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作者：解娟成都中医药大学

学位级别：硕士

目的：在临床应用清湿化瘀法治疗AM取得明显临床疗效和前期实验研究的基础上,运用同种异体垂体移植方法建立AM动物模型,采用免疫组化的技术检测17β-HSDⅠ、17β-HSDⅡ变化。通过观察上述雌激素代谢相关酶在AM治疗前后随动情周期变化的... 详细信息

目的：在临床应用清湿化瘀法治疗AM取得明显临床疗效和前期实验研究的基础上,运用同种异体垂体移植方法建立AM动物模型,采用免疫组化的技术检测17β-HSDⅠ、17β-HSDⅡ变化。通过观察上述雌激素代谢相关酶在AM治疗前后随动情周期变化的表达差异及其在各组在位及异位内膜上的表达差异,研究清湿化瘀法治疗AM的作用靶点,以期探索清湿化瘀法治疗AM的作用机制。方法：选取8周龄ICR小鼠,采用异体垂体移植的手术方法造模,分成7组,分别为3月模型组、6月模型组、内异康复片高剂量组、中剂量组、低剂量组、中药对照组(丹莪妇康煎膏)、西药对照组(孕三烯酮)。另各选12只小鼠设为假手术组和空白组。常规饲养3个月,将空白组、假手术组、3月模型组小鼠分别在动情期与间情期处死。其它各组分别灌胃给予相应浓度的药物或蒸馏水(6月模型组)饲养3月后分别在动情期与间情期处死。病理切片、HE染色分组分析内膜腺体及间质侵润肌层的程度。观察各组造模前后及治疗前后子宫腺肌病的病理改变,并对AM严重程度进行分级评分。同时采用免疫组化方法,观察空白组和假手术组动情期与间情期雌激素代谢相关酶(17β-HSDⅠ、17β-HSDⅡ)的表达,以及其它各组治疗前后动情期和间情期在位及异位内膜上指标的表达,寻找清湿化瘀法治疗AM的可能靶点。结果：1.形态学上观察到异位组织肌层侵润并作子宫腺肌病严重程度分级评分,正常组和假手术组为0分,3月模型组动情期2.67分,间情期2.17分,6月模型组动情期3.50分,间情期2.83分,分级指标提示3月模型组子宫内膜间质细胞与腺体侵润肌肉内层,6月模型组子宫内膜间质细胞和腺体侵润内外肌层交界处,表明两组均造模成功,且疾病严重程度随病程而增加,手术过程对造模无影响。2.17β-HSDⅠ、17β-HSDⅡ的表达在形成AM模型后随病程进展逐渐升高,6月模型组高于3月模型组(P0.05)。两个指标在不同治疗方法治疗后均下降,内异康复片高剂量组、丹莪妇康煎膏组、孕三烯酮组与6月模型组比较有统计学意义(P0.05)。结论：1.从组织形态学上观察,疾病严重程度评分(侵润程度)随病程而升高,手术过程对造模无影响。雄鼠垂体雌鼠宫腔移植法模6月成功率达到100%(12/12),是一个值得推广的AM造模方法。2.从实验结果看,清湿化瘀类中药能够通过下调在位及异位内膜雌激素代谢相关酶17β-HSDⅠ、17β-HSDⅡ表达,抑制局部雌激素的活性,从而治疗AM。根据实验结果,我们可以认为雌激素代谢相关酶17β-HSDⅠ、17β-HSDⅡ可能为清湿化瘀法的治疗靶点。3.高剂量内异康复片对在位及异位内膜雌激素代谢相关酶17β-HSDⅠ、17β-HSDⅡ的影响与丹莪妇康煎膏及孕三烯酮一致。4.雌激素代谢相关酶17β-HSDⅠ在AM小鼠的在位内膜及异位内膜的表达具有差异。清湿化瘀类中药可能通过分别调控AM小鼠在位及异位内膜上雌激素代谢相关酶的表达而发挥作用,但调控的机制需要进一步实验证实。

