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日本沼虾血清溶血素的活性研究

安徽农业科学 2013年第6期41卷 2508-2510,2530页

作者：褚衍亮王娜江苏科技大学生物与化学工程学院江苏镇江212018

[目的]为深入了解虾类的免疫机制提供科学依据和基础材料。[方法]以日本沼虾为材料,利用溶血试验和糖抑制试验测定其血清溶血素的溶血活性和糖抑制性,分析外界因子对其活性的影响。[结果]日本沼虾血清溶血素对鱼和鸡血细胞的敏感性较高... 详细信息

[目的]为深入了解虾类的免疫机制提供科学依据和基础材料。[方法]以日本沼虾为材料,利用溶血试验和糖抑制试验测定其血清溶血素的溶血活性和糖抑制性,分析外界因子对其活性的影响。[结果]日本沼虾血清溶血素对鱼和鸡血细胞的敏感性较高。D-葡萄糖对日本沼虾血清溶血素有促进作用,而D-甘露糖、D-山梨糖、α-乳糖、L-鼠李糖,D-阿拉伯糖则有抑制作用。在50～60℃条件下溶血素的溶血作用较强,70℃及以上血清发生变性,无溶血活性。该溶血素pH作用范围广,在pH 2～12内对鸡血细胞都有溶血作用,其中pH 6～9溶血效果较好。最适盐度范围为3～5。溶血素对金属离子Cu2+敏感,其活性被完全抑制。敌百虫和乙酰甲胺磷可影响溶血素活性。葎草、生姜黄酮和葎草、桑叶多糖可增强日本沼虾血清的溶血活性。[结论]日本沼虾血清溶血素活性可随环境条件的影响而变化,具有一定的稳定性,是虾类免疫反应的重要组成部分。

关键词：日本沼虾血清溶血素活性糖抑制

问号钩端螺旋体鞘磷酯酶类溶血素Sph2原核表达及诱导细胞凋亡活性研究

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问号钩端螺旋体鞘磷酯酶类溶血素Sph2原核表达及诱导细胞凋亡活性...

作者：丁士标浙江大学

学位级别：硕士

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)感染细胞前后sph2基因表达水平变化,确定鞘磷脂酶类溶血素Sph2诱导人和鼠单核-巨噬细胞、肝细胞凋亡的活性及其机制。方法采用实时荧光定量PCR检测问号钩体赖株感染小鼠单核-巨噬细胞J774A.1、小鼠肝细... 详细信息

目的了解问号钩端螺旋体(简称钩体)感染细胞前后sph2基因表达水平变化,确定鞘磷脂酶类溶血素Sph2诱导人和鼠单核-巨噬细胞、肝细胞凋亡的活性及其机制。方法采用实时荧光定量PCR检测问号钩体赖株感染小鼠单核-巨噬细胞J774A.1、小鼠肝细胞IAR20和人肝细胞L-02、人单核-巨噬细胞THP-1后sph2基因mRNA水平变化。采用PCR从黄疸出血群赖型赖株钩体基因组DNA中扩增全长sph2基因片段并构建sph2基因原核表达系统,采用SDS-PAGE检查重组Sph2(rSph2)的表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rSph2。采用绵羊血平板溶血试验及血红蛋白分光光度法测定rSph2的溶血活性;采用流式细胞术检测重组表达的Sph2(rSph2)诱导J774A.1、IAR20、L-02和THP-1细胞凋亡活性。采用FITC标记rSph2(FITC-rSph2),检测FITC-rSph2内化进入细胞的情况。结果问号钩体赖株感染细胞后0.25-2 h,其sph2基因mRNA水平开始上升,最高时可达感染前的4-8倍(P溶血素在问号钩体致病过程中发挥作用。rSph2不仅可损伤单核-巨噬细胞和肝细胞细胞膜,还可诱导上述细胞发生凋亡,故Sph2是问号钩体重要的毒力因子,与钩体病时黄疸和肺出血密切相关。rSph2诱导细胞凋亡机制可能与其水解细胞膜鞘磷脂产生神经酰胺、损伤线粒体膜导致多种凋亡或促凋亡因子释放、激活细胞凋亡线粒体和神经酰胺途径有关。

关键词：问号钩端螺旋体鞘磷脂酶类溶血素 sph2基因溶血素活性细胞凋亡

百日咳杆菌腺苷酸环化酶毒素的功能性应用研究进展

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广东医学 2010年第2期31卷 247-249页

作者：石碧珠孟民杰张华捷中国药品生物制品检定所血清室北京100050 广东药学院生命科学与生物制药学院广州510006

百日咳杆菌分泌的腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, CyaA)是百日咳杆菌的重要致病因子之一,同时也是诱发机体产生抗百日咳免疫的潜在保护性抗原之一.近年来的研究表明,CyaA不仅具有腺苷酸环化酶活性和溶血素活性,还在疫苗佐... 详细信息

百日咳杆菌分泌的腺苷酸环化酶毒素(adenylate cyclase toxin, CyaA)是百日咳杆菌的重要致病因子之一,同时也是诱发机体产生抗百日咳免疫的潜在保护性抗原之一.近年来的研究表明,CyaA不仅具有腺苷酸环化酶活性和溶血素活性,还在疫苗佐剂、抗原呈递、蛋白疫苗载体、肿瘤治疗和免疫调节等方面,有深入的研究价值.本文主要对百日咳杆菌CyaA的应用研究现状作一综述,旨在对CyaA的研究价值进行探讨.

