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淋巴管与淋巴管内皮细胞在食管癌淋巴转移过程中的作用及变化

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中国胸心血管外科临床杂志 2023年第5期30卷 766-772页

作者：郭嘉仪阿力木江·木明伊地力斯·阿吾提张海平张力为新疆医科大学第一附属医院胸外科乌鲁木齐830054 新疆医科大学国家重点实验室乌鲁木齐830054

淋巴系统是肿瘤转移扩散的主要途径。食管癌是典型的易经淋巴系统发生转移的癌症之一。目前越来越多的研究表明肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞的相互作用是肿瘤淋巴转移的第一步,然而两者相互作用的潜在分子机制尚不清楚。本文就肿瘤相关淋... 详细信息

淋巴系统是肿瘤转移扩散的主要途径。食管癌是典型的易经淋巴系统发生转移的癌症之一。目前越来越多的研究表明肿瘤细胞与淋巴管内皮细胞的相互作用是肿瘤淋巴转移的第一步,然而两者相互作用的潜在分子机制尚不清楚。本文就肿瘤相关淋巴管与淋巴管内皮细胞在肿瘤淋巴转移过程中的作用及变化进行综述,为进一步研究食管癌淋巴转移的具体分子机制奠定基础,并为食管癌患者提供新的治疗方向。

关键词：食管癌淋巴转移淋巴管内皮细胞肿瘤相关淋巴管综述

人参皂苷Re对淋巴管内皮细胞VEGF-C表达及其功能的影响

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中华中医药杂志 2022年第12期37卷 7018-7022页

作者：鲍嘉敏徐浩杭明辉杨灿王拥军梁倩倩上海中医药大学康复医学院上海201203 上海中医药大学附属龙华医院上海200032 上海中医药大学脊柱病研究所上海200032 筋骨理论与治法教育部重点实验室上海200032

目的:通过观察人参皂苷Re干预后对淋巴管内皮细胞(LECs)血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达影响,探索人参皂苷Re促进淋巴管生成作用,为人参皂苷Re成为治疗淋巴水肿潜在药物提供依据。方法:使用CCK-8法测定不同浓度人参皂苷Re干预24 h后对L... 详细信息

目的:通过观察人参皂苷Re干预后对淋巴管内皮细胞(LECs)血管内皮生长因子-C(VEGF-C)表达影响,探索人参皂苷Re促进淋巴管生成作用,为人参皂苷Re成为治疗淋巴水肿潜在药物提供依据。方法:使用CCK-8法测定不同浓度人参皂苷Re干预24 h后对LECs活性影响。运用ELISA方法检测细胞上清液中VEGF-C含量。采用RT-qPCR和Western blot方法,检测不同浓度人参皂苷Re干预下LECs VEGF-C mRNA及蛋白表达。通过划痕实验与成管实验,观察人参皂苷Re对LECs功能影响。结果:0~50μmol/L的人参皂苷Re干预24 h后对LECs活性无显著性影响。人参皂苷Re可以刺激VEGF-C mRNA表达,增加其蛋白表达及上清液中含量,同时促进LECs迁移和成管,并呈现出剂量依赖性。结论:人参皂苷Re通过刺激LECs VEGF-C表达,发挥促进淋巴管生成作用,是潜在治疗淋巴水肿药物。

关键词：人参皂苷Re 淋巴管内皮细胞血管内皮生长因子-C 淋巴管生成淋巴水肿

淋巴管内皮细胞的分离培养及生物学特性的观察

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第二军医大学学报 2001年第Z1期22卷 92-94页

作者：宋慧锋刘宁飞林子豪陈敏亮朱晓海赵耀中张玲珍第二军医大学长征医院整形外科上海200003 第二军医大学长征医院整形外科上海200003 第二军医大学长征医院整形外科上海200003 第二军医大学长征医院整形外科上海200003 第二军医大学长征医院整形外科上海200003 第二军医大学长征医院整形外科上海200003 长征医院实验诊断科

　　淋巴系统在人体新陈代谢过程中发挥着重要的作用,它参与了临床上诸多疾病如淋巴水肿、肿瘤等的发生、发展及转归过程,淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelium, LEC)作为淋巴系统的功能细胞之一,在上述过程中扮演着重要角色,然而上述... 详细信息

