检索结果-南通市图书馆

作者：吴丹南昌大学

学位级别：硕士

本实验采用RACE PCR技术和巢氏PCR方法从褶纹冠蚌中克隆到两种i型溶菌酶(CpLYZ1,CpLYZ2)基因的cDNA全长序列。 CpLYZl基因序列全长为763bp,其中5’UTR(非编码区)长度为21bp;3’UTR长度为259bp,包含一个AATAAA加尾信号,1个RNA不稳定模体A... 详细信息

本实验采用RACE PCR技术和巢氏PCR方法从褶纹冠蚌中克隆到两种i型溶菌酶(CpLYZ1,CpLYZ2)基因的cDNA全长序列。 CpLYZl基因序列全长为763bp,其中5’UTR(非编码区)长度为21bp;3’UTR长度为259bp,包含一个AATAAA加尾信号,1个RNA不稳定模体ATTTA (RNA instability motifs)和一个29bp的poly(A)尾;开放阅读框(Open Reading Frame, ORF)长度为483bp,预测编码160个氨基酸组成的蛋白质。经SignalP3.0软件分析,该蛋白N端存在1个长度为23个氨基酸的信号肽MEAVKMFFFLVGLLLTFNKCAES,成熟肽由137个氨基酸组成。该蛋白理论等电点为6.07,分子量为17.8kD,氨基酸序列中含有14个半胱氨酸残基。推导的Cp LYZ1氨基酸序列中包含2个高度保守的i型溶菌酶活性位点(Glu61和Ser72);一个i-型溶菌酶的特异性模体：C-L-[E/L/R/H]-C-[I/M]-C;以及一段i-型溶菌酶特有的氨基酸保守序列MDVGSLSCG(P/Y)(Y/F)QIK。 CpLYZ2基因的cDNA全长序列为913bp,其中5’UTR(非编码区)长度为38bp;3’UTR长度为389bp,包含一个AATAAA加尾信号,1个RNA不稳定模体ATTTA和一个29bp的poly(A)尾;开放阅读框长度为486bp,预测编码161个氨基酸组成的蛋白质。经SignalP3.0软件分析,该蛋白N端存在1个长度为23个氨基酸的信号肽MEAVKMFFFLVGVLLTFTKCTES,成熟肽由138个氨基酸组成。该蛋白理论等电点为6.56,分子量为18.2kD,氨基酸序列中含有12个半胱氨酸残基。推导的Cp LYZ2氨基酸序列中仅含有1个高度保守的i-型溶菌酶活性位点(Glu61)。存在i-型溶菌酶的特异性模体：C-L-[E/L/R/H]-C-[I/M]-C。在Cp LYZ2中只存在i-型溶菌酶特有的氨基酸保守序列的一部分：GSLSCG(P/Y)(Y/F)。利用荧光定量PCR检测褶纹冠蚌不同组织中CpLYZ1和Cp LYZ2的mRNA表达情况。结果表明：CpLYZ1和Cp LYZ2的mRNA表达均存在组织差异性。CpLYZ1在肝胰腺中表达量最高,是血细胞的5.23倍,其次是鳃,为血细胞的1.67倍;在肌肉和外套膜中最低,分别为血细胞的0.18倍和0.32倍。CpLYZ2在鳃组织中表达量最高,是血细胞表达量的3.85倍,肝胰腺、外套膜和肌肉中的表达量比血细胞中的表达量差不多。嗜水气单胞菌的刺激后,CpLYZl和CpLYZ2在血细胞、肝胰腺和鳃中的表达量都明显上升。血细胞中,CpLYZ1和CpLYZ2均在48h的表达量最高,分别是空白对照的7.16和4.12倍。肝胰腺中,二者在24h的表达量最高,分别为空白对照的34.46和8.64倍。鳃组织中,CpLYZ1在48h的表达量最高,是空白对照的2.73倍;CpLYZ2在12h的表达量最高,是空白对照的18.44倍。在PBS刺激下,CpLYZ1和CpLYZ2在血细胞、肝胰腺和鳃中的表达量也有一些变化。血细胞中,CpLYZ1在6、12、24h表达量要低于空白对照,而在48h为空白对照的7.16倍;CpLYZ2的表达量先升高后降低再升高,在48h表达量最高,为空白对照的2.35倍。肝胰腺中,CpLYZ1的表达量是先降低后升高,48h的表达量最高,为空白对照的6.16倍;CpLYZ2在48h的表达量最高,为空白对照的1.68倍。鳃组织中,CpLYZ1的表达量不断的下降,在48h的表达量为空白对照的0.27倍。CpLYZ2的表达量略微升高,在48h的表达量最高为空白对照的2.48倍。为了进一步探讨CpLYZ1和CpLYZ2的功能,通过双酶切连接,构建了pET30-LYZ1和pET30-LYZ2原核表达质粒,将原核表达质粒转化大肠杆菌DE3,经IPTG诱导后成功表达了两种重组蛋白。两种重组蛋白都是以包涵体形式存在的不可溶性蛋白。通过变性剂溶解包涵体,用Ni2+螯和层析法获得了纯化的蛋白,然后用梯度稀释法对重组蛋白进行了复性。通过对两组重组CpLYZ的相对酶活力的测定发现,以包涵体形式存在的重组CpLYZ不具有生物活性,但是经变性和复性后的重组CpLYZ有明显的溶菌酶活性。在以溶壁微球菌为底物,重组CpLYZ1和CpLYZ2的最适pH为5.5,最适温度为50℃。两种重组CpLYZ对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、链球菌和表皮葡萄球菌都有一定的溶菌活力,两者都对枯草芽孢杆菌的溶菌活力最强,对两种革兰氏阴性菌也都有溶菌活性。CpLYZ1对六种菌的溶菌活力高于CpLYZ2。经100

