一种全身性的自身免疫病,其主要特征是滑膜的慢性炎症增生性改变,并伴有大量炎性细胞浸润.未经系统治疗的RA可反复迁延多年,后期可侵犯软骨和骨引起关节重塑,最终导致关节畸形而影响关节功能[1],严重威胁着人类的生命健康.RA滑膜成... 详细信息

RA是一种全身性的自身免疫病,其主要特征是滑膜的慢性炎症增生性改变,并伴有大量炎性细胞浸润.未经系统治疗的RA可反复迁延多年,后期可侵犯软骨和骨引起关节重塑,最终导致关节畸形而影响关节功能[1],严重威胁着人类的生命健康.RA滑膜成纤维细胞（RA synovial fibroblasts,RASFs）凋亡异常在RA的病变进程中起着关键作用,最终导致滑膜的增生和一系列病理改变[2].最近研究发现RASFs中自噬与凋亡存在相关性,抑制自噬后RASFs凋亡增多[3-4],自噬可能参与了RASFs凋亡调节.所以对RASFs凋亡与自噬的研究有助于为RA治疗提供新的思路.

关键词：成纤维细胞凋亡滑膜成纤维细胞类风湿关节炎自噬炎性细胞浸润系统治疗自身免疫病慢性炎症

miR-140-5p调控类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和侵袭机制的研究

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中国免疫学杂志 2019年第3期35卷 345-349页

作者：程龙徐五琴张鹏黄建军李小宁皖南医学院弋矶山医院检验科芜湖241001 皖南医学院弋矶山医院病理科芜湖241001

目的:研究microRNA-140-5p(miR-140-5p)对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(SFs)增殖、侵袭的调控作用机制。方法:体外分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs),分为空白对照组、脂质体对照组及miR-140-5p mimic组。脂质体对照组将脂... 详细信息

目的:研究microRNA-140-5p(miR-140-5p)对类风湿关节炎患者滑膜成纤维细胞(SFs)增殖、侵袭的调控作用机制。方法:体外分离培养类风湿关节炎滑膜成纤维细胞(RASFs),分为空白对照组、脂质体对照组及miR-140-5p mimic组。脂质体对照组将脂质体2000转染入滑膜细胞; miR-140-5p mimic组使用脂质体2000为载体将miR-140-5p转染入滑膜细胞。分别采用MTT法、Transwell小室法检测三组RASFs增殖、侵袭的情况; q PCR和Western blot检测miR-140-5p对RASFs Toll样受体4(TLR4)表达的影响。结果:MTT及Transwell法检测结果显示:脂质体空白转染对RASFs增殖及侵袭能力均无显著影响(P>0. 05)。miR-140-5p转染后呈过表达,RASFs吸光度值为0. 42±0. 03,穿膜细胞数为49. 27±6. 18,均明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。q PCR及Western blot分析结果显示,miR-140-5p mimic组RASFs中TLR4 mRNA、TLR4蛋白表达水平明显低于空白对照组,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论:miR-140-5p可有效抑制RASFs增殖及侵袭能力,在RA的发生中起着重要作用,其机制可能与下调TLR4的表达有关。

关键词： miR-140-5p 类风湿关节炎滑膜成纤维细胞 Toll样受体4