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粪便样本溶组织内阿米巴、蓝氏贾第鞭毛虫双重TaqMan实时荧光聚合酶链反应检测方法的建立

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中国热带医学 2023年第6期23卷 596-601,611页

作者：敖科萍孟妍明袁余张春莹马莹四川大学华西医院实验医学科四川成都610000

目的探讨同时检测溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫的双重TaqMan实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescent polymerase chain reaction,RT-PCR)方法。方法设计针对溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫的引物对和探针,建立双重TaqMan RT-PC... 详细信息

目的探讨同时检测溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫的双重TaqMan实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescent polymerase chain reaction,RT-PCR)方法。方法设计针对溶组织内阿米巴和蓝氏贾第鞭毛虫的引物对和探针,建立双重TaqMan RT-PCR的扩增体系,将PCR扩增产物序列导入pUC57质粒,测定方法的最低检测限,并通过临床粪便样本对该方法进行初步评价。结果本研究建立的双重TaqMan RT-PCR法对溶组织内阿米巴最低检测限为31.6 copies/μL,蓝氏贾第鞭毛虫最低检测限为32.0 copies/μL。总共纳入212例临床粪便样本,3例溶组织内阿米巴镜检阳性患者样本PCR扩增结果均为阳性,209例溶组织内阿米巴镜检阴性的患者样本1例PCR扩增结果阳性,其余为阴性。8例蓝氏贾第鞭毛虫涂片镜检阳性样本PCR扩增结果均阳性,204例蓝氏贾第鞭毛虫镜检阴性患者样本中1例PCR扩增结果为阳性,其余为阴性。通过扩增产物测序和Blast分析确定了镜检阴性PCR阳性患者样本中扩增序列属于目标病原体,且临床症状以及实验室检查结果也支持该诊断。其他致腹泻病原体PCR扩增结果阴性,不存在交叉反应。结论建立的双重TaqMan RT-PCR方法不仅可以检测出溶组织内阿米巴及蓝氏贾第鞭毛虫镜检阳性样本,还能检出两者镜检漏检的样本,敏感度高于镜检法。并且与其他腹泻病原体包括布氏嗜碘阿米巴、人芽囊原虫、邻单胞菌、气单胞菌、沙门氏菌、痢疾志贺菌菌株、球虫以及哈门氏内阿米巴不存在交叉反应,具有较好的特异性。

关键词：溶组织内阿米巴蓝氏贾第鞭毛虫 TaqMan实时荧光聚合酶链反应

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溶组织内阿米巴致病因子的研究进展

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2006年第6期24卷 457-460页

作者：陈奕程训佳复旦大学上海医学院病原生物系上海200032

溶组织内阿米巴滋养体入侵宿主,聚集在结肠,可以穿过覆盖在结肠上皮的黏液层,引起阿米巴性结肠炎;或者随血液循环进入其他组织,引起肠外脓肿。本文就溶组织内阿米巴滋养体致病因子及其作用作一综述。

关键词：溶组织内阿米巴致病因子凝集素阿米巴穿孔素半胱氨酸蛋白酶

PCR法检测粪便样本溶组织内阿米巴的初步研究

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四川大学学报（医学版） 2019年第3期50卷 379-384页

作者：庞华胜匡紫微杨练孟妍明张春莹马莹四川大学华西医院实验医学科成都610041 成都市妇女儿童中心医院检验科成都610073

目的建立直接检测粪便样本中溶组织内阿米巴的PCR方法。方法根据溶组织内阿米巴标准株基因组中小亚基核糖体RNA (small subunit ribosome RNA, SSU rRNA)序列合成4对特异性引物(2对自主设计引物和2对参考引物),建立PCR检测方法,用该方法... 详细信息

目的建立直接检测粪便样本中溶组织内阿米巴的PCR方法。方法根据溶组织内阿米巴标准株基因组中小亚基核糖体RNA (small subunit ribosome RNA, SSU rRNA)序列合成4对特异性引物(2对自主设计引物和2对参考引物),建立PCR检测方法,用该方法对221例临床腹泻患者粪便标本进行检测,同时采用病原学碘染涂片镜检法和酶联免疫吸附实验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测抗原,对3种方法的阳性率进行比较,并采用Kappa检验进行一致性分析,分析3种检测方法结果的准确性。结果 4对引物均扩增出溶组织内阿米巴特异的目的片段,建立了粪便样本溶组织内阿米巴检测的PCR法。选择其中2对引物(1对自主设计引物和1对参考引物)对221例粪便样本进行PCR扩增,同时用碘染涂片镜检法查病原体,用ELISA法进行抗原检测,3种方法溶组织内阿米巴阳性检出率分别为2.26%、0.90%和9.50%,差异有统计学意义(χ~2=23.34,P溶组织内阿米巴PCR检测法在准确性上优于镜检法和ELISA抗原检测法,为该方法用于临床诊断提供了实验基础。