关键词：腺苷酸环化酶百日咳杆菌毒素功能性免疫调节保护性抗原溶血素活性致病因子

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EGCG抑制单增李斯特菌的机理研究

EGCG抑制单增李斯特菌的机理研究

作者：杜文芳武汉轻工大学

学位级别：硕士

单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,可污染肉、奶、蛋、水产品及蔬菜等食品。生物膜是由细菌和自身分泌的多糖、蛋白质、DNA等胞外基质组成的结构,单增李斯特菌具有较强的生物膜形成能力,生物膜的存在加大了单增李斯特菌污染的风险... 详细信息

单增李斯特菌是一种重要的食源性致病菌,可污染肉、奶、蛋、水产品及蔬菜等食品。生物膜是由细菌和自身分泌的多糖、蛋白质、DNA等胞外基质组成的结构,单增李斯特菌具有较强的生物膜形成能力,生物膜的存在加大了单增李斯特菌污染的风险。单增李斯特菌通过产生溶血素和磷脂酰肌醇特异性磷脂酶(PI-PLC)等毒力因子,从而入侵并寄生在宿主细胞中,造成机体发病。茶多酚为茶叶中多酚类物质的总称,表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶多酚中最有效的活性成分,对单增李斯特菌等致病菌有显著的抑菌效果。尽管EGCG在食品生产中的应用越来越广泛,但EGCG对单增李斯特菌的抑菌机理并未研究清楚,尤其是EGCG对其生物膜形成和毒力的影响很少报道。因此,本文以单增李斯特菌ATCC 19114为研究对象,研究低浓度的EGCG对该菌生物膜和毒力的影响,并进一步探讨EGCG的抑菌机制。本文主要研究结果如下:1、EGCG对单增李斯特菌生物膜形成的影响。通过微量稀释法测得EGCG对单增李斯特菌ATCC 19114最低抑菌浓度(MIC)为200μg/mL,最低杀菌浓度(MBC)为3.2mg/mL。单增李斯特菌在聚苯乙烯微量滴定板上15℃下培养6天,30℃和37℃下分别培养72小时。结晶紫染色法和平板菌落计数法测定结果均显示,亚抑菌浓度(20μg/mL、40μg/mL)和最低抑菌浓度的EGCG能显著减少单增李斯特菌的生物膜形成。在含有不同浓度EGCG的0.3%软琼脂培养基上,培养单增李斯特菌ATCC19114。结果显示,亚抑菌浓度(20μg/mL、40μg/mL)的EGCG显著抑制单增李斯特菌泳动性。逆转录荧光定量PCR结果表明,EGCG(40μg/mL和200μg/mL)均显著下调agrA基因转录水平。EGCG可能通过抑制Agr群体感应系统,抑制单增李斯特菌生物膜形成。2、EGCG对单增李斯特菌毒力的影响。将单增李斯特菌ATCC 19114在含有不同浓度EGCG的培养基中培养至稳定期,提取上清液后测定绵羊血细胞(SRBC)裂解率。结果表明,EGCG(40μg/mL和200μg/mL)干预组SRBC裂解程度明显低于对照组,即EGCG可以抑制单增李斯特菌溶血素活性。通过蛋黄卵磷脂的降解实验评估EGCG对单增李斯特菌PI-PLC活性的影响。EGCG(40μg/mL和200μg/mL)干预组对蛋黄卵磷脂降解速率明显低于对照组,表明EGCG可以使单增李斯特菌PI-PLC活性降低。将EGCG与单增李斯特菌ATCC 19114共培养18小时,离心洗涤菌体后加入多粘菌素B孵育半小时,然后取上清作为试样,诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞凋亡。结果显示,与对照组相比,EGCG(40μg/mL、200μg/mL和1mg/mL)处理组小鼠巨噬细胞凋亡率明显降低,表明EGCG可降低单增李斯特菌毒力。荧光定量PCR结果表明,EGCG(40μg/mL、200μg/mL)使单增李斯特菌溶血素编码基因hly、磷脂酰肌醇特异性磷脂酶编码基因plcA和内化素A编码基因inlA表达下调。3、EGCG对单增李斯特菌氧化应激的影响。用20μg/mL、40μg/mL、200μg/mL和1mg/mL EGCG分别处理单增李斯特菌ATCC 19114后,测定细菌胞内活性氧(ROS)、过氧化氢(HO)和超氧化物歧化酶(SOD)含量变化。结果显示亚抑菌浓度EGCG(20μg/mL、40μg/mL)使单增李斯特菌ROS和HO水平显著降低,但对SOD活力无明显影响。高浓度EGCG(1mg/mL)导致单增李斯特菌ROS和HO水平显著增高,但SOD活力显著下降。表明低浓度EGCG可降低细菌总ROS。而高浓度EGCG(1mg/mL)则可能激活单增李斯特菌氧化应激反应,从而抑制细菌生长。基因recA和yneA分别与单增李斯特菌SOS反应和氧化应激反应密切相关。荧光定量PCR结果显示,低浓度EGCG(40μg/mL、200μg/mL)使recA和yneA表达下调。综上所述,本文发现,亚抑菌浓度的EGCG可以显著抑制单增李斯特菌形成生物膜。低浓度EGCG可抑制单增李斯特菌溶血素活性和PI-PLC活性,并降低其毒力。以上结果表明EGCG可作为一种天然防腐剂用于食品保鲜,可有效防控单增李斯特菌造成的污染。

关键词：单增李斯特菌 EGCG 生物膜溶血素活性氧化应激

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抗生素后效应的研究进展及其临床意义

儿科药学 2000年第2期6卷 4-6页

作者：许静赵真玲吴学晋南京市儿童医院 210008

抗生素后效应(Post－antibiotic effect,Pae)系指细菌与抗生素短暂接触,当药物浓度下降,低于MIC或消除后,细菌的生长仍受到持续抑制的效应。从微观角度讲。

关键词：抗生素后效应合理用药 β-内酰胺类抗生素氨基糖甙类抗生素溶血素活性