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不同刺激剂对人淋巴细胞活化的影响

药学学报 2019年第10期54卷 1863-1867页

作者：闫征薛妮娜季鸣来芳芳陈晓光中国医学科学院北京协和医学院药物研究所天然药物活性物质与功能国家重点实验室/创新药物非临床药物代谢及PK/PD研究北京市重点实验室

本文研究不同刺激剂在体外对人淋巴细胞活化的影响。采用梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC),血液样本由中国食品药品检定研究院提供,并通过伦理委员会批准。用CD3/CD28抗体(anti-CD3/CD2... 详细信息

本文研究不同刺激剂在体外对人淋巴细胞活化的影响。采用梯度离心法分离获得人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC),血液样本由中国食品药品检定研究院提供,并通过伦理委员会批准。用CD3/CD28抗体(anti-CD3/CD28 antibody)、植物血凝素(phytohaemagglutinin, PHA)、金黄色葡萄球菌B型肠毒素(Staphylococcus auresus enterooxin B, SEB)、白介素27 (interleukin 27, IL27)、佛波酯(phorbol myristrate acetate,PMA)+离子霉素(ionomycin)在体外分别刺激24 h,观察CD3^+CD4^+和CD3^+CD8^+T细胞亚群CD69表达。同时采用CellTiter-Glo发光法和ELISA法检测淋巴细胞增殖和IFNγ的分泌。CD3/CD28抗体、PMA+ionomycin、SEB和IL27作用PBMC 24 h不影响淋巴细胞增殖,但可以很好地活化CD3^+CD4^+和CD3^+CD8^+T细胞,表现为CD69的平均荧光强度显著右移,并促进淋巴细胞IFNγ的分泌。CD3/CD28抗体、PMA+ionomycin、SEB和IL27是T细胞活化的有效刺激剂。

关键词： CD69 干扰素γ 淋巴细胞增殖淋巴细胞活化

牛蒡子苷元对炎性刺激剂 PMA/ionomycin 诱导淋巴细胞活化的抑制作用 (英文)

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药学学报 2014年第4期49卷 482-489页

作者：孙成宏赖新强张丽姚景春关永霞潘丽红徐真真闫莹鲁南制药集团股份有限公司新药药理中心山东临沂273400 暨南大学实验技术中心广东广州510632 鲁南制药集团股份有限公司科研部山东临沂273400 临沂市人民医院山东临沂276003

探讨牛蒡子苷元(arctigenin)对phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA)/ionimycin(Ion)诱导的淋巴细胞活化、细胞因子表达、细胞增殖和细胞周期分布的影响。PMA/Ion处理小鼠淋巴结淋巴细胞,流式细胞术检测Arc对淋巴细胞CD69和CD25的表达... 详细信息

探讨牛蒡子苷元(arctigenin)对phorbol-12-myristate-13-acetate(PMA)/ionimycin(Ion)诱导的淋巴细胞活化、细胞因子表达、细胞增殖和细胞周期分布的影响。PMA/Ion处理小鼠淋巴结淋巴细胞,流式细胞术检测Arc对淋巴细胞CD69和CD25的表达、细胞因子的释放、细胞增殖以及细胞周期分布的影响。结果显示,浓度低于1.00μmol·L-1时,Arc未表现出明显的细胞毒性,但可有效抑制PMA/Ion刺激的淋巴细胞CD69、CD25的表达和TNF-α、IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10释放;同时,Arc显著抑制PMA/Ion活化的淋巴细胞增殖,并将细胞周期阻滞在G0/G1期。以上结果提示:牛蒡子苷元可通过抑制淋巴细胞活化、细胞因子释放和细胞增殖发挥抗炎效应。

关键词：牛蒡子苷元抗炎淋巴细胞活化细胞因子细胞增殖

T淋巴细胞活化在严重发热伴血小板减少综合征疾病发展中的作用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第6期29卷 637-640,643页

