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溶葡球菌酶的纯化,性质与抑菌试验

工业微生物 1992年第1期22卷 16-21页

作者：马力周润琦

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溶葡球菌酶高效表达与应用

中国生物工程杂志 2017年第9期37卷 118-125页

作者：王曦陈熙明浦铜良兰州大学生命科学学院兰州730000 中国科学院西北生态环境研究院兰州730000

溶葡球菌酶(lysostaphin,Lys)是采用基因克隆技术使溶葡球菌酶基因实现外源表达所产生的蛋白质。它是Zn2+依赖的金属蛋白酶,具有肽链内切酶活性,能专一性地水解葡萄球菌细胞壁Gly五肽桥联,使金黄色葡萄球菌(特别是MRSA)细胞壁破裂,达到... 详细信息

溶葡球菌酶(lysostaphin,Lys)是采用基因克隆技术使溶葡球菌酶基因实现外源表达所产生的蛋白质。它是Zn2+依赖的金属蛋白酶,具有肽链内切酶活性,能专一性地水解葡萄球菌细胞壁Gly五肽桥联,使金黄色葡萄球菌(特别是MRSA)细胞壁破裂,达到溶菌杀菌作用,而不产生耐药性。作为一种抗菌剂,在兽药与临床等领域具有巨大的应用潜力。综述对溶葡球菌酶的来源、作用机制、不同表达系统及前景与展望进行综述。

关键词：溶葡球菌酶金黄色葡萄球菌高效表达应用

溶葡球菌酶在乳酸克鲁维酵母中重组表达、诱变、优化及酶学研究

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中国生物工程杂志 2017年第12期37卷 49-58页

作者：王曦张光德陈熙明浦铜良兰州大学生命科学学院兰州730000 中国科学院西北生态环境资源研究院兰州730000

根据模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)的溶葡球菌酶基因序列以及乳酸克鲁维酵母密码子偏好性设计引物扩增溶葡球菌酶基因表达片段,构建溶葡球菌酶(lysostaphin,Lys)基因表达载体(p KLAC1-Lys),转化乳酸克鲁维酵母(*** GG799),实现... 详细信息

根据模仿葡萄球菌(Staphylococcus simulans)的溶葡球菌酶基因序列以及乳酸克鲁维酵母密码子偏好性设计引物扩增溶葡球菌酶基因表达片段,构建溶葡球菌酶(lysostaphin,Lys)基因表达载体(p KLAC1-Lys),转化乳酸克鲁维酵母(*** GG799),实现了Lys基因的分泌表达。对重组菌株(*** GG799/p KLAC1-Lys)进行NTG随机化学诱变,优化表达条件,筛选获得高表达菌株,并通过Ni-NTA亲和层析纯化蛋白并研究其酶学性质。结果表明:通过诱变重组溶葡球菌酶乳酸克鲁维菌株,Lys酶比活性提高了约5.2倍(约8 000U/L)。最适接种量为40g/L,诱导过程中每24h添加一次终浓度为20g/L的半乳糖和NH_4NO_3可提高酶比活性,最适表达p H为7.0~7.5,最适反应p H为7.0~8.0,最适反应温度为37℃。实验表明,低于40℃,p H 3~6之间时,重组溶葡球菌酶较稳定。Sr^(2+)对其酶活性有明显的促进作用,Ba^(2+)、Ca^(2+)、Zn^(2+)、Cu^(2+)、Mn^(2+)、Mg^(2+)对其有明显的抑制作用。

关键词：乳酸克鲁维酵母溶葡球菌酶重组表达诱变

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溶葡球菌酶的亲和层析分离

工业微生物 1992年第5期22卷 1-5页

作者：张培德马力

溶葡球菌酶基因在大肠杆菌与枯草杆菌的克隆与表达

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工业微生物 1989年第6期19卷 1-5页

作者：张培德杨军

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溶葡球菌酶的抗菌活性研究进展

中国新药杂志 2005年第9期14卷 1113-1117页

作者：杨信怡游雪甫蒋建东中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所北京100050

溶葡球菌酶是一种最初从模仿葡萄球菌培养物中分离出来的含Zn2+金属蛋白酶,具有良好的体内、外抗葡萄球菌活性,可能成为一种新型抗葡萄球菌感染药物。从药效学、药动学以及人体治疗等方面综述了溶葡球菌酶抗菌活性的研究进展,并展望其... 详细信息