关键词：子宫腺肌病清湿化瘀法 17β-羟类固醇脱氢酶1 17β-羟类固醇脱氢酶2

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作者：曾美玲成都中医药大学

学位级别：硕士

目的观察具有清湿化瘀功效的协定方剂(内异康复片)对子宫腺肌病模型小鼠雌激素效应相关因子GPR30、Akt、p-Akt表达的影响,采用免疫组化技术检测子宫局部上述因子在用药前后及疾病发展的不同时期随动情周期变化的表达差异,以及在位和异... 详细信息

目的观察具有清湿化瘀功效的协定方剂(内异康复片)对子宫腺肌病模型小鼠雌激素效应相关因子GPR30、Akt、p-Akt表达的影响,采用免疫组化技术检测子宫局部上述因子在用药前后及疾病发展的不同时期随动情周期变化的表达差异,以及在位和异位内膜上的表达差异,以期探索清湿化瘀法治疗子宫腺肌病的作用机制。方法选取8周龄ICR小鼠,采用同种异体垂体移植方法造模。随后将造模小鼠随机分为3月模型组、6月模型组、内异康复片(NYKFP)高剂量组、中剂量组、低剂量组、孕三烯酮组(GES,西药对照组)、丹莪妇康煎膏组(DEFKJG,中药对照组),另设假手术组及空白对照组。每组均为24只小鼠。常规饲养3月后,将空白组、假手术组、3月模型组小鼠分别在动情期与间情期处死。其它组灌胃给予相应浓度和成分的药物(用药组)或继续常规饲养(6月模型组)3月后分别在动情期与间情期处死。通过病理切片、HE染色下观察各组造模前后及用药前后子宫腺肌病的病理改变,并对AM严重程度进行分级评分,同时采用免疫组化技术检测小鼠子宫GPR30、Akt、p-Akt随时空变化的表达情况。结果1.从形态学上观察到异位内膜组织侵润肌层同时作子宫腺肌病严重程度分级评分并统计分析,与正常组相比,假手术组差异无统计学意义(P>0.05),而3月模型组和6月模型组评分显著高于正常组(P0.05)。***30、Akt、p-Akt的表达在正常组与假手术组中无统计学差异(P>0.05),AM模型形成后三者的表达随病程进展逐渐升高,6月模型组高于3月模型组(P法建立AM小鼠模型3月和6个月后成功率都达到100%,该造模方法值得推广和应用。2、AM的发生与子宫局部雌激素效应相关因子GPR30及其介导的PI3K/Akt信号通路中的关键因子Akt、p-Akt的异常表达有关,本研究提示GPR30与Akt、p-Akt表达同步上调可能导致AM的发生。3、清湿化瘀类中药可通过降低在位及异位内膜雌激素效应相关因子GPR30及其介导的PI3K/Akt信号通路中的关键因子Akt、p-Akt的表达而发挥治疗AM的作用,但其调控的GPR30/PI3K/Akt通路的机制尚需进一步实验研究证实。4、高中剂量内异康复片和丹莪妇康煎膏和孕三烯酮均能下调AM在位及异位内膜雌激素效应相关因子GPR30、Akt、p-Akt的表达,高剂量内异康复片的调控力度优于以上两种对照药物,而内异康复片对三者的调控程度与剂量相关,高剂量组>中剂量组>低剂量组。故运用具有清湿化瘀功效方药为中药治疗AM提供了一种新的思路方法,值得深入研究与推广。5、本实验中GPR30、Akt、p-Akt的表达受激素的调节而发生周期性的变化,在动情期明显高于间情期,因此,这将为临床上治疗AM选择最佳用药时间提供依据,而清湿化瘀法对这种周期性变化无明显的干预作用。

关键词：子宫腺肌病清湿化瘀法 GPR30 Akt p-Akt

清湿化瘀法对AM小鼠雌激素效应相关因子PTEN、P-P65时空变化的影响

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作者：屈丽媛成都中医药大学

学位级别：硕士

目的在前期研究的基础上,观察清湿化瘀代表方内异康复片对子宫腺肌病(AM)模型小鼠子宫内膜PTEN、p-p65的表达水平的影响,探究清湿化瘀法对AM雌激素效应相关因子的作用机制。方法运用同种异体垂体移植子宫腔的造模方法,选取8周龄的ICR小... 详细信息