作者：韩亚萍李军张永祥严友德吴玉英刘艳党旖旎孔练花邢益平黄祖瑚南京医科大学第一附属医院感染病科江苏南京210029

目的探讨严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)感染过程中,外周血T淋巴细胞活化对血液细胞、组织损伤和疾病发展的影响。方法应用流式细胞术,动态定量监测严重发热伴血小板减少综合征(SFTS)患者外周血中T淋巴细胞表面CD69、HLA-DR、C... 详细信息

目的探讨严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)感染过程中,外周血T淋巴细胞活化对血液细胞、组织损伤和疾病发展的影响。方法应用流式细胞术,动态定量监测严重发热伴血小板减少综合征(SFTS)患者外周血中T淋巴细胞表面CD69、HLA-DR、CD28和CTLA-4等表达水平,分析其细胞表面分子变化与血清酶学以及白细胞和血小板异常的关系。结果 SFTS患者T细胞活化分子CD69和HLA-DR在整个病程中表达水平明显增加(P细胞表面CD28的表达在SFTSV感染早期明显减低,但随病程发展而逐渐回升至正常范围,而T细胞表面CTLA-4的高表达则出现在感染后的中晚期。SFTS患者病程中,血清ALT、AST和LDH、CK等均明显高于正常范围,并伴随着T细胞表面CD69、HLA-DR等活化分子下调和CTLA-4表达水平上调而逐步恢复正常;白细胞和血小板计数的最低值出现在病程初期,伴随着T细胞表面CD69、HLA-DR等活化分子下调和CTLA-4表达增加逐渐回升至正常范围。结论 T淋巴细胞的过度活化可能是组织损伤的主要因素之一,而CTLA-4高表达,则可能是对机体T淋巴细胞过度活化的一种负反馈调节,在SFSTV感染者的免疫应答调节中发挥重要作用。

关键词：发热血小板减少布尼亚病毒科感染淋巴细胞活化流式细胞术

妊娠对小鼠外周血ROS、NO、细胞因子水平及T淋巴细胞活化的影响

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中华妇产科杂志 2013年第6期48卷 453-456页

作者：贺芳陈敦金李连英陈启宪广州医学院第三附属医院妇产科 510150

【摘要】目的探讨妊娠对小鼠外周血中性粒细胞（PMN）胞内活性氧簇（ROS）、血清NO和细胞因子水平、T淋巴细胞活化的影响。方法以处于中孕期（孕14d）的BALB／c小鼠为研究对象，分为妊娠组（为正常孕鼠）、对照组（为正常非孕雌鼠）。以... 详细信息

【摘要】目的探讨妊娠对小鼠外周血中性粒细胞（PMN）胞内活性氧簇（ROS）、血清NO和细胞因子水平、T淋巴细胞活化的影响。方法以处于中孕期（孕14d）的BALB／c小鼠为研究对象，分为妊娠组（为正常孕鼠）、对照组（为正常非孕雌鼠）。以2，7-二氯双氢荧光素乙二脂（H：DCFDA）进行外周血染色，结合流式细胞仪检测外周血PMN胞内ROS水平；Griess试剂盒检测外周血血清中NO的水平；用流式微球阵列（CBA）方法检测血清细胞因子白细胞介素（IL）6、IL-10、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、干扰素1（IFN-1）、肿瘤坏死因子α（TNF—α）和IL-12的水平；采用荧光抗体双色标记方法结合流式细胞仪分别检测外周血T淋巴细胞早、中、晚期活化标志——cD。CD：，及CD，，的表达率。结果与对照组小鼠外周血PMN胞内ROS水平（101．1±2．2）比较，妊娠组小鼠ROS水平升高（为134．5±10．3），两组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。对照组小鼠外周血血清NO水平为（22．7±0．7）μmol／L，妊娠组小鼠血清NO水平提高到（36．3±1．2）txmol／L，两组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。对照组小鼠外周血IL-6、IL-10、MCP-1、IFN．1、TNF—α和IL-126种细胞因子的水平分别为（9．3±0．5）、（26．7±0．9）、（21．2±1．6）、（14．5±1．8）、（22．6±1．6）和（8．4±1．2）pg／ml，妊娠组分另0为（26．5±1．0）、（40．4±2．5）、（25．1±0．7）、（457．4±17．9）、（93．2±4．3）及（7．5±0．9）pg／ml；与对照组分别比较，妊娠组小鼠外周血血清中IL-6、IFN-γ、TNF-α的水平显著升高（P〈0．01），但IL．10、MCP．1的水平则无差异（P〉0．05）。对照组小鼠外周血CD；T淋巴细胞中CD69、CD，和CD的表达率分别为（0．43±0．15）％、（5．13±0．25）％和（0．37±0．11）％，而妊娠组分别为（0．40±0．10）％、（6．17±0．40）％及（6．10±0．31）％；与对照组分别比较，CD2，和CD71的表达率明显升高（P〈0．05），CD69则无明显差异（P=0．15）。结论中孕期小鼠外周血PMN胞内ROS水平和血清NO水平升高，细胞因子IL-6、IFN-γ，TNF-α水平增加，T淋巴细胞的中、晚期活化能力增强。