关键词：褶纹冠蚌溶菌酶基因克隆荧光定量溶菌活力 western-blotting

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九孔鲍接种灭活病毒的免疫效果分析

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集美大学学报（自然科学版） 2008年第4期13卷 315-320页

作者：纪荣兴邹文政鄢庆枇陈政强何腾飞集美大学水产学院福建厦门361021 福建省高校水产科学技术与食品安全重点实验室福建厦门361021

通过注射灭活病毒,研究接种免疫对九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)非特异性免疫机能和免疫保护效果的影响.试验结果表明:九孔鲍接种灭活病毒7 d后,体液抗菌活力、溶菌活力和酚氧化酶活性都有显著提高(P0.05),溶菌活力则仍然... 详细信息

通过注射灭活病毒,研究接种免疫对九孔鲍(Haliotis diversicolor supertexta)非特异性免疫机能和免疫保护效果的影响.试验结果表明:九孔鲍接种灭活病毒7 d后,体液抗菌活力、溶菌活力和酚氧化酶活性都有显著提高(P菌活力和酚氧化酶活性回落至本底水平,与对照组差异不明显(P>0.05),溶菌活力则仍然高于对照组水平(P<0.01).注射灭活病毒A的免疫效果好于灭活病毒B,九孔鲍接受灭活病毒后引起的免疫应答强度、产生的非特异性抗感染免疫能力和特异性抗感染免疫保护效果都是前者高于后者,且免疫35 d后九孔鲍获得的抗特异性病毒感染免疫保护率,灭活病毒A为30%、灭活病毒B为20%.

关键词：九孔鲍灭活病毒抗菌活力溶菌活力酚氧化酶活力免疫保护率

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赤芝多糖对日本沼虾免疫功能的影响

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中国兽药杂志 2006年第8期40卷 16-18页

作者：李红权刘燕王安利河北大学生命科学学院河北保定071002 中国兽医药品监察所北京100081 华南师范大学生命科学学院广东广州510631

本研究在日本沼虾的饲料中添加不同剂量的赤芝多糖,通过测定血清抗菌活力、溶菌活力、超氧化物歧化酶、酚氧化酶以及存活率等指标,研究其对日本沼虾免疫功能的影响。结果表明,饵料中添加1%、1.5%和2%的赤芝多糖对沼虾都有显著的增强免... 详细信息

本研究在日本沼虾的饲料中添加不同剂量的赤芝多糖,通过测定血清抗菌活力、溶菌活力、超氧化物歧化酶、酚氧化酶以及存活率等指标,研究其对日本沼虾免疫功能的影响。结果表明,饵料中添加1%、1.5%和2%的赤芝多糖对沼虾都有显著的增强免疫功能的作用,其中1.5%的赤芝多糖的效果要优于其他两组。

关键词：赤芝多糖日本沼虾免疫功能饲料溶菌活力

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猪呼吸道疾病的综合预防

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吉林畜牧兽医 1985年第1期 36-37页

作者：郑星道许传波

我们在具有完整生产周期的大型养猪场,和专门收集可能发生呼吸道疾病的仔猪进行培育和育肥的专门农场试用了综合预防措施。试验第一组是用195头15～30日龄(17窝)的仔猪。这些仔猪同种母猪一起应用碘化铝气溶胶,剂量为0.2克/立方米房舍,... 详细信息

我们在具有完整生产周期的大型养猪场,和专门收集可能发生呼吸道疾病的仔猪进行培育和育肥的专门农场试用了综合预防措施。试验第一组是用195头15～30日龄(17窝)的仔猪。这些仔猪同种母猪一起应用碘化铝气溶胶,剂量为0.2克/立方米房舍,每日一次,7天为一疗程。对70日龄的猪进行同样的处理(在移到培育组后立即进行)。除了上述处理外,第一小组的50头仔猪在20天的过程中,(在移

关键词：仔猪小组配合应用肺脏刺五加祛风湿药抗病力气溶胶大气微粒分散体系病理变化溶菌活力碘化铝呼吸道疾病

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褶纹冠蚌2种i-型溶菌酶及蛋白活性分析

褶纹冠蚌2种i-型溶菌酶及蛋白活性分析

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中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会

