检索结果-南通市图书馆

作者：贾盼盼河南大学

学位级别：硕士

背景眼晶状体蛋白变性形成非透明样斑块组织,致使光线不能投射到视网膜形成图像,这一眼部疾病称为白内障。白内障发病率达到60%-80%,是导致失明的主要原因,将近50%的失明是由白内障引起的。正常情况下,人眼中的晶状体组织是透明的,光线... 详细信息

背景眼晶状体蛋白变性形成非透明样斑块组织,致使光线不能投射到视网膜形成图像,这一眼部疾病称为白内障。白内障发病率达到60%-80%,是导致失明的主要原因,将近50%的失明是由白内障引起的。正常情况下,人眼中的晶状体组织是透明的,光线能够透过它到达视网膜,使人们清晰地看到物体。晶状体由两种细胞组成,前囊立方上皮细胞和纤维细胞。赤道区前囊上皮细胞具有无限增生的能力,并且能持续向纤维细胞分化,因此可知晶状体是一个终生生长的器官。纤维细胞分为前囊上皮下的皮质纤维细胞和核心区的终末分化纤维细胞,终末分化的纤维细胞能合成大量折叠有序的晶状体蛋白,并且主动失去细胞内的膜性亚细胞器(包括细胞核、内质网、线粒体、高尔基体等),形成能折射光线的中心透明区(也称OFZ,organelle free zone),但纤维细胞终末分化的去膜性亚细胞器的机理还不清楚。有报道发现溶酶体介导的自噬和泛素-蛋白酶体是调控去亚细胞器的主要通路,溶酶体腔内的DNaseⅡbeta和水解酶参与晶状体纤维细胞核和膜性亚细胞器的降解,基因敲除DNaseⅡbeta的小鼠晶状体纤维细胞脱核障碍,形成非透明的白内障。然而,在终末纤维细胞分化过程中,调控溶酶体活性的信号通路仍不清楚。热休克转录因子4是热休克转录因子家族成员之一,该家族转录因子能感受外界和细胞内源性应激刺激,上调热休克蛋白家族成员的表达,后者通过对变性蛋白的复性、分割和降解,达到对细胞生命的保护,这一过程成为热休克应激反应。热休克转录因子4主要表达在晶状体、脾、心脏和脑组织中。Hsf4基因突变与家族显性遗传性白内障的发生密切相关,基因敲除Hsf4的小鼠发生先天性白内障,主要表现为出生后小鼠晶状体纤维细胞分化障碍,终末分化纤维细胞脱核延迟。Hsf4主要表达在晶状体上皮细胞和纤维细胞的核内。有报道发现Hsf4参与调控DNaseⅡbeta的基因表达。因此我们推论Hsf4通过调控纤维细胞溶酶体活性继而参与终末分化纤维细胞的脱核作用。本课题将设计一系列实验验证Hsf4参与调控纤维细胞溶酶体活性的分子机制。目的应用小鼠晶状体上皮细胞系mlec-Hsf4b-/-、mlec-HA-Hsf4b研究Hsf4调控溶酶体活性的分子机制。方法1.收集mlec-Hsf4b-/-、mlec-HA-Hsf4b细胞,用Western-blot检测细胞内LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ的比例;应用免疫荧光观察LC3自噬活化颗粒的数量,揭示Hsf4对自噬通路的调控作用。2.应用表达GFP-LC3质粒,分别转染mlec-Hsf4b-/-、mlec-HA-Hsf4b细胞,用雷帕霉素Rapamycin和氯喹Chloroquine分别处理细胞,Rapamycin激活细胞内的自噬,Chloroquine则抑制溶酶体对自噬小体的降解,应用Western-blot检测GFP-LC3分子中GFP的降解速度,观察Hsf4对溶酶体活性的检测;3.不同浓度Chloroquine处理转染GFP-LC3的mlec-Hsf4b-/-、mlec-HA-Hsf4b,Western-blot观察游离GFP的变化;4.用Western-blot、免疫荧光检测溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2(溶酶体标记物)在mlec-Hsf4b-/-、mlec-HA-Hsf4b的表达和定位,测定Hsf4对溶酶体数量和活性的调控;5.用Magic Red染色,免疫荧光检测溶酶体内Cathepsin B的活性,从而检测mlec-Hsf4b-/-、mlec-HA-Hsf4b内溶酶体Cathepsin B的活性是否受Hsf4b调控;6.免疫共沉淀CO-IP检测alpha B-crystallin是否与ATP6VIA有相互作用,验证Hsf4b是否通过其下游蛋白影响溶酶体活性。结果1.过表达Hsf4b导致细胞内自噬反应增强;***短时间处理,晶状体上皮细胞自噬增强。处理时间延长后,mlec-HA-Hsf4b的LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ明显降低,可能由于Hsf4b促进溶酶体活性将更多的LC3-Ⅱ降解;***4b能增加GFP-LC3分子中GFP在溶酶体中的降解。晶状体上皮细胞经雷帕霉素(Rapamycin)处理后,细胞内溶酶体活性整体升高;4.不同浓度氯喹(Chloroquine)处理两种晶状体上皮细胞,可明显的增加GFP-LC3在mlec-HA-Hsf4b细胞内的堆积,说明Hsf4b能提高溶酶体对GFP分子的降解速度;*** Red染色发现Hsf4b能增加Cathepsin B的蛋白酶水解活性,直接说明Hsf4b增强溶酶体活性;6.通过Western-blot检测溶酶体相关膜蛋白LAMP1、LAMP2在晶状体上皮细胞的表达发现,Hsf4b不影响溶酶体的数量,但通过免疫荧光发现Hsf4b影响溶酶体的定位

