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妊娠期肝内胆汁淤积症患者母胎混合淋巴细胞培养的研究

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中华妇产科杂志 2002年第9期37卷 523-525页

作者：董旻岳谢幸王正平贺晶周坚红程琪浙江大学医学院附属妇产科医院杭州310006

目的　通过观察母胎间混合淋巴细胞反应 ,探讨母胎组织相容性与妊娠期肝内胆汁淤积症 (ICP)发病的关系。方法　采用淋巴细胞转化法对 2 2例ICP患者 [ICP组 ,其中 5例合并妊娠高血压综合征 (妊高征 ) ]和 2 1例正常孕妇 (对照组 )进行母... 详细信息

目的　通过观察母胎间混合淋巴细胞反应 ,探讨母胎组织相容性与妊娠期肝内胆汁淤积症 (ICP)发病的关系。方法　采用淋巴细胞转化法对 2 2例ICP患者 [ICP组 ,其中 5例合并妊娠高血压综合征 (妊高征 ) ]和 2 1例正常孕妇 (对照组 )进行母胎淋巴细胞混合培养 ,计算淋巴细胞转化率 ;比较两组间淋巴细胞转化率的差异。通过检测ICP组孕妇的血清甘胆酸盐水平 ,分析淋巴细胞转化率与血清甘胆酸盐水平的相关性。结果　ICP组淋巴细胞转化率为 ( 2 4± 5 ) % ,对照组为 ( 3 6± 9) % ,两组比较 ,差异有极显著性 (P 淋巴细胞转化率无显著性差异 (P >0 0 5 )。ICP组淋巴细胞转化率与血清甘胆酸盐水平无显著相关性 [相关系数 (r) =0 40 3 ,P>0 0 5 ]。结论　ICP患者母胎混合淋巴细胞培养反应性降低 ,提示母胎间组织相容性增高、免疫识别与反应性降低。

关键词：妊娠并发症肝内胆汁郁积淋巴细胞培养试验组织相容性

长期混合淋巴细胞培养-细胞毒实验模型的建立

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中华器官移植杂志 2001年第5期22卷 277-279页

作者：房崇芸吴雄文韩军艳刘敏梁智辉龚非力华中科技大学同济医学院免疫学教研室武汉430030

目的　建立一种能较逼真地模拟移植排斥反应的体外实验模型。方法　利用EB病毒转化的B淋巴母样细胞系作为刺激细胞 ,诱导同种异体或异种外周血单个核细胞增殖 ,并分化为效应细胞 ,然后检测效应细胞对刺激细胞源靶细胞的杀伤活性 ,建立... 详细信息

目的　建立一种能较逼真地模拟移植排斥反应的体外实验模型。方法　利用EB病毒转化的B淋巴母样细胞系作为刺激细胞 ,诱导同种异体或异种外周血单个核细胞增殖 ,并分化为效应细胞 ,然后检测效应细胞对刺激细胞源靶细胞的杀伤活性 ,建立长期混合淋巴细胞培养细胞毒实验模型。结果　用不同刺激细胞诱导产生的效应细胞能有效杀伤刺激细胞来源的靶细胞 ,进一步克隆实验证实这种杀伤效应是由CD8+细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)所致。结论　长期混合淋巴细胞培养细胞毒实验模型能较逼真地模拟器官移植受者体内发生的由CTL介导的急性排斥反应。

关键词：淋巴细胞培养试验混合 T淋巴细胞细胞毒性急性排斥反应

人外周血树突状细胞体外稳定培养方法的建立及与磁珠法的比较

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中国地方病学杂志 2010年第5期29卷 572-577页

作者：单骄宇刘弓伯吐尔洪江·吐尔逊张雪阿尔孜古丽·吐逊林仁勇温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054

目的建立一种稳定的人外周血树突状细胞（DCs）体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）,再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子（rhGM-... 详细信息