关键词：妊娠中期活性氧一氧化氮细胞因子类淋巴细胞活化

雷公藤内酯醇LLDT-8在抗GBM抗体诱导小鼠肾炎中的疗效作用及对Fc受体介导淋巴细胞活化的调控机制

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中国药理学与毒理学杂志 2016年第10期30卷 1033-1034页

作者：祁青何世君唐炜左建平上海中医药大学免疫与病毒实验室上海201203 中国科学院上海药物研究所免疫药理学研究室上海201203

目的研究(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(LLDT-8)对小鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎的疗效作用,探讨LLDT-8对Fcγ受体介导的淋巴细胞活化的调控机制。方法 (1)运用兔抗小鼠GBM血清诱导的雄性NZW小鼠肾炎模型,以LLDT-8口服治疗4周。观察药物对肾... 详细信息

目的研究(5R)-5-羟基雷公藤内酯醇(LLDT-8)对小鼠抗肾小球基底膜(GBM)肾炎的疗效作用,探讨LLDT-8对Fcγ受体介导的淋巴细胞活化的调控机制。方法 (1)运用兔抗小鼠GBM血清诱导的雄性NZW小鼠肾炎模型,以LLDT-8口服治疗4周。观察药物对肾炎小鼠的体重、蛋白尿、肾病理变化等指标的影响作用;(2)采用流式细胞术对LLDT-8治疗干预肾炎小鼠肾浸润细胞亚群比例及表型进行分析;(3)采用免疫荧光法观察小鼠肾小球中补体沉积及炎性单核细胞浸润;(4)采用PCR法检测肾组织中Fcγ受体及炎性因子表达;(5)采用肾炎小鼠疾病高峰脾淋巴细胞,考察LLDT-8对抗血清诱导记忆性细胞应答的影响。结果 (1)LLDT-8能缓解抗GBM抗体诱导肾炎小鼠的疾病进程,改善肾病变,减少肾补体沉积及免疫细胞浸润。(2)LLDT-8治疗能降低疾病高峰血清中IFN-γ及IL-6水平。(3)LLDT-8降低疾病发展各阶段的外周及肾CD11b+单核细胞Fcγ受体表达水平。(4)LLDT-8体外抑制肾炎小鼠淋巴细胞抗原特异性增殖,降低Ig G及IL-6的分泌水平。结论证实了LLDT-8对于抗GBM抗体诱导的小鼠肾炎具有显著的治疗作用,阐明了LLDT-8影响单核/淋巴细胞的Fcγ受体的表达,调控抗原特异性记忆淋巴细胞应答效应并抑制肾病灶中免疫细胞浸润,从而缓解肾小球肾炎进程的疗效机制。

关键词：雷公藤内酯醇抗GBM抗体诱导肾炎 Fcγ受体淋巴细胞活化

2型糖尿病患者尿白蛋白排泄率与外周血淋巴细胞活化关系的观察

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中国糖尿病杂志 2013年第10期21卷 883-885页