关键词： Hsf4 自噬溶酶体活性晶状体发育白内障

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维生素D对创伤性脑损伤大鼠学习记忆及脑组织溶酶体钙通道蛋白Mcoln-1的影响

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中华行为医学与脑科学杂志 2020年第7期29卷 589-593页

作者：韩光魁赵月姝孙翠莲崔昌萌济宁医学院附属医院神经外科 272000

目的:研究大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后给予维生素D(Vitamin D,VD)治疗对大鼠认知功能、海马组织与皮层组织内溶酶体活性及其钙通道蛋白Mcoln-1的影响。方法:45只SD大鼠随机分为3组(每组15只):空白对照组(Sham组)、... 详细信息

目的:研究大鼠创伤性脑损伤(traumatic brain injury,TBI)后给予维生素D(Vitamin D,VD)治疗对大鼠认知功能、海马组织与皮层组织内溶酶体活性及其钙通道蛋白Mcoln-1的影响。方法:45只SD大鼠随机分为3组(每组15只):空白对照组(Sham组)、模型组(TBI组)和钙三醇(活性VD,Calcitriol)治疗组(Calcitriol组)。TBI组和Calcitriol组大鼠采用电子脑皮质撞击仪进行TBI造模。Calcitriol组于TBI造模后30 min、24 h、48 h经腹腔注射给予1μg/kg的Calcitriol。造模3 d后,Western blot检测海马组织和皮层组织中Mcoln-1、LAMP-1和cathepsin-B的蛋白表达水平,免疫荧光检测Mcoln-1与神经元的共定位情况。三组大鼠均于第8、9、10天进行Morris水迷宫测试。结果:Morris水迷宫结果显示,与Sham组[(19.54±3.54)s;(18.64±4.63)s;(17.64±5.88)s]比较,在造模后第8、9、10天TBI大鼠寻找平台逃避潜伏期[(58.75±6.65)s;(50.64±5.56)s;(42.64±5.87)s]分均显著增加(t=18.042,14.325,10.117;均P0.05)。与TBI组大鼠比较,Calcitriol组大鼠皮层和海马组织Mcoln-1蛋白表达均升高,差异有统计学意义(t=18.862,17.336;均P<0.05)。免疫荧光结果显示,Calcitriol组大鼠的皮层和海马组织内Mcoln-1与NeuN(神经元标记物)的表达存在共定位。结论:VD能够改善大鼠TBI后学习记忆功能障碍,其机制可能与激活Mcoln-1钙通道有关。

关键词：维生素D 脑创伤自噬流溶酶体活性大鼠

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溶酶体在镉诱导WRL-68细胞自噬过程中作用的研究

溶酶体在镉诱导WRL-68细胞自噬过程中作用的研究

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作者：孟素芳南京师范大学

学位级别：硕士

本实验室已有研究证明：低浓度镉(cadmium, Cd;<10μM)可以诱导WRL-68细胞自噬,并不诱导WRL-68细胞凋亡。虽然目前已明确溶酶体参与细胞自噬,但是镉诱导WRL-68细胞自噬过程中溶酶体功能活性是如何被调控的尚不明确。本研究旨在探究镉诱... 详细信息

