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EBV阳性人鼻咽癌细胞外泌体促进淋巴管新生与鼻咽癌淋巴结转移

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南方医科大学学报 2020年第12期40卷 1776-1783页

作者：陈星睿李登科黄仲曦钟水生蔡林波广东三九脑科医院广东广州510510 南方医科大学肿瘤研究所广东广州510515

目的探讨EB病毒(EBV)阳性鼻咽癌细胞外泌体对淋巴管新生与鼻咽癌淋巴结转移的影响。方法利用超速离心获得细胞外泌体,对外泌体进行Western blot与纳米颗粒追踪分析(NTA)鉴定。利用Dio染料吞噬实验,验证外泌体可以被淋巴管内皮细胞摄取... 详细信息

目的探讨EB病毒(EBV)阳性鼻咽癌细胞外泌体对淋巴管新生与鼻咽癌淋巴结转移的影响。方法利用超速离心获得细胞外泌体,对外泌体进行Western blot与纳米颗粒追踪分析(NTA)鉴定。利用Dio染料吞噬实验,验证外泌体可以被淋巴管内皮细胞摄取。离体条件下,分别利用等体积培养基以及20μg/mL鼻咽上皮细胞(NP69)、HK1-EBV、C666-1细胞外泌体和除去外泌体的HK1-EBV与C666-1上清蛋白预处理淋巴管内皮细胞,检测淋巴管内皮细胞成管与迁移情况;在体实验,首先建立裸鼠腘窝淋巴结转移模型,负瘤裸鼠被随机分成4组,3只/组。对照组:腘窝处注射生理盐水(30μL);NP69外泌体组:10μg/30μL NP69外泌体;HK1-EBV除去外泌体上清组:10μg/30μL HK1-EBV除去外泌体上清蛋白;HK1-EBV外泌体组:10μg/30μL HK1-EBV外泌体。每2 d注射1次,共4次。结果超速离心获得外泌体富含外泌体特异性蛋白,同时NTA鉴定表明其粒径范围正常;鼻咽癌细胞与NP69外泌体可以被淋巴管内皮细胞摄取;HK1-EBV与C666-1外泌体较空白对照组与NP69外泌体可显著促进淋巴管内皮细胞成管与迁移(P0.05);腘窝淋巴结转移实验发现:HK1-EBV外泌体较空白对照组、NP69外泌体以及除去外泌体的HK1-EBV上清蛋白可显著促进鼻咽癌细胞淋巴结转移以及局部淋巴管新生(P淋巴管新生与淋巴结转移。

关键词： EB病毒鼻咽癌外泌体淋巴结转移肿瘤微环境淋巴管新生

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肾癌的淋巴管新生研究进展

中国肿瘤临床 2013年第22期40卷 1412-1414页

作者：李修明于满承德医学院附属医院泌尿外科河北省承德市067000

肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，占成人恶性肿瘤的2％-3％。淋巴管生成可能是肾癌淋巴结转移的重要因素，在肿瘤转移过程中，血管内皮生长因子及其受体家族发挥了重要的作用。血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C... 详细信息

肾癌是泌尿系统常见的恶性肿瘤，占成人恶性肿瘤的2％-3％。淋巴管生成可能是肾癌淋巴结转移的重要因素，在肿瘤转移过程中，血管内皮生长因子及其受体家族发挥了重要的作用。血管内皮生长因子-C（vascular endothelial growth factor-C，VEGF-C）与其特异性的受体血管内皮生长因子受体-3（vascular endothelial growth factor receptor-3，VEGFR-3）结合可促进淋巴管生成，并促进肿瘤淋巴结转移。肿瘤的淋巴管新生是当前肿瘤研究的热点，并有可能成为治疗肿瘤淋巴结转移的靶点。近年来对于肾癌淋巴管的研究正在展开，本文对肾癌淋巴管新生的最新研究进展及此项研究的临床意义进行综述。

关键词：肾癌淋巴管新生血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子受体-3

胃癌组织中神经纤毛蛋白2表达与肿瘤淋巴管新生和临床病理因素的相关性

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中华医学杂志 2014年第14期94卷 1067-1070页

作者：徐卫国刘云贾纯亮苗娜徐洪王宇鹏张世伟孙红刘和亮河北联合大学附属医院肿瘤外科河北省唐山市063000 唐山市人民医院胃肠外科河北联合大学医学实验研究中心河北联合大学基础医学院病理学系天津市北辰医院肿瘤科