目的建立一种稳定的人外周血树突状细胞（DCs）体外培养的方法,并与磁珠分选法进行比较.方法通过密度梯度离心法分离出志愿者的外周血单个核细胞（PBMC）,再分别应用磁珠分选法、贴壁法对PBMC进行培养,应用重组人集落刺激因子（rhGM-CSF）、重组人白细胞介素-4（rhIL-4）诱导获得DCs.倒置显微镜观察细胞形态变化,并分别在第3、5、6天用台盼蓝染色法进行细胞活力检测;经过1、2、5 h的贴壁培养后,应用流式细胞仪检测单核细胞表面CD14、CD1a、HLA-DR的表达以确定最佳贴壁时间;经人重组细胞因子诱导培养后,对所获得的细胞检测CD14、CD1a、CD86、CD83、HLA-DR的表达.采用同种混合淋巴细胞反应,评价DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力.结果经贴壁2 h后诱导培养的DCs形态较典型.磁珠分选法获得的DCs第5、6天细胞活力[（53.333±5.774）%、（38.333±7.638）%]明显低于第3天[（68.667±3.215）%,P均＜0.05];贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天的细胞活力[（92.667±3.055）%、（94.000±1.000）%和（94.667±1.528）%]比较,差异无统计学意义（F=0.737,P＞0.05）;贴壁培养法获得的DCs第3、5、6天细胞活力均高于磁珠分选法（t值分别为9.374、12.021、12.527,P均＜0.05）.PBMC经磁珠分选前后CD14的阳性表达率分别为（32.457±12.351）%、（41.914±14.858）%,二者比较差异无统计学意义（t=1.295,P＞0.05）.单核细胞表面CD14的阳性表达率在培养2 h时[（35.267±4.658）%]高于培养1、5 h时[（15.033±6.189）%、（21.233±4.895）%,P均＜0.05].培养第6天,DCs表面CD14的阳性表达率[（2.200±1.356）%]较第1天[（32.328±14.517）%]明显下降（t=5.467,P＜0.05）,CD1a的阳性表达率[（43.371±16.250）%]较第1天[（12.300±6.223）%]显著升高（t=2.545,P＜0.05）;而CD86、CD83、HLA-DR的阳性表达率[（16.857±5.686）%、（9.343±5.230）%、（72.800±17.881）%]与第1天[（12.550±16.758）%、（6.250±1.323）%、（64.671±15.588）%]比较,差异无统计学意义（t值分别为0.652、1.137、0.907,P均＞0.05）.同种混合淋巴细胞反应,随着淋巴细胞的增多,增殖能力下降.磁珠分选法中,DCs与淋巴细胞的比例为1：50、1：100时,细胞增殖能力（1.502±0.055、1.507±0.029）较1：10时（1.859±0.049）降低（P均＜0.05）;贴壁培养法中,DCs与淋巴细胞的比例为1：100时,细胞增殖能力（1.545±0.066）较1：10时（2.015±0.301）降低（P＜0.05）.在DCs与淋巴细胞的比例相同时,两种方法得到的DCs在刺激T淋巴细胞方面的能力相近（P＞0.05）.结论与磁珠分选法比较,贴壁培养2 h后的人外周血PBMC再行诱导可获得形态与功能较优的DCs,且此法稳定、简便、经济,是一种适于基础、临床研究的DCs体外培养方法.

关键词：树突细胞细胞培养技术细胞因子类流式细胞术淋巴细胞培养试验混合

MG132诱导HL-60细胞表达共刺激分子CD86及对混合淋巴细胞反应的影响

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中华医学杂志 2007年第10期87卷 710-713页

作者：周咏明郭伟薛克营周浩程艳香郭天南李慧玉黄士昂华中科技大学同济医学院附属协和医院干细胞应用与研究中心武汉430022 华中科技大学同济医学院附属同济医院内分泌科华中科技大学同济医学院附属同济医院呼吸科华中科技大学同济医学院附属同济医院妇产科

目的研究蛋白酶体抑制剂 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。方法流式细胞仪检测 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析 CD80和 CD86 mRNA... 详细信息