本实验室已有研究证明：低浓度镉(cadmium, Cd;溶酶体参与细胞自噬,但是镉诱导WRL-68细胞自噬过程中溶酶体功能活性是如何被调控的尚不明确。本研究旨在探究镉诱导WRL-68细胞自噬过程中影响溶酶体功能活性的主要因素。首先分析镉诱导WRL-68细胞自噬过程中溶酶体的活性;其次分析WRL-68细胞自噬过程中溶酶体的功能活性与自噬体-溶酶体融合的关系;然后分析溶酶体酸性与溶酶体功能活性的关系;最后分析胞内钙离子浓度与溶酶体功能活性之间的关系。本实验运用细胞培养、透射电子显微镜、Western blot、激光共聚焦和荧光显微镜等细胞生物学实验技术,通过对低浓度镉(溶酶体功能活性在镉诱导WRL-68细胞自噬过程的作用。具体实验结果如下：1.镉诱导WRL-68细胞自噬过程中溶酶体活性分析WRL-68细胞暴露于低浓度CdCl2(溶酶体的功能活性,抑制自噬体形成时,溶酶体的活性也下降。2.溶酶体功能活性与自噬体-溶酶体融合关系分析WRL-68细胞暴露于低浓度镉发生自噬,同时自噬体溶酶体融合增加;但联合加入TG时,自噬体溶酶体融合减少。加入TG后降低了Cathepsin L的表达量,LAMP2与GFP-LC3的共定位明显减少,但LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量却增加。因此溶酶体的活性依赖于自噬体和溶酶体的融合,当抑制WRL-68细胞内自噬体-溶酶体的融合,溶酶体活性降低。3.溶酶体酸性与溶酶体的功能活性关系分析WRL-68细胞暴露于低浓度镉诱导发生自噬。用LysoTracker Red染色,当WRL-68细胞中加入Cd时,LysoTracker染色增加,说明溶酶体酸性增加;但联合加入CQ时,LysoTracker染色减少,说明溶酶体酸性降低。加入CQ后,Cathepsin L的表达量降低,但LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达量增加,LAMP2与GFP-LC3共定位却减少。因此在WRL-68细胞中溶酶体的功能活性与溶酶体的酸性有关,当溶酶体的酸性降低时,溶酶体的功能活性也随之下降。4.胞内钙离子浓度与溶酶体功能活性关系分析WRL-68细胞暴露于低浓度镉发生自噬。当WRL-68细胞暴露于8μM Cd时,LysoTracker荧光强度增加,联合加入CQ时荧光强度降低,然而在联合加入2-APB时荧光强度并没有多大的变化。在联合加入CQ或2-APB时胞内钙离子浓度降低GFP-LC3与LAMP2融合也减少。酸性、细胞内Ca2+浓度和Cathepsin L的表达量降低,LAMP2与GFP-LC3的共定位也明显减少,但LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达量增加。在WRL-68细胞中溶酶体的功能活性与胞内Ca2+之间会相互影响,溶酶体的酸性对胞内Ca2+的浓度水平影响较大,而胞内Ca2+浓度对溶酶体的酸性影响较小。本研究在WRL-68细胞暴露于低浓度Cd(溶酶体功能活性增强,且自噬体-溶酶体融合、溶酶体的酸性和细胞内钙离子都会影响溶酶体的功能活性。

关键词：镉 WRL-68细胞自噬溶酶体活性自噬体-溶酶体融合酸性胞内钙离子

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装载吉非罗齐靶向外泌体的构建及其对阿尔茨海默病小鼠治疗作用机制的研究

装载吉非罗齐靶向外泌体的构建及其对阿尔茨海默病小鼠治疗作用机...

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作者：郝运妮锦州医科大学

学位级别：硕士

目的阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD),一种老年生活中的常见的神经退行性疾病,疾病的确切原因尚未明确,截至现在β-淀粉样蛋白沉积形成老年斑仍是其相对主流的发病机制。近年来,溶酶体功能障碍使得细胞废物积累导致AD发病及发展的... 详细信息