目的：探讨神经纤毛蛋白2（NRP2）在胃癌组织中的表达及其与微淋巴管新生及临床病理因素的相关性。方法回顾性分析河北联合大学附属医院和唐山市人民医院2011年10月至2013年10月手术切除胃癌组织标本（每例患者分别取癌组织、癌旁组织... 详细信息

目的：探讨神经纤毛蛋白2（NRP2）在胃癌组织中的表达及其与微淋巴管新生及临床病理因素的相关性。方法回顾性分析河北联合大学附属医院和唐山市人民医院2011年10月至2013年10月手术切除胃癌组织标本（每例患者分别取癌组织、癌旁组织及相对正常区组织）共65例资料，采用免疫组织化学法检测NRP2表达情况，选取D2-40单克隆抗体标记淋巴管，计数微淋巴管密度（ MLD），观测淋巴管形态。结果癌组织、癌旁组织及相对正常区组织各65例，其中胃癌组织NRP2阳性表达率高于癌旁组织和正常组织[61.5％（40／65）比49.2％（32／65）和4.6％（3／65），均P＜0.05]；胃癌组织和正常组织MLD值分别为（12±5）、（23±6）个／mm2，均低于癌旁组织[（44±13）个／mm2，均P＜0.05]，各组淋巴管形态也各不相同；同时癌旁NRP2的表达情况及MLD与肿瘤大小、细胞分化程度、组织浸润深度、淋巴管浸润、淋巴结转移及肿瘤TNM分期均相关（均P＜0.05）。NRP2的表达强度与MLD呈正相关（r＝0.517，P＝0.000）。结论 NRP2可能参与调节胃癌微淋巴管新生和淋巴道转移，在胃癌肿瘤发生、病期进展中具有关键作用，推断其可作为胃癌预后判断的相关指标。

关键词：胃肿瘤神经纤毛蛋白质2 淋巴转移淋巴管新生 Neuropilin-2

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心脏淋巴管新生及其与心血管疾病预后的关系

复旦学报（医学版） 2017年第1期44卷 105-109,121页

作者：张海锋谭玉珍王海杰复旦大学上海医学院人体解剖与组织胚胎学系上海200032

心脏淋巴管的生理病理作用一直未引起人们的重视。但近年来,随着血管内皮生长因子受体-3(vascular endothelial growth factor receptor 3,VEGFR-3)、淋巴管内皮细胞透明质酸受体(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1,LYVE-1)、果蝇同源基因转录因子(prospero homeobox protein 1,Prox-1)、肾小球足细胞膜黏蛋白(podoplanin)等淋巴管内皮细胞标志物的发现,心脏淋巴管的研究迅速发展。心脏淋巴管引流淋巴液,其功能异常可引起心肌水肿、动脉硬化、心律失常、间质纤维化等。深入认识心脏淋巴管的生理病理作用,对于治疗心肌梗死、改善心血管功能、预防心脏手术后并发症等有着重要意义。本文综述了心脏淋巴管的发生、分布以及与心血管疾病预后的关系。

关键词：淋巴管心脏淋巴管新生心肌梗死

金复康口服液含药血清调控肺癌淋巴管新生机制探讨

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中华肿瘤防治杂志 2020年第5期27卷 337-344页

作者：彭文潘徐泳王志超冯凡超顾诚韩迪何海浪周贤梅南京中医药大学附属医院呼吸科江苏南京210029

目的中药制剂金复康口服液治疗肺癌的临床疗效已得到肯定,但机制尚不清楚。本研究探讨金复康口服液含药血清抑制肺癌淋巴管新生方向,探究其抑制肿瘤转移的分子学机制。方法将20只SD大鼠随机分为金复康口服液高剂量组〔15g/(kg·d)〕、... 详细信息