关键词：溶组织内阿米巴 PCR ELISA SSU rRNA 镜检法

云南省腾冲市住院病人溶组织内阿米巴感染情况及影响因素分析

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中国血吸虫病防治杂志 2019年第2期31卷 139-142,147页

作者：王琦杨改革杨春利詹秀霞俞英昉张顺先田利光海南省妇幼保健院海口57020 广东省广州市妇女儿童医疗中心上海市皮肤病医院中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、WHO热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室

目的了解云南省腾冲市住院病人溶组织内阿米巴感染情况及其影响因素。方法2016-07-01-2017-03-31,采用横断面调查方法对云南省腾冲市人民医院住院病例进行问卷调查。无菌采集其粪便样本,通过巢氏PCR检测溶组织内阿米巴感染情况。采用χ^... 详细信息

目的了解云南省腾冲市住院病人溶组织内阿米巴感染情况及其影响因素。方法2016-07-01-2017-03-31,采用横断面调查方法对云南省腾冲市人民医院住院病例进行问卷调查。无菌采集其粪便样本,通过巢氏PCR检测溶组织内阿米巴感染情况。采用χ^2检验和多因素logistic回归模型分析溶组织内阿米巴感染的影响因素。结果共调查507名住院患者,其中10名患者感染溶组织内阿米巴,感染率为1.97%(95%CI:1.07%~3.59%)。溶组织内阿米巴感染者和非感染者身高(Z=-0.40,P=0.69)、体重(Z=-0.34,P=0.73)、体重指数(Z=-0.40,P=0.69)和年龄(Z=-1.48,P=0.14)差异无统计学意义。慢性腹泻(OR=21.43,95%CI:5.04~91.23)和日常饮用水(OR=11.28,95%CI:2.79~45.56)是人感染溶组织内阿米巴的影响因素。溶组织内阿米巴感染和腹胀(OR=0.70,95%CI:0.09~5.56)、食欲不振(OR=0.50,95%CI:0.06~4.02)、皮肤瘙痒(OR=0.79,95%CI:0.10~6.38)、肛周瘙痒(OR=1.74,95%CI:0.21~14.07)及便秘(OR=0.91,95%CI:0.13~7.33)无统计学关联。结论云南省腾冲市住院病人溶组织内阿米巴感染率较高,慢性腹泻和饮用未煮沸的水与溶组织内阿米巴感染呈高度相关。

关键词：溶组织内阿米巴危险因素住院病人腾冲市

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溶组织内阿米巴14-3-3蛋白功能初探

溶组织内阿米巴14-3-3蛋白功能初探

作者：林育涛复旦大学

学位级别：硕士

目的:预测溶组织内阿米巴14-3-3(Eh14-3-3)蛋白的结构与功能,克隆与鉴定溶组织内阿米巴14-3-3基因,并纯化重组Eh14-3-3蛋白,分析纯化产物的免疫学特性,制备抗重组Eh14-3-3蛋白血清,比较不同内阿米巴属虫株14-3-3蛋白序列,探讨14-3-3蛋... 详细信息