目的阿尔茨海默症(Alzheimer disease,AD),一种老年生活中的常见的神经退行性疾病,疾病的确切原因尚未明确,截至现在β-淀粉样蛋白沉积形成老年斑仍是其相对主流的发病机制。近年来,溶酶体功能障碍使得细胞废物积累导致AD发病及发展的这一病理学认识为AD的预防和治疗提供了又一新的研究方向,通过增强溶酶体活性来促进细胞废物清除已成为一个有吸引力的研究方向。吉非罗齐(Gemfibrozil,Gem)可通过激活转录因子PPARα,促进TFEB核易位,进而促进溶酶体的生物发生,增强溶酶体内的蛋白水解酶活性,但由于其水溶性差难以透过血脑屏障,极大地限制了其临床应用。外泌体(Exo)具有脂质双分子结构,这为Exo有效装载药物提供了可能,进而增强药物的溶解性、提高稳定性和生物利用度,且可通过对其修饰,使其具有靶向性。本研究拟利用经修饰后的巨噬细胞来源外泌体装载吉非罗齐,以讨论其对于改善AD小鼠认知障碍的机制方面的研究。方法该研究首先通过紫外分光光度法(UV)建立了针对Gem含量检测的测定方法,并对其进行了线性、精密度、回收率等方法学的验证;通过梯度超速离心和孵育法制备MExo-Gem,采用聚丙烯酰胺凝胶电泳及薄层色谱法考察外泌体是否靶向修饰成功,采用透射电镜(TEM)、粒度分析仪、蛋白质免疫印迹法(Western Blot)考察MExo-Gem的形态、粒径、标志蛋白等参数;通过体内外免疫荧光实验证实其在脑内积累和靶向至小胶质细胞的能力。体外试验中,通过Western Blot法、免疫荧光法、ELISA实验对MExo-Gem在Aβ1-42刺激的细胞模型中的作用机制进行探究。同时,体外实验中,通过水迷宫实验对AD模型小鼠的认知障碍改善情况进行考察。通过尼氏染色和免疫荧光染色,对MExo-Gem在AD小鼠模型中的作用机制进行进一步验证。结果Gem的UV定量分析方法中的方法学参数均符合方法学要求。聚丙烯凝胶电泳和薄层色谱实验结果表明外泌体靶向修饰成功。体内外细胞摄取实验结果表明MExo-Gem可在脑内蓄积并且与小胶质细胞具有明显共定位。一系列外泌体表征实验证实,MExo-Gem结构完整,粒度均一,且载药及修饰后对其结构和性质无影响。Western Blot法、免疫荧光法、ELISA等实验结果可观察出MExo-Gem可通过激活PPARα,促进TFEB核易位,进而促进溶酶体的生物发生,减少细胞及脑内Aβ蓄积。水迷宫实验、免疫荧光实验及尼氏染色结果显示,MExo-Gem可显著减少小鼠脑内Aβ1-42的聚积,逆转神经元损伤,进而显著改善AD模型小鼠认知障碍。结论我们的结果表明,甘露糖修饰装载Gem的外泌体(MExo-Gem)可以通过血脑屏障在海马区蓄积,并且通过外泌体上修饰的甘露糖和小胶质细胞上表达的甘露糖受体之间的相互作用,使外泌体特异性靶向至小胶质细胞,使更多的药物在小胶质细胞内浓集。MExo-Gem进入细胞内释药增强溶酶体活性,进一步促进小胶质细胞内的Aβ清除,以达到减少脑内Aβ总量,改善AD模型小鼠的学习记忆能力。

关键词：阿尔茨海默病 Aβ聚集小胶质细胞溶酶体活性吉非罗齐外泌体

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氧化石墨烯量子点对雄性生殖细胞系GC-2/TM4自噬及代谢的影响

氧化石墨烯量子点对雄性生殖细胞系GC-2/TM4自噬及代谢的影响

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作者：嵇晓丽南京医科大学

学位级别：硕士

氧化石墨烯量子点(GOQDs)是一种零维的纳米材料,结构与石墨烯相似,但是横径小于100nm。与石墨烯相比,GOQDs表现出更强的量子限域效应和边界效应,具有更多独特的性能,包括更好的表面可塑性、可调节的荧光发射、稳定的光致发光等。所以,GO... 详细信息