目的中药制剂金复康口服液治疗肺癌的临床疗效已得到肯定,但机制尚不清楚。本研究探讨金复康口服液含药血清抑制肺癌淋巴管新生方向,探究其抑制肿瘤转移的分子学机制。方法将20只SD大鼠随机分为金复康口服液高剂量组〔15g/(kg·d)〕、中剂量组〔10g/(kg·d)〕、低剂量组〔5g/(kg·d)〕和Control组(生理盐水),每组5只。IL-4+为使用白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)刺激的RAW264.7细胞,IL-4-为无任何刺激干预的RAW264.7细胞。流式细胞术分析其细胞表面CD206表达来检测RAW264.7细胞极化成M2型的情况。根据含药血清将共培养模型分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、Control组和Blank组(不加含药血清),Elisa法检测共培养模型下室培养基中血管内皮生长因子-C/D(vascular endothelial growth factor C/D,VEGF-C/D)蛋白含量;蛋白质印迹法检测下室Lewis细胞中VEGF-C/D的含量;实时q-PCR检测下室Lewis细胞中VEGF-C/D基因表达量。采用Graphpad prism for Mac(Version 8.1.1)、image J、FlowJo(Version 10.4)对数据进行统计分析。结果 M2型RAW264.7表型鉴定,CD206表达率IL4+为(58.45±1.45)%和IL-4-为(1.98±0.18)%,t=102.25,P管实验中高剂量组共培养模型下室中的培养基干预的HLEC细胞在Matrigel Matrix胶中形成管腔结构的数量明显减少。结论金复康口服液含药血清能够通过调控Lewis细胞合成VEGF-C/D,减少肺癌淋巴管新生从而达到抑制肿瘤转移。

关键词：金复康口服液淋巴管新生肺癌转移

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细胞外基质对体外淋巴管新生的作用

解剖学报 2002年第1期33卷 68-73页

作者：谭玉珍王海杰复旦大学医学院组织学胚胎学教研室上海200032 复旦大学医学院人体解剖学教研室上海200032

目的　探讨细胞外基质对淋巴管新生的作用。　方法　在Ⅰ型胶原蛋白凝胶中和Matrigel基膜基质凝胶上培养狗胸导管内皮细胞 ,相差倒置显微镜下观察内皮细胞形成的管状结构的形态 ,透射电镜下观察淋巴管样结构 ,用图像分析仪对管状结构作... 详细信息

目的　探讨细胞外基质对淋巴管新生的作用。　方法　在Ⅰ型胶原蛋白凝胶中和Matrigel基膜基质凝胶上培养狗胸导管内皮细胞 ,相差倒置显微镜下观察内皮细胞形成的管状结构的形态 ,透射电镜下观察淋巴管样结构 ,用图像分析仪对管状结构作定量分析。　结果　淋巴管内皮细胞在Ⅰ型胶原蛋白凝胶上生长成单层 ,但未见管状结构形成。在细胞上面覆盖上层凝胶后 ,内皮细胞发生形态变化 ,形成管状结构。肝素组的管状结构比对照组多 ,而肝素加bFGF组的管状结构比肝素组和bFGF组多。在Matrigel基膜基质凝胶上培养的内皮细胞向凝胶上层迁移 ,形成管状结构。管状结构较细 ,细胞较长。管状结构呈明显的牵拉状态。透射电镜下 ,淋巴管内皮细胞形成的管状结构具有毛细淋巴管的形态学特征。　结论　狗胸导管内皮细胞在Ⅰ型胶原蛋白凝胶和Matrigel基膜基质凝胶中形成毛细淋巴管样结构。细胞外基质对于淋巴管内皮细胞的形态变化、细胞迁移和淋巴管新生具有促进作用。

关键词：内皮细胞淋巴管细胞外基质淋巴管新生

补阳还五汤合参芪地黄汤化裁调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生对糖尿病肾病小鼠的保护作用

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中药新药与临床药理 2024年第6期35卷 778-788页

作者：黄家安张孟娟杨帆刘妍王月华河北中医药大学河北石家庄050200 河北省中西医结合肝肾病证研究重点实验室河北石家庄050091 河北中医药大学中西医结合研究所河北石家庄050091

目的基于调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾病(DKD)小鼠的保护作用及机制。方法将24只雄性db/db小鼠随机分为模型组、中药组(补阳还五汤合参芪地黄汤化裁,生药量24.44 g·kg-1)和西药组(厄... 详细信息

目的基于调控VEGF-C/VEGFR3通路抑制淋巴管新生探讨补阳还五汤合参芪地黄汤化裁对糖尿病肾病(DKD)小鼠的保护作用及机制。方法将24只雄性db/db小鼠随机分为模型组、中药组(补阳还五汤合参芪地黄汤化裁,生药量24.44 g·kg-1)和西药组(厄贝沙坦,13.5 mg·kg-1),每组8只,另外取8只db/m小鼠作为对照组。灌胃给药,每日1次,连续12周。检测小鼠血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、尿白蛋白/肌酐比值(ACR)及肾脏指数;采用HE、Masson染色法观察肾脏组织病理变化;免疫组化法检测肾脏组织纤连蛋白(FN)、Ⅰ型胶原蛋白(ColⅠ)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)、血管内皮生长因子受体3(VEGFR3)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)、淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)、平足蛋白(PDPN)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1β(IL-1β)的表达;Western Blot法检测肾脏组织ColⅠ、Vimentin、α-SMA、TGF-β1、VEGFR3、VEGF-C、LYVE-1、TNF-α、IL-1β蛋白表达;Real-time PCR法检测肾脏组织FN、ColⅠ、TGF-β1、VEGF-C、VEGFR3、TNF-α、IL-1βmRNA表达。结果与对照组比较,模型组小鼠的血清FBG、TG、TC、ACR水平及肾脏指数均明显升高(P管上皮细胞变性、坏死,间质有大量炎性细胞浸润,肾小管萎缩,纤维化水平明显升高(P管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显上调(P管毛细血管周围VEGFR3、PDPN蛋白表达均明显下调(P淋巴管新生有关。