溶葡球菌酶是一种最初从模仿葡萄球菌培养物中分离出来的含Zn2+金属蛋白酶,具有良好的体内、外抗葡萄球菌活性,可能成为一种新型抗葡萄球菌感染药物。从药效学、药动学以及人体治疗等方面综述了溶葡球菌酶抗菌活性的研究进展,并展望其临床应用前景。

关键词：溶葡球菌酶药效学药动学人体治疗

溶葡球菌酶前体及前体加工蛋白酶的生成控制和纯化

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生物化学杂志 1990年第3期6卷 243-248页

作者：周润琦 Recsei A.Paul 复旦大学纽约市公共卫生研究所

为深入探讨溶葡球菌酶前体加工转化为成熟的溶葡球菌酶的机制,本文通过条件控制分别从Staphylococcus simulans的培养液中获得了溶葡球菌酶前体和它的加工蛋白酶,并分别通过HPLC和Affi-Gel 501亲和层析对它们进行了纯化,根据聚丙烯酰胺... 详细信息

为深入探讨溶葡球菌酶前体加工转化为成熟的溶葡球菌酶的机制,本文通过条件控制分别从Staphylococcus simulans的培养液中获得了溶葡球菌酶前体和它的加工蛋白酶,并分别通过HPLC和Affi-Gel 501亲和层析对它们进行了纯化,根据聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶等电聚焦电泳,表明二者已基本上达到均一的程度。在此基础上,又进行了溶葡球菌酶前体的体外加工转化实验。

关键词：溶葡球菌酶前体加工蛋白酶纯化

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溶葡球菌酶5升罐发酵研究

工业微生物 1997年第1期27卷 13-16页

作者：张培德吴蓉陈石根复旦大学生物化学系上海200433

利用含溶葡球菌酶基因的枯草芽孢杆菌转化子,进行半合成培养基的5升自动发酵罐的中试发酵条件试验,在控制转速（450～500r/min）和通气量（1:0.5～0.8）二个条件下,采用分批培养和补料分批培养,获得了一组在半合成培养基上生产溶葡球菌... 详细信息

利用含溶葡球菌酶基因的枯草芽孢杆菌转化子,进行半合成培养基的5升自动发酵罐的中试发酵条件试验,在控制转速（450～500r/min）和通气量（1:0.5～0.8）二个条件下,采用分批培养和补料分批培养,获得了一组在半合成培养基上生产溶葡球菌酶的较优化条件,产酶高峰在8.5h～9h,酶产量达465mg/L。

关键词：溶葡球菌酶发酵半合成培养基生产

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溶葡球菌酶的比色测定及某些性质的研究

中国生物化学与分子生物学报 1989年第3期5卷 204-208页

作者：周润琦,陈石根,Recsci,A.Paul 复旦大学复旦大学纽约市公共卫生研究所纽约市公共卫生研究所上海上海美国美国

溶葡球菌酶是一种专一地溶解葡萄球菌的溶菌酶。和蛋清溶菌酶一样,通常采用比浊法进行测定,底物或为葡萄球菌、或为该菌的细胞壁、或为该菌细胞壁的肽聚糖。本文报道一种简便灵敏的溶葡球菌酶比色测定法,以偶联了KNR艳蓝染料的葡萄球菌(... 详细信息

溶葡球菌酶是一种专一地溶解葡萄球菌的溶菌酶。和蛋清溶菌酶一样,通常采用比浊法进行测定,底物或为葡萄球菌、或为该菌的细胞壁、或为该菌细胞壁的肽聚糖。本文报道一种简便灵敏的溶葡球菌酶比色测定法,以偶联了KNR艳蓝染料的葡萄球菌(死)细胞或偶联了KNR艳蓝染料的该菌细胞壁肽聚糖为色源底物,根据酶作用后释放出的可溶性KNR生成物计算酶活性。本文采用该比色测定法检定了溶葡球菌酶的某些动力学性质。

关键词：溶葡球菌酶色源底物 KNR-葡萄球菌 KNR-葡萄球菌细胞壁肽聚糖