作者：陈小敏黄群沈兴平马红张岩黄延玲吴豪杰张文强厦门大学附属中山医院内分泌科福建361004

目的探讨T2DM患者尿白蛋白排泄率（UAER）与外周血淋巴细胞活化的关系。方法纳入100例T2DM患者，根据UAER水平，分为不伴白蛋白尿（A）组和伴有白蛋白尿（B）组，并设健康对照（C）组，分析UAER与淋巴细胞活化水平和其他指标的相关性。... 详细信息

目的探讨T2DM患者尿白蛋白排泄率（UAER）与外周血淋巴细胞活化的关系。方法纳入100例T2DM患者，根据UAER水平，分为不伴白蛋白尿（A）组和伴有白蛋白尿（B）组，并设健康对照（C）组，分析UAER与淋巴细胞活化水平和其他指标的相关性。结果T淋巴细胞HLA-DR抗原阳性（CD3^＋HLA-DR^＋）细胞比率A组高于C组E9．7％（6．1％～13．9％）vs6．2％（4．0％～10．2％），P〈0．05]。B淋巴细胞HLA-DR抗原阳性（CD3-HLA-DR^＋）细胞比率B组低于A组[（15．7±5．7）％邯（18．3±5．2）％，P〈0．05]。Spearman相关分析显示，UAER与年龄、病程、SBP及SUA呈正相关，而与CD3-HLA-DR^＋细胞比率和估算肾小球滤过率（eGFR）呈负相关。结论免疫学异常可能在T2DM患者CKD的病理生理机制发挥一定的作用。

关键词：淋巴细胞活化糖尿病,2型尿白蛋白排泄率

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B淋巴细胞活化与抗体介导的排斥反应

中华器官移植杂志 2010年第6期31卷 321-324页

作者：石炳毅解放军第三○九医院全军器官移植中心北京100091

上世纪90年代以前,人们普遍认为移植排斥反应主要由细胞免疫所致.近年来,抗体介导的体液免疫在移植排斥反应过程中的作用重新得到重视,B淋巴细胞则是体液免疫的核心[1].B淋巴细胞活化的过程非常复杂且精确,有众多调控因子参与.目前认为,... 详细信息

上世纪90年代以前,人们普遍认为移植排斥反应主要由细胞免疫所致.近年来,抗体介导的体液免疫在移植排斥反应过程中的作用重新得到重视,B淋巴细胞则是体液免疫的核心[1].B淋巴细胞活化的过程非常复杂且精确,有众多调控因子参与.目前认为,由B淋巴细胞产生抗体诱导的效应机制包括补体依赖途径和非补体依赖途径的抗体依赖细胞毒性、炎症细胞的募集反应和补体依赖的吞噬作用.最终的病理反应为血小板激活和血栓形成、平滑肌和内皮细胞的病理性增殖以及体液和细胞侵袭损伤内皮细胞进而导致组织损伤.

关键词：移植排斥反应淋巴细胞活化抗体介导抗体依赖细胞毒性 B淋巴细胞体液免疫组织损伤内皮细胞

外周血T淋巴细胞活化状态在9种病原体感染急性期患儿的变化

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实验与检验医学 2019年第4期37卷 655-658页

作者：李晶林珊陈美光福建省福州儿童医院检验科

目的检测EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、肺炎支原体(MP)、柯萨奇病毒(COX)、单纯疱疹病毒(HSV)、风疹病毒(RV)、乙型流感病毒、副流感病毒、肠道EV71病毒9种病原体感染后患儿活化T淋巴细胞亚群表达情况,探讨不同病原体感染后的变化特... 详细信息