目的研究蛋白酶体抑制剂 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD80、CD86及其对混合淋巴细胞反应的作用。方法流式细胞仪检测 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子CD80、CD86及细胞活力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析 CD80和 CD86 mRNA 表达情况;75 Gy照射 MG132诱导的 HL-60细胞后,用 CCK-8检测提高共刺激分子表达后,HL-60细胞对健康人单个核细胞的增殖作用。结果 MG132上调 HL-60细胞表达 CD86,高浓度的 MG132对 HL-60细胞有直接杀灭作用,MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD86后,对健康人单个核细胞起增殖作用。结论 MG132诱导 HL-60细胞表达共刺激分子 CD86,促进对健康人单个核细胞的增殖作用。

关键词：蛋白酶抑制药抗原 CD86 淋巴细胞培养试验混合

大鼠小肠系膜淋巴组织抗原刺激同种异体混合淋巴细胞增殖反应研究

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中华外科杂志 2007年第9期45卷 626-629页

作者：尹路陈春球陈桂明周光文周慧江施敏敏李宏为上海交通大学医学院附属瑞金医院普外科 200025

目的探讨大鼠小肠系膜淋巴组织通过树突状细胞(DC)和外周血单核细胞(PBMC)作用后刺激混合淋巴细胞增殖强度和与 DC 作用后 MHC 类分子表达变化。方法分离培养 SD 大鼠DC、PBMC、混合淋巴细胞,获取 Winstar 大鼠肠系膜淋巴结组织悬液。CC... 详细信息

目的探讨大鼠小肠系膜淋巴组织通过树突状细胞(DC)和外周血单核细胞(PBMC)作用后刺激混合淋巴细胞增殖强度和与 DC 作用后 MHC 类分子表达变化。方法分离培养 SD 大鼠DC、PBMC、混合淋巴细胞,获取 Winstar 大鼠肠系膜淋巴结组织悬液。CCK-8检测法测定负载肠系膜淋巴组织抗原的 DC 和 PBMC,及负载肠系膜淋巴组织抗原和卵白蛋白(OVA)抗原的 DC 对混合淋巴细胞刺激增殖能力;流式细胞仪分析肠系膜淋巴组织作用于 DC 后,其 MHC 类分子表达变化。结果获得的大鼠小肠淋巴组织悬液中,淋巴细胞占91%,其余包括少量粒细胞、浆细胞、上皮细胞等;在各组中负载肠系膜淋巴组织抗原的 DC 对混合淋巴细胞刺激增殖能力,均强于 PBMC(P淋巴细胞比例≥1:100各组中,负载肠系膜淋巴组织抗原的 DC,对混合淋巴细胞刺激增殖能力,强于负载 OVA 抗原的 DC(P淋巴细胞组织刺激 DC 后,其 MHC-Ⅰ和Ⅱ类分子表达高于未加入抗原组。结论小肠系膜淋巴组织具有强抗原性;DC 抗原呈递作用强于单核细胞;负载肠系膜淋巴组织抗原后的 DC 高表达 MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子。

关键词：小肠淋巴细胞培养试验混合大鼠树突状细胞

异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞分泌细胞因子的格局

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中华器官移植杂志 2001年第3期22卷 172-174页

作者：谢晋李宁丽陈福祥张勇沈佰华张冬青周光炎上海第二医科大学上海市免疫学研究所200025

目的　研究异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞亚群分泌细胞因子的格局。方法　用单向异种混合淋巴细胞反应体系研究人猪间细胞反应的细胞因子分泌格局。结果　γ干扰素的mRNA与蛋白质均强表达 ,而白细胞介素 4(IL 4)均无表达。初次混... 详细信息

目的　研究异种淋巴细胞混合培养时T淋巴细胞亚群分泌细胞因子的格局。方法　用单向异种混合淋巴细胞反应体系研究人猪间细胞反应的细胞因子分泌格局。结果　γ干扰素的mRNA与蛋白质均强表达 ,而白细胞介素 4(IL 4)均无表达。初次混合淋巴细胞反应时 ,IL 10的mRNA弱表达 ,但是猪抗原特异性T淋巴细胞系中未检测到IL 10mRNA表达。结论　异种淋巴细胞混合培养时以Ⅰ型细胞因子分泌为主。