氧化石墨烯量子点(GOQDs)是一种零维的纳米材料,结构与石墨烯相似,但是横径小于100nm。与石墨烯相比,GOQDs表现出更强的量子限域效应和边界效应,具有更多独特的性能,包括更好的表面可塑性、可调节的荧光发射、稳定的光致发光等。所以,GOQDs在多个领域都有着广泛的应用前景,包括生物成像、药物递送、DNA切割系统、传感器和光催化等。由于其广泛的应用,GOQDs的安全性问题也越来越受到重视。一些研究表明GOQDs在体内、外都是低毒的,但是也有研究发现GOQDs能够显著增加细胞内活性氧的产生,导致细胞凋亡和自噬性细胞死亡,以及细胞DNA损伤。纳米材料由于尺径较小且易造成炎症反应,所以容易穿过血睾屏障,对雄性生殖细胞造成损害作用。纳米材料还易造成细胞自噬流紊乱,而细胞自噬对精子存活具有重要作用且与细胞代谢密切相关。然而,目前尚无GOQDs对雄性生殖系统影响的相关研究报道。GC-2细胞系、TM4细胞系分别是小鼠精母细胞和小鼠睾丸支持细胞永生化的细胞系,是研究外源性化学物雄性生殖毒性及机制的良好模型。本研究中,我们首次评估了 GOQDs对这两种雄性生殖细胞系的毒性作用,并从细胞自噬和细胞代谢的角度对相关机制进行了深入探讨。第一部分氧化石墨烯量子点对GC-2/TM4细胞自噬的影响及机制氧化石墨烯量子点(GOQDs)在许多领域都有着广泛的应用前景,所以其生物安全性问题也越来越受到重视。但是目前关于GOQDs的雄性生殖毒性研究仍然缺乏。本研究采用小鼠精母细胞系(GC-2)和小鼠睾丸支持细胞系(TM4)两个细胞模型,探讨GOQDs对雄性生殖细胞的影响及分子机制。研究发现,100μg/mL的GOQDs作用于GC-2和TM4细胞24h后,不影响细胞活力,但导致了细胞凋亡。电镜结果显示,与对照组相比100 μg/mL的GOQDs处理组的细胞自噬体显著增多,Westernblot结果也显示LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著增加。然而,自噬性底物p62的水平也显著增加,并且氯喹和GOQDs共同处理组与氯喹单独处理组相比,LC3-Ⅱ的表达水平没有明显改变,说明GOQDs导致细胞自噬流受阻。进一步研究发现自噬体和溶酶体的融合正常,但溶酶体的降解能力减弱,组织蛋白酶B的表达和活性均降低。综上所述,本研究提示,GOQDs可以通过降低GC-2和TM4细胞的组织蛋白酶B的表达量和的酶活性,抑制溶酶体的降解能力,导致自噬流受阻,对雄性生殖细胞造成损伤。第二部分氧化石墨烯量子点对GC-2/TM4细胞代谢的影响代谢组学是新近发明的一种高通量组学分析方法,可以检测健康或疾病状态下代谢小分子和代谢通路的变化,有助于预测化学物的毒性,阐明外源性化学物的生物学机制。本研究采用代谢组学的分析方法进一步研究了 GOQDs染毒对GC-2、TM4细胞代谢的影响及其机制。结果表明,GOQDs作用于GC-2、TM4两种细胞后,多种代谢小分子发生改变。通路富集分析结果显示,两种细胞的蛋白合成通路均发生显著改变,支链脂肪酸的氧化、极长链脂肪酸的β-氧化、嘌呤代谢等代谢通路中也有多个小分子发生改变。此外,我们还发现GOQDs染毒后细胞内ATP水平显著下降。已有研究表明,自噬与细胞代谢密切相关,所以我们推测蛋白合成通路的改变很可能是由于GOQDs阻塞了细胞自噬流,抑制了细胞对蛋白聚集体的降解,从而导致了细胞内氨基酸水平紊乱,影响蛋白质的合成。而支链脂肪酸的氧化、极长链脂肪酸的β-氧化代谢通路的激活,可能是细胞ATP水平下降后产生的反馈调节作用。本研究首次应用代谢组学分析方法,阐述GOQDs对GC-2、TM4两种细胞代谢的影响,为GOQDs的雄性生殖毒性的机制研究提供了新的线索和理论依据

关键词：氧化石墨烯量子点自噬流溶酶体活性组织蛋白酶B 雄性生殖细胞代谢分析蛋白合成

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白藜芦醇与镉诱导HEK 293T细胞自噬与凋亡关系的初步研究

白藜芦醇与镉诱导HEK 293T细胞自噬与凋亡关系的初步研究

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作者：刘小綪南京师范大学

学位级别：硕士

本实验室的研究已经证明低浓度的镉(<10 μM)可以诱导细胞自噬,而在高浓度镉刺激下细胞会发生凋亡。本实验采用细胞培养、透射电子显微镜、Western blot,倒置相差显微镜、激光共聚焦、流式细胞术等细胞生物学技术,以HEK 293T细胞为研究... 详细信息