目的检测EB病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)、肺炎支原体(MP)、柯萨奇病毒(COX)、单纯疱疹病毒(HSV)、风疹病毒(RV)、乙型流感病毒、副流感病毒、肠道EV71病毒9种病原体感染后患儿活化T淋巴细胞亚群表达情况,探讨不同病原体感染后的变化特点。方法采集病原体感染后患儿急性期外周血以美国BD公司生产的四色荧光抗体进行标记,以FACSCalibur流式细胞仪测定淋巴细胞表面抗原CD3+及活化指标CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+、CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和绝对计数,以MultiSET软件获取数据并分析结果,SPSS19.0软件进行统计分析,并与健康儿童对照比较。结果CMV、MP、COX、RV、肠道EV71及副流感病毒急性感染期CD3+细胞百分比显著减低,其中肠道EV71CD3+绝对计数减低,副流感病毒CD3+绝对计数显著减低,而EBVCD3+绝对计数显著增高。EBV、CMV、MP、COX、肠道EV71及混合感染急性期CD38+细胞百分比显著减低,其中MP、COX、EV71感染及混合感染CD4+CD38+的绝对计数显著减低。EBV、CMV、风疹病毒(RV)、乙型流感病毒及混合感染急性期CD4+HLA-DR+百分比和绝对计数均增高,单纯疱疹病毒(HSV)感染时CD4+HLA-DR+绝对计数增高;而肠道ev71病毒感染时CD4+HLA-DR+百分比和绝对计数均显著减低,柯萨奇病毒(COX)感染时CD4+HLA-DR+绝对计数显著减低。CD8+CD38+百分比和绝对计数在EB病毒(EBv)、巨细胞病毒(CMV)、单纯疱疹病毒(HSV)、风疹病毒(RV)、副流感病毒感染时均增高,尤其在EB病毒(EBv)、巨细胞病毒(CMV)感染时显著增高,CD8+CD38+百分比在柯萨奇病毒(COX)、乙型流感病毒感染时增高,CD8+CD38+绝对计数在肠道ev71病毒感染时显著减低。CD8+HLA-DR+百分比和绝对计数在巨细胞病毒(CMV)、乙型流感病毒及副流感病毒感染时增高,其百分比在风疹病毒(RV)感染时增高,其绝对计数在EB病毒(EBv)、单纯疱疹病毒(HSV)及混合感染时增高。结论9种病原体感染后患儿体内呈免疫活化和失衡状态;不同病原感染后,患儿T细胞免疫改变各具特点;检测患儿活化T淋巴细胞亚群可作为一种鉴别和监测手段,为临床鉴别病原体感染和掌握患儿病情提供重要参考依据。

关键词：淋巴细胞活化流式细胞术儿童病原体

三七提取物对小鼠淋巴细胞活化、增殖和腹腔巨噬细胞产生NO的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第6期27卷 499-503页

作者：周建国曾耀英黄秀艳肇静娴叶雪仪臧宁钱中清何贤辉暨南大学组织移植与免疫研究中心广州510632

目的分析三七提取物(SE)对小鼠淋巴细胞体外活化、增殖以及对巨噬细胞产生NO的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激淋巴细胞活化和增殖,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术和流式细胞术检测SE对小鼠C... 详细信息

目的分析三七提取物(SE)对小鼠淋巴细胞体外活化、增殖以及对巨噬细胞产生NO的影响,探讨其免疫抑制作用的机制。方法以多克隆刺激剂刀豆蛋白A(Con A)刺激淋巴细胞活化和增殖,利用荧光标记的单克隆抗体双染技术和流式细胞术检测SE对小鼠CD3^+ T细胞CD69表达的影响;通过CPSE染色流式细胞术检测SE对淋巴细胞增殖的影响;用脂多糖(LPS)或淋巴细胞培养上清液(lymphocytes culture supernate,LCS)体外诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO,采用Griess试剂盒检测NO的水平。结果在Con A刺激6 h后小鼠T细胞活化率为59.79%,50、100μg/ml的SE可显著降低其活化率,分别为46.50%和37.73%(P细胞的增殖。SE在12.5～100μg/ml的浓度范围内对淋巴细胞培养上清和LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO的释放具有抑制作用(P淋巴细胞的活化、增殖有明显抑制作用,并能抑制巨噬细胞产生NO(P<0.01)。

关键词：三七提取物淋巴细胞活化巨噬细胞 NO