目的在前期研究的基础上,观察清湿化瘀代表方内异康复片对子宫腺肌病(AM)模型小鼠子宫内膜PTEN、p-p65的表达水平的影响,探究清湿化瘀法对AM雌激素效应相关因子的作用机制。方法运用同种异体垂体移植子宫腔的造模方法,选取8周龄的ICR小处鼠制作子宫腺肌病模型。将已手术造模的小鼠随机分为内异康复片(NYKFP)高、中、低剂量组,丹莪妇康煎膏组(DEFKJG,中药对照药物),孕三烯酮组(GES,西药对照药物),3月模型组,6月模型组,另设置假手术组、正常组饲养3个月后,将3月模型组、正常组、假手术组鼠分别平均在间情期与动情期处死并采取标本。6月模型组继续常规饲养,余小鼠在常规饲养的基础上给予灌胃相应药物,3个月后分别平均在动情期和间情期处死并采取标本。运用免疫组化技术检测各组小鼠PTEN、p-p65表达水平,通过HE染色、病理切片观察造模前后及各组用药前后子宫腺肌病的病理改变,并对AM严重程度进行分级评分。结果1.从病理切片判断内膜组织侵润到肌层情况,同时根据AM发展水平分级评分,并统计分析。假手术组与正常组比较差别无统计学意义(P>0.05),而3月模型组和6月模型组的评分均明显高于正常组,有统计学意义(P0.05)。2.雌激素效应因子PTEN、p-p65在正常组及假手术组中的表达差别无统计学差异(P>0.05),模型组小鼠p-p65的表达随病程进展逐渐升高,6月模型组和3月模型组明显高于假手术组及正常组(P法建立子宫腺肌病模型,3月、6月模型组造模成功率均达百分百,此种造模法值得推广和应用。2、子宫腺肌病的发生、进展与子宫内膜局部雌激素效应因子PTEN、p-p65的病理表达有关,本研究提示p-p65表达水平升高,PTEN表达水平下降可能成为促使AM发病的原因之一。3、清湿化瘀类方药可通过降低内膜p-p65的表达程度,提高PTEN的表达程度而达到缓解症状,治疗疾病的作用。但调控PTEN、p-p65的作用机制尚需进一步探究。4、高、中剂量NYKFP,DEFKJG及GES均能降低AM内膜组织上p-p65的表达程度,提高PTEN的表达程度,高剂量内异康复片的作用疗效优于DEFKJG、GES,内异康复片对p-p65、PTEN表达调节能力随灌胃药量的减少而降低。该课题实验结果提示在临床上应用清湿化瘀法治疗子宫腺肌病值得进一步推广和研究。5、本实验中PTEN、p-p65的表达受激素的调节而发生周期性的变化,p-p65在动情期明显高于间情期,PTEN在动情期明显低于间情期。因此,这将为临床上治疗AM选择最佳用药时间提供依据,而清湿化瘀法对这种周期性变化无明显的干预作用。

关键词：子宫腺肌病清湿化瘀法 PTEN p-p65

清湿化瘀法对子宫腺肌病小鼠雌激素效应相关因子P450arom、COX2、...

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作者：冯婷婷成都中医药大学

学位级别：硕士

目的：在临床应用清湿化瘀法治疗AM取得明显临床疗效和前期实验研究的基础上,运用同种异体垂体移植方法建立AM动物模型,采用免疫组化的技术检测P450arom、COX-2、 PGE2变化。通过观察上述雌激素效应相关因子在AM治疗前后随动情周期变化... 详细信息

