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柑橘木虱高效生防真菌—爪哇虫草菌株的筛选及其致病力研究

柑橘木虱高效生防真菌—爪哇虫草菌株的筛选及其致病力研究

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作者：欧达华南农业大学

学位级别：硕士

亚洲柑橘木虱Diaporina citri Kuwayama是世界柑橘产业危害最严重的害虫之一,也是柑橘黄龙病(HLB)的最主要传播媒介。防控柑橘木虱是切断柑橘黄龙病传播扩散的最有效途径,而由于化学防治的不可持续性和负面影响,柑橘木虱的生物防治目前... 详细信息

亚洲柑橘木虱Diaporina citri Kuwayama是世界柑橘产业危害最严重的害虫之一,也是柑橘黄龙病(HLB)的最主要传播媒介。防控柑橘木虱是切断柑橘黄龙病传播扩散的最有效途径,而由于化学防治的不可持续性和负面影响,柑橘木虱的生物防治目前被认为是最有前景的方法。本论文首先从野外分离筛选出对柑橘木虱具有良好防效的菌株,并就该菌株对柑橘木虱的致病力进行了研究,丰富了现有昆虫病原真菌资源库的同时,也为进一步研制高效微生物杀虫剂奠定了良好的物质与技术基础。本文主要研究结果如下:(1)虫生真菌菌株的分离鉴定。从华南农业大学长岗山九里香叶片上的罹病柑橘木虱成虫虫体上分离获得一株野生虫生真菌,命名为GZQ-1。分离纯化后接种于PDA平板培养基,其菌落具同心圈纹,菌丝体质地绒状,菌落中心为淡粉色孢子,菌落边缘菌丝为白色,菌落背面淡棕色,呈放射状生长。其成熟菌落呈棕灰色。分生孢子梗直,分生孢子呈长卵型,且相连成链。提取菌株GZQ-1的总DNA,以通用引物ITS4和ITS5扩增菌株的r DNA ITS序列,将其提交到Gen Bank数据库获得Gen Bank登录号MG742216,与Gen Bank中虫草属(Cordyceps)爪哇虫草(Cordyceps javanica,前称爪哇棒束孢Isaria javanica)菌株(Gen Bank登录号为MG837718)的对应序列相似性达到100%。综合菌株GZQ-1的形态特征和ITS序列比对结果,将该菌株鉴定为爪哇虫草(***)。该菌株于2018年8月20日保藏于广东省微生物菌种保藏中心,保藏编号为:GDMCC No:60437。(2)GZQ-1菌株的生物学特性及致病力研究。研究发现爪哇虫草在SDAY/4培养基上培育10天后,其菌落直径达到42.3±1.86 mm,产孢量为2.26×10孢子/m L,均优于对照菌株。同时本研究评估了5个分生孢子浓度的爪哇虫草孢子悬浮液(1×10、1×10、1×10、1×10、1×10孢子/mL)对6个龄期的柑橘木虱(1-5龄若虫和成虫)的致病力。结果表明爪哇虫草GZQ-1对柑橘木虱若虫(69.49%-90.87%)和成虫(69.98%)都具有高致病性。(3)GZQ-1菌株对柑橘木虱室内及半田间防治实验。本研究评估了其对柑橘木虱1-2龄(低龄)、3-4龄(高龄)、5龄(末龄)若虫及成虫的LC和LT的值,分别为1.20×10、1.10×10、4.47×10、8.12×10孢子/mL和4.25、4.51、5.17、5.49天。此外,半田间试验表明,与之前实验室中分离到的另外两株虫生真菌菌株——玫烟色虫草(Cordyceps fumosorosea,IF010,前称玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea)和绿僵菌(Metarhizium anisopliae,CNGD7)相比,爪哇虫草GZQ-1引起了柑橘木虱成虫更高的感染率和致病力。(4)GZQ-1真菌可湿性粉剂的初步研发。将爪哇虫草、蜜糖、酵母、无菌水、纤维素、吐温-80、滑石粉等成分按照一定配比制成滑石基质爪哇虫草孢子制剂成品剂型,并进行初步的产品质量测定。结果表明,吐温-80的添加显著提高了此剂型的致病力,在室温条件下,其2日及30日孢子萌发率分别达到了98.9±1.8%及91.6±2.4%,相较于纯孢子保藏时间更持久。(5)GZQ-1菌株滑石基质可湿性粉剂对柑橘木虱的室内及半田间防治实验。将制剂成品和纯孢子粉对柑橘木虱2龄若虫进行喷雾法的室内生物测定,结果表明,可湿性粉剂致病力并不弱于纯孢子粉,1×10孢子/mL浓度制剂的LC为1.13×10;在半田间条件下用滑石基质爪哇虫草孢子制剂悬浮液(1×10孢子/mL)处理柑橘木虱成虫,以玫烟色虫草菌株IF010及无菌水作为对照,在处理后第7天,该制剂对柑橘木虱成虫致死率达到了44%,显著高于玫烟色虫草(IF010)及无菌水。

关键词：柑橘木虱爪哇虫草生物防治虫生真菌滑石基质可湿性粉剂

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