目的:预测溶组织内阿米巴14-3-3(Eh14-3-3)蛋白的结构与功能,克隆与鉴定溶组织内阿米巴14-3-3基因,并纯化重组Eh14-3-3蛋白,分析纯化产物的免疫学特性,制备抗重组Eh14-3-3蛋白血清,比较不同内阿米巴属虫株14-3-3蛋白序列,探讨14-3-3蛋白作为研究遗传进化标记分子的可能性。方法:利用生物信息学网站的各种在线工具和Vector NTI Suite软件包对溶组织内阿米巴14-3-3(Eh14-3-3)基因进行分析和功能预测,分别以溶组织内阿米巴HM1∶IMSS株滋养体总RNA逆转录合成的cDNA链和基因组DNA为模板,设计合成引物,PCR扩增Eh14-3-3蛋白编码基因序列,克隆入pET19b载体,并用双酶切法和DNA测序进行鉴定。在大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达,用树脂层析纯化目的蛋白。SDS-PAGE鉴定,并用ELISA鉴定纯化产物的免疫学特性,检测病人和正常人血清对其的反应性,继而以之免疫小鼠制备抗血清。随后分别扩增各不同内阿米巴虫株滋养体的14-3-3蛋白编码基因序列,并对它们进行了比较分析。结果:溶组织内阿米巴具有三种Eh14-3-3蛋白编码基因的异构体,与GenBank收录(编号分别为EHU13418,EHU13419,EHU13420)的Eh14-3-3蛋白编码基因一致。重组Eh14-3-3蛋白,通过纯化层析,30kD附近得到单一蛋白条带。ELISA等实验证实纯化得到的Eh14-3-3蛋白与慢性反复发作者血清和阿米巴结肠炎病人血清有反应,与包囊携带者血清、急性阿米巴肝脓疡患者血清和正常人血清无明显反应。抗重组Eh14-3-3蛋白血清的与溶组织内阿米巴粗抗原ELISA反应的效价为1∶200,但随后的细胞定位实验为阴性。不同内阿米巴属虫株的14-3-3蛋白序列比较结果提示内阿米巴属14-3-3基因高度保守,生物信息学分析还提示该蛋白是研究物种进化的理想分子。结论:溶组织内阿米巴含有三个14-3-3蛋白的异构体,它们可能在溶组织内阿米巴的成囊过程中发挥重要作用。14-3-3蛋白是研究物种进化有用的靶分子。

关键词：溶组织内阿米巴 14-3-3蛋白原核表达系统蛋白质纯化生物信息学

溶组织内阿米巴肝脓肿小鼠巨噬细胞和淋巴细胞内环核苷酸的研究

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免疫学杂志 1989年第4期 274-275页

作者：李天宪邵静芳同济医科大学实验医学研究中心免疫室同济医科大学实验医学研究中心免疫室武汉武汉

本文采用一株E-h探讨了E-h肝脓肿小鼠在不同病期腹腔巨噬细胞和外周血淋巴细胞内cAMP、cGMP含量的变化。材料与方法虫株与实验动物E-h虫株HH_l由北京医科大学原虫研究室提供。E-h悬液:将在洛克氏液—鸡蛋—血清培养基中生长48h的... 详细信息

本文采用一株E-h探讨了E-h肝脓肿小鼠在不同病期腹腔巨噬细胞和外周血淋巴细胞内cAMP、cGMP含量的变化。材料与方法虫株与实验动物E-h虫株HH_l由北京医科大学原虫研究室提供。E-h悬液:将在洛克氏液—鸡蛋—血清培养基中生长48h的E-h离心洗涤三次,每次洗涤加青霉素40和庆大霉素各40万U。调整E-h浓度为10~7/ml,涂片显微镜观察见活的E-h滋养体。伴随上清液:取上述第三次离心后上清液,涂片显微镜观察无E-h滋养体。0.85％生理盐水为对照组。实验动物:健康NIH小鼠,雄性,体重20g。给40只小鼠肝脏接种0.lml滋养体,分为E-h肝脓肿1周组和3周组各20只,伴随上清液组、生理盐水组和正常对照组各

关键词：小鼠巨噬细胞环核苷酸肝脓肿溶组织内阿米巴滋养体外周血淋巴细胞实验动物有显著性差异北京医科大学克氏

溶组织内阿米巴体外吞噬杀灭肿瘤细胞的显微动态特征

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肿瘤防治研究 2010年第10期37卷 1213-1214页

作者：周振宇戴支凯梁荣感徐庆罗伟生桂林医学院药理学教研室广西桂林541004

溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)可寄生人类大肠,属无性生殖.其滋养体侵犯宿主肠黏膜可以引起阿米巴病(amoebiasis),包括阿米巴性结肠炎和肠外脓肿.溶组织内阿米巴滋养体可以吸附,凝集,吞噬及溶解正常组织细胞,而棘阿米巴滋养体... 详细信息

溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)可寄生人类大肠,属无性生殖.其滋养体侵犯宿主肠黏膜可以引起阿米巴病(amoebiasis),包括阿米巴性结肠炎和肠外脓肿.溶组织内阿米巴滋养体可以吸附,凝集,吞噬及溶解正常组织细胞,而棘阿米巴滋养体对HeLa细胞与黑色素瘤细胞有细胞毒及损伤作用[1-2],但是溶组织内阿米巴是否对肿瘤细胞有吸附,凝集,吞噬及溶解作用的研究较少.我们以KB细胞为靶细胞,采取混合培养方法,在显微镜下动态观察了不同时间段溶组织内阿米巴对KB细胞的吞噬杀灭过程,现将结果报道如下

关键词：溶组织内阿米巴吞噬肿瘤细胞