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单细胞测序揭示Ly6e分子对乳腺癌4T1细胞移植瘤微环境中DC浸润及功能的抑制作用

中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第8期31卷 759-768页

作者：吴越陈燚婷朱艳阳兰海林周琳琳张秋玉福建医科大学免疫治疗研究院福建福州305122 肿瘤免疫药物开发国家与地方联合工程研究中心福建福州305122

目的:本研究利用单细胞RNA测序分析技术(scRNA-seq)初步探索乳腺癌4T1细胞表达淋巴细胞抗原6复合物e(Ly6e)调控肿瘤免疫微环境(TIMe)的潜在机制。方法:利用CRISPR-Cas9技术构建Ly6e基因敲除小鼠乳腺癌4T1细胞(Ly6e-KO),观察其和野生型细... 详细信息

目的:本研究利用单细胞RNA测序分析技术(scRNA-seq)初步探索乳腺癌4T1细胞表达淋巴细胞抗原6复合物e(Ly6e)调控肿瘤免疫微环境(TIMe)的潜在机制。方法:利用CRISPR-Cas9技术构建Ly6e基因敲除小鼠乳腺癌4T1细胞(Ly6e-KO),观察其和野生型细胞(Ly6e-WT)体外增殖和体内生长能力的差异。流式细胞术分选两类肿瘤组织中的CD45阳性细胞,再进行sc RNAseq分析。对于测序结果,首先利用Seurat软件包筛选差异表达基因谱,根据标记基因进行注释;再利用Cellchat和Monocle2软件分析细胞互作关系和特定免疫细胞的演化轨迹。结果:与Ly6e-WT相比,Ly6e-KO体外增殖能力无显著差异,但体内生长能力显著降低(Peq分析显示,Ly6e-KO移植瘤浸润DC比例显著高于Ly6e-WT,且DC处于更加活跃的增殖和分裂状态;三种DC亚群(pDC、cDC1和cDC3)与T细胞均存在显著的互作关系。同时发现,Ly6e-KO肿瘤中浸润T淋巴细胞增殖、活化及效应相关的基因表达水平均升高,提示Ly6e-KO具有更强抗肿瘤能力。最后,本研究对人类乳腺癌队列的sc RNA-seq数据进行了分析,进一步证实了上述发现。结论:肿瘤细胞Ly6e基因敲除后可通过增加TIMe中DC活化及浸润,继而增强机体抗肿瘤免疫应答。

关键词：淋巴细胞抗原6复合物e 肿瘤免疫微环境单细胞测序树突状细胞乳腺癌

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