关键词：异种移植淋巴细胞培养试验趋化因子类 T淋巴细胞移植物排斥反应

人间充质干细胞Stro-1^+和Stro-1^-亚群免疫抑制作用差异的体外研究

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解放军医学杂志 2007年第10期32卷 1040-1043页

作者：张翼鷟达万明赵丹丹唐菊英解放军总医院血液科北京100853

目的探讨人Stro-1+和Stro-1-间充质干细胞(MSCs)体外免疫抑制作用的差异。方法从骨髓细胞中分离单个核细胞接种于75cm2的培养瓶中,培养体系为Dexter培养液。当细胞在瓶底贴壁生长达50%融合时消化,并与Stro-1抗体共孵育。再将所获Stro-1+... 详细信息

目的探讨人Stro-1+和Stro-1-间充质干细胞(MSCs)体外免疫抑制作用的差异。方法从骨髓细胞中分离单个核细胞接种于75cm2的培养瓶中,培养体系为Dexter培养液。当细胞在瓶底贴壁生长达50%融合时消化,并与Stro-1抗体共孵育。再将所获Stro-1+和Stro-1-MSCs扩增15天(中位数)后进行流式细胞仪分析。设立单向混合淋巴细胞反应(MLR,于96孔板中加入反应淋巴细胞及刺激淋巴细胞各1×105/孔)及非特异性丝裂原刺激的淋巴细胞增殖反应体系(于96孔板中加入人外周血淋巴细胞1×105/孔、植物血凝素10μg/ml及白介素-2500U/ml)。在两反应体系中分别加入1×103~3×104个经照射的Stro-1+或Stro-1-MSCs,检测其对淋巴增殖反应的影响。结果原代贴壁细胞中含中位数为9%(5%~26%)的Stro-1+MSCs,该细胞亚群表达更高的MSCs表型;在MLR和非特异性丝裂原刺激的淋巴增殖体系中,Stro-1+和Stro-1-MSCs均可引起数量依赖性的增殖抑制效应(单向MLR中,当Stro-1-MSCs的数量为1×103时,该抑制效应消失);各个剂量组中,Stro-1+MSCs的抑制效应均显著高于相同剂量的Stro-1-MSCs(P细胞亚群为更原始、均一性更佳的骨髓基质细胞。

关键词：间质干细胞免疫抑制淋巴细胞培养试验混合植物血凝素白细胞介素2

可诱导共刺激分子与人IgGFc融合蛋白诱导同种免疫低应答的体内外实验

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中华器官移植杂志 2009年第7期30卷 389-393页

作者：张鹏秦琴王振猛沈茜第二军医大学附属长海医院检验科上海200433 第二军医大学附属东方肝胆外科医院麻醉科

目的探讨真核表达人可诱导共刺激分子（ICOS）与人IgGFc融合蛋白（ICOS-Ig融合蛋白）在体内外对同种免疫应答的影响。方法构建ICOS-Ig融合蛋白表达载体，在CHO细胞中表达并纯化ICOS-Ig融合蛋白。以Balb／c小鼠脾细胞为反应细胞，经CO^6... 详细信息