目的：在临床应用清湿化瘀法治疗AM取得明显临床疗效和前期实验研究的基础上,运用同种异体垂体移植方法建立AM动物模型,采用免疫组化的技术检测P450arom、COX-2、 PGE2变化。通过观察上述雌激素效应相关因子在AM治疗前后随动情周期变化的表达差异,及其各组在位及异位内膜上的表达差异,研究清湿化瘀法治疗AM的作用靶点,以期探索清湿化瘀法治疗AM的作用机制。方法：选取8周龄ICR小鼠86只,采用异体垂体移植的手术方法造模,术后死亡2只。按随机数字表法将84只造模小鼠分成7组,分别为3月模型组、6月模型组、内异康复片高剂量组、中剂量组、低剂量组、中药对照组(丹莪妇康煎膏)、西药对照组(孕三烯酮)。另对12只小鼠做假手术,设为假手术组;12只做空白组。常规饲养3个月,将空白组、假手术组、3月模型组小鼠分别在动情期与间情期处死。其他组分别灌胃给予相应浓度的药物或蒸馏水(6月模型组)饲养3月后分别在动情期与间情期处死。病理切片、HE染色分组分析内膜腺体及间质侵润肌层的程度。观察并评分研究清湿化瘀法治疗子宫腺肌病的病理改变。采用免疫组化方法,观察治疗前后在动情期和间情期各组在位及异位内膜上雌激素效应相关因子的表达(P450arom、COX2、PGE2),寻找清湿化瘀法治疗AM的可能靶点。结果： 1.形态学上观察到异位组织肌层浸润并做子宫腺肌病严重程度分级评分,正常组和假手术组为0分,3月模型组动情期2.67分,间情期2.17分,6月模型组动情期3.50分,间情期2.83分,分级指标提示3月模型组子宫内膜间质细胞与腺体浸润肌肉内层,6月模型组子宫内膜间质细胞和腺体浸润内外肌层交界处,表明两组均造模成功,且疾病严重程度随病程而升高,手术过程对造模无影响。 2. P450、PGE2、COX-2的表达在形成AM模型后随病程进展逐渐升高,6月模型组高于3月模型组(P0.05)。三个指标在不同治疗方法治疗后均下降,内异康复片高剂量组优于其他各治疗组,与6月模型组比较具有显著的统计学差异(P法造模3月成功率达83%(10/12),造模6月成功率达到100%(12/12),是一个值得推广的AM造模方法。 2.从实验指标表达结果看,清湿化瘀法能够通过下调在位及异位内膜雌激素效应相关因子P450、COX-2、PGE2表达,阻断雌激素生成的正反馈环,抑制雌激素的产生,从而治疗AM。故我们可以认为雌激素效应相关因子P450、COX-2、PGE2为清湿化瘀法的治疗靶点。 3.内异康复片高剂量对在位及异位内膜雌激素效应相关因子P450、COX-2、PGE2的影响优于其他各治疗组,运用清湿化瘀类中药,在有效改善雌激素效应异常的同时减少西药副作用,是值得深入研究的中药复方。 4.雌激素效应相关因子P450、COX-2、PGE2的表达会随小鼠动情周期而变化,动情期高于间情期。

关键词：子宫腺肌病清湿化瘀法 P450 COX-2 PGE2

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作者：范小雪成都中医药大学

学位级别：硕士

目的采用作为院内制剂应用多年并取得明显疗效的清湿化瘀法代表方(内异康复片),观察其对AM小鼠雌激素效应相关因子p-STAT3、17β-HSDI、17β-H SDII在不同动情周期、在位和异位内膜表达的影响;探究清湿化瘀法通过调控雌激素效应治疗AM... 详细信息