本实验室的研究已经证明低浓度的镉(溶酶体融合之间的关系;分析了白藜芦醇(RSV)的抗氧化性与镉诱导的自噬间的关系;探究白藜芦醇与镉诱导的细胞凋亡之间的关系。具体实验结果如下：1、白藜芦醇与镉诱导的HEK 293T细胞自噬的关系HEK 293T细胞悬液(5×105)接种于6孔培养板中,随机分成对照组和试验组。试验组：①细胞暴露于40μM中24 h;②细胞用白藜芦醇(40 μM)预处理1小时后暴露于(0-10μM)镉中24 h;③选用40 μM白藜芦醇和5 mM 3-MA联合8和10μ镉处理HEK 293T细胞24 h。本试验采用透射电子显微镜观察自噬体与自噬溶酶体;Western blotting分析自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ/Ⅰ表达量的变化;激光共聚焦显微镜分析GFP-LC3的点状聚集。结果显示,HEK 293T细胞暴露在镉后,发现细胞内自噬体数目明显增多。白藜芦醇能加强镉诱导的自噬,且在8和10μM时变化明显,加入自噬抑制剂3-MA后这种现象被抑制。提示：镉能诱导自噬,而白藜芦醇能够协同镉引起细胞自噬。2、白藜芦醇与镉诱导细胞自噬中自噬体-溶酶体融合的关系HEK 293T细胞悬液(5×105)接种于6孔板中,选用40 μM RSV和/或5mM3-MA分别联合8和10μM Cd处理KEK 293T细胞24 h;选用40 μM RSV和/或3μM TG分别联合8和10 μMCd处理KEK 293T细胞24 h。利用Western blotting分析溶酶体标志蛋白cathepsin L、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量;用激光共聚焦观察GFP-LC3和LAMP2的共定位。结果显示,在镉诱导的细胞自噬中,白藜芦醇能增强溶酶体的活性,而当自噬被抑制时溶酶体的活性也降低;加入自噬体溶酶体融合抑制剂TG以后,虽然增加了细胞的自噬能力,却降低了溶酶体的活性,而白藜芦醇未能改变这种结果。提示：白藜芦醇可能起作用的阶段是在自噬体溶酶体融合之前3、白藜芦醇的抗氧化性与镉介导的细胞自噬之间的关系HEK 293T细胞悬液(5×105)接种于6孔板中。试验组：细胞用白藜芦醇(40州)预处理1小时后暴露于(0-10μM)镉中24 h;用40μM RSV和/或1μMEX-527分别联合10μM镉处理KEK 293T细胞24 h;用40μM RSV和/或1μM EX-527分别联合1 mM H2O2处理KEK 293T细胞24h。利用酶标仪检测活性氧ROS的表达量;Western blotting分析SIRT1蛋白、自噬标志蛋白LC3B-Ⅱ/Ⅰ的表达量;用激光共聚焦GFP-LC3和LAMP2的共定位。结果显示,随着镉浓度的增加ROS也增加,而加入白藜芦醇后ROS降低;白藜芦醇能激活SIRT1,而当SIRT1的表达量被抑制时,白藜芦醇对自噬的促进作用也减弱。提示：白藜芦醇增强镉诱导的自噬可能都与其抗氧化性有关,而其中SIRT1起着重要的作用。4、白藜芦醇与镉诱导的细胞凋亡之间的关系HEK 293T细胞悬液(5×105)接种于6孔板中,适应性培养后,用40μMRSV、10μMCd、20μM Cd、10μM Cd+RSV和20 μM Cd+RSV分别处理HEK293T细胞。相应时间后用倒置相差显微镜观察细胞形态;Western blotting分析caspase-3的表达量;用流式细胞仪分析细胞凋亡数量。结果显示,HEK 293T细胞暴露于镉24 h后,细胞皱缩变形甚至死亡,而加入白藜芦醇后,细胞形态改变被抑制;镉诱导了caspase-3表达量增加,而加入白藜芦醇后被降低：镉诱导细胞凋亡可以被白藜芦醇阻滞。提示：白藜芦醇能抑制镉诱导的细胞凋亡。本研究在低浓度镉(0～10μM)诱导自噬的基础上进行。白藜芦醇能增强镉诱导的细胞自噬,而其作用阶段可能是在自噬体溶酶体融合之前,而且可能与白藜芦醇的抗氧化性有关,SIRT1可能在其中扮演着重要的角色,白藜芦醇还能抑制镉诱导的细胞凋亡。

关键词：镉 HEK 293T 白藜芦醇自噬溶酶体活性自噬体-溶酶体融合活性氧细胞凋亡

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