目的探讨真核表达人可诱导共刺激分子（ICOS）与人IgGFc融合蛋白（ICOS-Ig融合蛋白）在体内外对同种免疫应答的影响。方法构建ICOS-Ig融合蛋白表达载体，在CHO细胞中表达并纯化ICOS-Ig融合蛋白。以Balb／c小鼠脾细胞为反应细胞，经CO^60照射灭活的C57BL／6小鼠脾细胞为刺激细胞，进行初次混合淋巴细胞反应（MLR），MLR体系中分别加入50μg／ml ICOS-Ig融合蛋白（ICOS-Ig组）或对照IgG（IgG组），采用氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷（^3H-TdR）掺入法检测反应细胞的增殖情况，酶联免疫吸附试验（ELISA）检测培养上清液中白细胞介素（IL）2、4、10以及γ干扰素（IFN-γ）的含量。收集初次MLR细胞，与灭活的C57BL／6小鼠脾细胞或C3H小鼠脾细胞共培养，进行再次MLR，检测指标同初次MLR。以Co^60照射Balb／c小鼠，经尾静脉输注用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）标记的C578126小鼠脾细胞，每天腹腔注射ICOS-Ig融合蛋白0．2mg（ICOS-Ig组）、IgG（对照IgG组）或环孢素A（CsA组），3d后取Balb／c小鼠脾细胞，流式细胞仪测定CFSE荧光强度以判断同种T淋巴细胞的体内增殖情况。结果初次MLR显示，ICOS-Ig组同种T淋巴细胞活化增殖的抑制率为（58±8）％，其培养上清液中IFN-γ的水平明显高于IgG组（P〈0．05）。再次MLR显示，ICOS-Ig融合蛋白能特异性抑制C57BL／6小鼠脾细胞所致的细胞增殖，抑制率为（42±8）％，IL-4和IL-10的分泌受到抑制，而IFN-γ的分泌增加；ICOS-Ig融合蛋白并不抑制第三方细胞所致的细胞增殖。体内实验显示，ICOS-Ig组和CsA组的CFSE荧光强度明显强于空白对照组和对照IgG组（P〈0．05），而联合处理组CFSE荧光强度强于ICOS-Ig组和CsA组（P〈0．05）。结论ICOS-Ig融合蛋白在体内外均可抑制同种T淋巴细胞的活化增殖，且这种作用具有特异性。

关键词：抗原 CD28 免疫球蛋白G 重组融合蛋白质类免疫抑制法淋巴细胞培养试验混合

冻存的亲属活体供肾者的骨髓源性树突状细胞介导受者淋巴细胞反应

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中华器官移植杂志 2011年第1期32卷 39-42页

作者：黄赤兵许晓婷冯嘉瑜范明齐张艮甫王平贤肖亚第三军医大学附属新桥医院肾移植中心重庆400037

目的探讨冻存的供者骨髓源性树突状细胞（DC）介导肾移植受者淋巴细胞反应的可行性.方法肾移植前取供者骨髓,分离单个核细胞,液氮冻存备用.术后1、3、6、9个月,取冻存的供者骨髓细胞分离CD34＋细胞,并培养DC,检测各时期DC活细胞的比率... 详细信息

目的探讨冻存的供者骨髓源性树突状细胞（DC）介导肾移植受者淋巴细胞反应的可行性.方法肾移植前取供者骨髓,分离单个核细胞,液氮冻存备用.术后1、3、6、9个月,取冻存的供者骨髓细胞分离CD34＋细胞,并培养DC,检测各时期DC活细胞的比率;同时,分别以供者DC和外周血淋巴细胞（PBL）作为刺激细胞,以术前未冻存过的供者骨髓源性DC作为对照,观察健康志愿者以及受者淋巴细胞对冻存不同时间的供者DC和PBL刺激的反应.结果术前每10 ml骨髓中可分离骨髓单个核细胞（BMMC）的数量平均为6.8 × 107个,免疫磁珠分选获得CD34＋细胞数为（4.10±0.58）×105个.冻存不同时间的BMMC复苏后,所分离到的CD34＋细胞的比率并无明显差异.术后1个月时,BMMC、CD34＋细胞存活率均大幅明显下降,以后呈缓慢进行性下降,BMMC的下降幅度大于CD34＋细胞.DC的活细胞比率维持在93.2%～94.8%.肾移植术后,各组DC对健康志愿者和受者淋巴细胞的刺激能力均显著强于PBL（P＜0.05）;在术后各时间观察点,健康志愿者淋巴细胞对DC刺激的反应波动在12 067±1190至14 238±1220（P＞0.05）,受者淋巴细胞对DC刺激的反应波动较大,在9490±1386～15 233±1098.结论供者骨髓源性DC具有稳定的细胞活力和刺激能力,其作为术后长时间内介导肾移植受者淋巴细胞反应的刺激原,明显优于供者外周淋巴细胞,术前仅需一次性取少量骨髓冻存,术后可随时且多次用于监测.

关键词：肾移植树突细胞低温保存淋巴细胞培养试验混合