关键词：补阳还五汤合参芪地黄汤化裁糖尿病肾病 VEGF-C/VEGFR3通路淋巴管新生炎症纤维化小鼠

腹膜透析大鼠模型膈肌中低氧诱导因子1α及血管内皮生长因子C表达与淋巴管新生的关系

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中华肾脏病杂志 2008年第2期24卷 105-107页

作者：张晓东钱家麒戴慧丽上海交通大学附属仁济医院肾科 200001

低氧诱导因子1α（HIF-1α）可通过调控多种生长因子表达，参与机体病理生理过程。有研究提示，在长期腹膜透析（PD）过程中存在膈肌淋巴孔及淋巴管新生的改变。本研究通过观察HIF-1α及血管内皮生长因子C（VEGF-C）在慢性肾功能衰竭（... 详细信息

低氧诱导因子1α（HIF-1α）可通过调控多种生长因子表达，参与机体病理生理过程。有研究提示，在长期腹膜透析（PD）过程中存在膈肌淋巴孔及淋巴管新生的改变。本研究通过观察HIF-1α及血管内皮生长因子C（VEGF-C）在慢性肾功能衰竭（CRF）PD模型膈肌组织中的表达，探讨其表达与淋巴管新生的关系。

关键词：血管内皮生长因子C 低氧诱导因子1α 长期腹膜透析淋巴管新生膈肌大鼠模型 HIF-1α 慢性肾功能衰竭

血小板内皮细胞黏附分子1、细胞间黏附分子3和CD44在体外淋巴管新生中的作用

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解剖学报 2005年第1期36卷 94-98页

作者：张文彩谭玉珍王海杰复旦大学上海医学院人体解剖学与组织胚胎学系上海200032

目的　探讨内皮黏附分子血小板内皮细胞黏附分子 1(PECAM 1)、细胞间黏附分子 3(ICAM 3)和CD4 4对淋巴管新生的作用。　方法　用狗的胸导管分离和培养淋巴管内皮细胞。标记内皮细胞的PECAM 1、ICAM 3和CD4 4 ,在荧光显微镜和共聚焦激光... 详细信息

目的　探讨内皮黏附分子血小板内皮细胞黏附分子 1(PECAM 1)、细胞间黏附分子 3(ICAM 3)和CD4 4对淋巴管新生的作用。　方法　用狗的胸导管分离和培养淋巴管内皮细胞。标记内皮细胞的PECAM 1、ICAM 3和CD4 4 ,在荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜下观察。内皮细胞用肿瘤坏死因子 (TNF α)或脂多糖 (LPS)刺激后 ,再阻断PECAM 1、ICAM 3和CD4 4 ,作细胞计数和计算迁移率。制备三维凝胶淋巴管形成模型 ,观察管状结构的形成 ,测量其长度和面积 ,并在透射电镜下观察其特征。　结果　淋巴管内皮细胞表达PECAM 1、ICAM 3和CD4 4。在对照组以及TNF α和LPS刺激组 ,分别阻断PECAM 1、ICAM 3和CD4 4后 ,内皮细胞的迁移率降低 ,管样结构的长度和面积减少。阻断PECAM 1或CD4 4后 ,细胞的增殖数目降低 ,但阻断ICAM 3后细胞的增殖数目无明显变化。在半薄和超薄切片上 ,淋巴管内皮细胞形成的管状结构具有毛细淋巴管的形态特征。　结论　体外培养的淋巴管内皮细胞表达PECAM 1、ICAM 3和CD4 4 ,这些黏附分子参与了淋巴管内皮细胞的增殖、迁移和管腔形成等淋巴管新生过程。

关键词：黏附分子淋巴管新生淋巴管内皮细胞