目的采用作为院内制剂应用多年并取得明显疗效的清湿化瘀法代表方(内异康复片),观察其对AM小鼠雌激素效应相关因子p-STAT3、17β-HSDI、17β-H SDII在不同动情周期、在位和异位内膜表达的影响;探究清湿化瘀法通过调控雌激素效应治疗AM的机制,提供内异康复片临床推广及应用于AM治疗的科学证据。方法在8周龄ICR雌性小鼠右侧宫腔内注入同种雄鼠垂体悬浊液,建立AM模型。造模完成后采用随机数字表法分为以下7组:内异康复片(NYKFP)低、中、高剂量组、丹莪妇康煎膏组(DEFKJG)、孕三烯酮组(GES)、3组模型组(3M)、6月模型组(6M),另有假手术组(Sham)及正常组(Normal),每组24只。常规喂养3月后,正常组、假手术组、3月模型组在动情期和间情期各处死小鼠12只。剩余组灌胃3月后同样在动情期和间情期各处死12只。将小鼠的子宫标本进行病理切片、HE染色,通过观察AM严重程度分级评分,结合评分比较建立AM模型前后、药物干预前后子宫内膜的病理变化;免疫组化技术检测小鼠子宫p-STAT3、17β-HSDI、17β-HSDII随时空变化的表达差异。结果***病理机制研究结果:AM严重程度分级评分,与正常组比较,假手术组无显著差异(P>0.05),3月模型组和6月模型组显著升高(P0.05),3月模型组及6月模型组显著升高(P0.05),3月模型组及6月模型组显著降低(P0.05),其余各治疗组评分显著降低(P0.05);剩余各模型组p-STAT3、17β-HSDI的表达,动情期高于间情期(P中剂量>低剂量;且高剂量内异康复片的调控力度优于丹莪妇康煎膏和孕三烯酮。4.子宫中的雌激素效应相关因子—p-STAT3、17β-HSDI、17β-HSDⅡ存在周期性表达,它们的表达与高雌激素反应相互增强,在动情期引起的雌激素效应较间情期高,可据此选择治疗AM的最适宜用药时间。

关键词：子宫腺肌病清湿化瘀法内异康复片 p-STAT3 17β-HSDⅠ 17β-HSDⅡ

清湿化瘀法治疗子宫内膜异位症和子宫腺肌病的临床研究

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清湿化瘀法治疗子宫内膜异位症和子宫腺肌病的临床研究

作者：莫冬梅成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:导师魏绍斌教授积数十年临床经验,采用清湿化瘀法治疗子宫腺肌病取得了较好疗效。在此基础上,应用导师经验方及内异康复片口服,妇安宁栓直肠导入,连续治疗3个月经周期,客观评价清湿化瘀法治疗子宫内膜异位症和(或)子宫腺肌病(湿热... 详细信息

目的:导师魏绍斌教授积数十年临床经验,采用清湿化瘀法治疗子宫腺肌病取得了较好疗效。在此基础上,应用导师经验方及内异康复片口服,妇安宁栓直肠导入,连续治疗3个月经周期,客观评价清湿化瘀法治疗子宫内膜异位症和(或)子宫腺肌病(湿热瘀结证)的确切临床疗效。方法:以临床诊断为子宫内膜异位症和(或)子宫腺肌病,中医证属湿热瘀结证,并且符合纳入标准的患者71例作为研究对象。根据疾病类型分为子宫内膜异位症组、子宫腺肌病组及子宫内膜异位症合并子宫腺肌病组;各组同时给予导师经验方汤剂口服,2日1剂,每日3次,经期不停药;内异康复片4片,口服,每日3次,妇安宁栓直肠纳药,每次1粒,每日1～2次,均经期停药,月经干净3天后继续用药;连续治疗3个月经周期;疗程结束后,对治疗前后痛经、慢性盆腔痛、月经异常、中医相关证候及血清CA125水平、妇科超声结果等临床资料进行统计分析,评价该治法的临床疗效。结果:(1)止痛疗效:治疗后痛经明显改善,总有效率为90.14%,治疗后痛经VAS评分较治疗前显著降低,差异具有统计学意义(P清CA125水平:治疗后较治疗前明显下降,差异具有统计学意义(P0.05);(6)EMT、AM及EMT合并AM三组患者组间比较:治疗前后在VAS评分差值、中医证候积分差值、血清CA125水平差值、子宫体积及卵巢子宫内膜异位囊肿缩小方面,组间比较均无统计学意义(P>0.05)。结论:清湿化瘀法治疗子宫内膜异位症和(或)子宫腺肌病(湿热瘀结证)在盆腔疼痛、月经过多、经期延长等方面疗效显著;相关中医证候及血清CA125水平亦明显改善;但子宫体积和(或)卵巢子宫内膜异位囊肿在短期内尚未取得理想疗效,需在日后延长治疗时间行进一步观察;说明本治法治疗子宫内膜异位症和(或)子宫腺肌病临床疗效显著。

关键词：子宫腺肌病子宫内膜异位症湿热瘀结证清湿化瘀法临床研究