检索结果-南通市图书馆

作者：王赞嘉内蒙古民族大学

学位级别：硕士

本实验为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cyla基因对牛巨噬细胞吞噬功能和免疫调节的分子机制。利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株及cyla基因缺失突变株对牛巨噬细胞进行侵染。利用MTT检测法检测细胞活性,在明确细胞活性不受影响... 详细信息

本实验为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cyla基因对牛巨噬细胞吞噬功能和免疫调节的分子机制。利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株及cyla基因缺失突变株对牛巨噬细胞进行侵染。利用MTT检测法检测细胞活性,在明确细胞活性不受影响的条件下,进行下列检测。提取被侵染的巨噬细胞总m RNA,利用RT-qPCR手段检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α,以及NOS2的转录水平差异。利用ELISA方法检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α的表达情况。利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cyla基因对p38 MAPK信号通路的磷酸化水平,以明确其调控该信号通路的分子机制。在侵染实验前加入p38 MAPK信号通路抑制剂孵育巨噬细胞后,进行侵染实验,利用ELISA方法检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12和TNF-α的表达情况,以研究p38 MAPK信号通路抑制剂对细胞因子表达的影响。经过RT-qPCR检测结果发现,与cyla基因敲除菌株组相比,cyla阳性的粪肠球菌野生型菌株组在IL-10和TNF-α转录水平上调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平下调,并且均具有统计学意义。ELISA结果与RT-qPCR基本一致,其中TNF-α的表达水平提高,但是不具有统计学意义。Western blot检测p38 MAPK磷酸化水平,与cyla阳性的粪肠球菌野生型菌株组相比,cyla基因敲除菌株组p-p38的表达量降低,并且差异极显著。在加入p38 MAPK抑制剂后,ELISA结果显示与不添加p38MAPK抑制剂组相比,添加p38 MAPK抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达量降低,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平提高,并且具有统计学意义。根据上述结果表明,p38 MAPK信号通路为粪肠球菌β溶血素cyla基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,为通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控,为解决由粪肠球菌引起的乳源安全问题提供新的科学思路。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cyla基因细胞因子 p38MAPK

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

牛乳腺炎粪肠球菌逃逸巨噬细胞的分子机制研究

引用

内蒙古民族大学学报（自然科学版） 2024年第6期39卷 90-96页

作者：王赞嘉锡林高娃吴金花布日额石竞楠代牡兰内蒙古民族大学生命科学与食品学院内蒙古通辽028043 内蒙古自治区乳源性致病菌防控工程技术研究中心内蒙古通辽028043 内蒙古民族大学乳源性致病菌研究所内蒙古通辽028043

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cyla基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cyla基因缺失突变株(BME1708△cyla)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞... 详细信息

为研究牛乳腺炎粪肠球菌β溶血素cyla基因对牛单核巨噬细胞(BMC-7)吞噬功能和免疫调节的分子机制,利用牛乳腺炎粪肠球菌临床分离的野生型菌株(BME1708)及cyla基因缺失突变株(BME1708△cyla)对牛巨噬细胞进行侵染,利用MTT检测法检测细胞活性;在明确细胞活性不受影响的条件下,提取被侵染的BMC-7总mRNA,利用RT-qPCR检测细胞因子IL-4、IL-8、IL-10、IL-12、TNF-α以及NOS2的转录水平差异,采用ELISA法检测相应表达水平;利用Western blot检测牛乳腺炎粪肠球菌cyla基因对BMC-7的p38 MAPK信号通路磷酸化水平的影响;利用p38 MAPK信号通路抑制剂(PD 169316)孵育BMC-7,ELISA法检测相应细胞因子表达水平,以明确cyla基因调控该信号通路的分子机制。结果显示:与BME1708组相比,BME1708△cyla组在IL-10和TNF-α转录水平下调,IL-4、IL-8、IL-12以及NOS2转录水平上调,差异均具有统计学意义(Pcyla组IL-10表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12表达水平上调,差异均具有统计学意义(Pcyla基因可以激活p38 MAPK信号通路并使其磷酸化;在PD 169316孵育后,与未添加抑制剂组相比,添加抑制剂组的IL-10、TNF-α的表达水平下调,IL-4、IL-8、IL-12的表达水平上调,差异均具有统计学意义(P溶血素cyla基因发挥免疫调节机制的重要通路,该结论为奶牛乳腺炎的治疗及防控提供新的靶位,可通过其毒力的钝化以及对p38 MAPK信号通路进行识别及信号通路封闭,对粪肠球菌感染进行有效防控。

关键词：牛乳腺炎粪肠球菌溶血素cyla基因细胞因子 p38 MAPK

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：