作者：吴丹文春根胡宝庆谢彦海南昌大学生物科学系

本实验采用RACE PCR技术从褶纹冠蚌中克隆到两种i型溶菌酶(CpLYZ1,CpLYZ2)基因的cDNA全长序列。CpLYZ1基因序列全长为763bp,开放阅读框长度为483bp,预测编码160个氨基酸组成的蛋白质。Cp LYZ1氨基酸序列包含2个高度保守的i型溶菌酶活性... 详细信息

本实验采用RACE PCR技术从褶纹冠蚌中克隆到两种i型溶菌酶(CpLYZ1,CpLYZ2)基因的cDNA全长序列。CpLYZ1基因序列全长为763bp,开放阅读框长度为483bp,预测编码160个氨基酸组成的蛋白质。Cp LYZ1氨基酸序列包含2个高度保守的i型溶菌酶活性位点(Glu61和Ser72);一个i-型溶菌酶的特异性模体:C-L-[E/L/R/H]-C-[I/M]-C;以及一段i-型溶菌酶特有的氨基酸保守序列MDVGSLSCG(P/Y)(Y/F)QIK。CpLYZ2基因的cDNA全长序列为913bp,开放阅读框长度为486bp,预测编码161个氨基酸组成的蛋白质。Cp LYZ2氨基酸序列中仅含有1个高度保守的i-型溶菌酶活性位点(Glu61)。存在i-型溶菌酶的特异性模体:C-L-[E/L/R/H]-C-[I/M]-C。在Cp LYZ2中只存在i-型溶菌酶特有的氨基酸保守序列的一部分:GSLSCG(P/Y)(Y/F)。利用荧光定量PCR检测褶纹冠蚌不同组织中CpLYZ1和Cp LYZ2的表达。结果表明CpLYZ1在肝胰腺中表达量最高,其次是鳃,在肌肉和外套膜中最低。CpLYZ2在鳃组织中表达量最高,肝胰腺、外套膜和肌肉中的表达量比血细胞中的表达量近似。嗜水气单胞菌的刺激后,CpLYZ1和CpLYZ2在血细胞、肝胰腺和鳃中的表达量都明显上升。血细胞中,CpLYZ1和CpLYZ2均在48h的表达量最高。肝胰腺中,二者均在24h的表达量最高。鳃组织中,CpLYZ1在48h的表达量最高;CpLYZ2在12h的表达量最高。在PBS刺激下,血细胞中,CpLYZ1在6、12、24h表达量要低于空白对照;CpLYZ2的表达量先升高后降低再升高,在48h表达量最高。肝胰腺中,CpLYZ1的表达量是先降低后升高,48h的表达量最高;CpLYZ2在48h的表达量最高。鳃组织中,CpLYZ1的表达量下降。CpLYZ2的表达量略微升高。通过对两组重组CpLYZ的相对酶活力的测定,发现以包涵体形式存在的重组CpLYZ不具有生物活性,但是经变性和复性后的重组CpLYZ有明显的溶菌酶活性。在以溶壁微球菌为底物,重组CpLYZ1和CpLYZ2的最适pH为5.5,最适温度为50℃。两种重组CpLYZ对大肠杆菌、嗜水气单胞菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、链球菌和表皮葡萄球菌都有一定的溶菌活力,两者都对枯草芽孢杆菌的溶菌活力最强。

关键词：褶纹冠蚌溶菌酶基因荧光定量溶菌活力

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维生素C对中华鳖非特异性免疫功能的影响

维生素C对中华鳖非特异性免疫功能的影响

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作者：周显青牛翠娟孙儒泳李庆芬首都医科大学动物部

本研究旨在探讨维生素C对中华鳖非特异性免疫功能的影响。实验设6组,6组饵料中维生素C的添加量依次为0、250、500、2500、5000和10000mg/kg,喂食中华鳖4周。结果表明,维生素C添加量在0～500mg/kg时,对中华鳖的血细胞吞噬率、血清溶菌活... 详细信息

本研究旨在探讨维生素C对中华鳖非特异性免疫功能的影响。实验设6组,6组饵料中维生素C的添加量依次为0、250、500、2500、5000和10000mg/kg,喂食中华鳖4周。结果表明,维生素C添加量在0～500mg/kg时,对中华鳖的血细胞吞噬率、血清溶菌活力和杀菌活力没有影响。维生素C添加量为2500mg/kg组,其血细胞吞噬率、血清溶菌活力和杀菌活力明显高于维生素C添加量为0和250mg/kg的两组。维生素C添加量为5000mg∥kg组,只有血清杀菌活力明显高于对照组。维生素C添加量为10000mg/kg组,血细胞吞噬率、血清溶菌活力和杀菌活力都没有明显变化。这说明,维生素C只有在一定剂量范围内,才能促进中华鳖的非特异性免疫功能,在本实验范围内,促进中华鳖非特异性免疫功能的最佳剂量是2500mg/kg。

关键词：中华鳖维生素C 吞噬作用溶菌活力杀菌活力

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