　　淋巴系统在人体新陈代谢过程中发挥着重要的作用,它参与了临床上诸多疾病如淋巴水肿、肿瘤等的发生、发展及转归过程,淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelium, LEC)作为淋巴系统的功能细胞之一,在上述过程中扮演着重要角色,然而上述病理生理现象的基础研究进展缓慢,原因之一是目前所采用的LEC培养体系无论在细胞来源、所获得的细胞纯度方面均不理想.我们取新生小牛的胸导管,对其内皮细胞进行分离、原代培养及传代培养,观察其生长情况,并采用流式细胞术对其表面血管内皮细胞生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3, VEGFR-3)的特异性表达进行检测.……

关键词：淋巴管内皮细胞血管内皮细胞生长因子受体3

淋巴管内皮细胞标志物及其体外培养的研究进展

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江苏医药 2011年第2期37卷 218-220页

作者：周雪飞钱晓萍刘宝瑞南京大学医学院附属南京鼓楼医院肿瘤中心江苏省分子医学技术重点实验室 210008

淋巴道转移是大多数实体瘤播散的早期事件,而肿瘤转移是目前肿瘤治疗失败的主要原因。因此,阻断肿瘤转移对提高患者生活质量,延长患者生存期有着十分重要的意义。近年来随着淋巴管内皮细胞(LEC)特异性标志物的发现以及LEC体外培养平台... 详细信息

淋巴道转移是大多数实体瘤播散的早期事件,而肿瘤转移是目前肿瘤治疗失败的主要原因。因此,阻断肿瘤转移对提高患者生活质量,延长患者生存期有着十分重要的意义。近年来随着淋巴管内皮细胞(LEC)特异性标志物的发现以及LEC体外培养平台的建立,淋巴管系统在生理和病理状态下的生物学行为越来越明确,本文就LEC的相对特异性的标志物以及它的体外培养的进展做一综述。

关键词：淋巴管内皮细胞细胞标志物体外培养肿瘤转移特异性标志物淋巴道转移生物学行为淋巴管系统

三种诱导因子在骨髓间充质干细胞向淋巴管内皮细胞分化中的作用

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中华烧伤杂志 2019年第2期35卷 125-133页

作者：王远航薛斌重庆医科大学附属第一医院烧伤整形外科 400016

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)在骨髓间充质干细胞(BMSC)向淋巴管内皮细胞(LEC)分化中的作用. 方法取第3~5代大鼠BMSC进行实验.(1)取大鼠BMSC,采用随机数字表法(分组方法下... 详细信息

目的观察碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子C(VEGF-C)在骨髓间充质干细胞(BMSC)向淋巴管内皮细胞(LEC)分化中的作用. 方法取第3~5代大鼠BMSC进行实验.(1)取大鼠BMSC,采用随机数字表法(分组方法下同)分为阴性对照组、CD90组、CD44组、CD34组,每组样本数为3,阴性对照组细胞加入磷酸盐缓冲液5μL,余3组细胞分别加入相应抗体5 μL,流式细胞仪检测细胞表面抗原阳性情况.(2)取3个批次大鼠BMSC,均分为空白对照组、VEGF-C组、HGF组、bFGF组、VEGF-C+HGF组、VEGF-C+bFGF组、HGF+bFGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组,每组样本数为3.空白对照组细胞加入2 mL完全培养基,VEGF-C组细胞中加入2 mL完全培养基和10 μg/mL VEGF-C 10 μL,HGF组细胞加入2 mL完全培养基和10 μg/mL HGF 16 μL,bFGF组细胞加入2 mL完全培养基和1μg/mL bFGF 20 μL,VEGF-C+ HGF组、VEGF-C +bFGF组、HGF+ bFGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组细胞加入2 mL完全培养基及同前相应浓度和量的诱导因子.培养10d,倒置相差显微镜下观察细胞形态,蛋白质印迹法和实时荧光定量反转录PCR法分别检测淋巴管内皮透明质酸受体1(LYVE-1)、VEGF受体3(VEGFR3)及整合素α9蛋白和mRNA表达.(3)取大鼠BMSC,分为空白对照组、HGF+ VEGF-C+ bFGF组、bFGF+ VEGF-C+HGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组,每组样本数为3.空白对照组细胞加入2 mL完全培养基;HGF+VEGF-C +bFGF组细胞加入2 mL完全培养基、10 μg/mL HGF 16 μL、10 μg/mL VEGF-C 10μL,6h后加入1 μg/mL bFGF 20 μL.bFGF+VEGF-C+HGF组细胞加入2 mL完全培养基以及1μg/mLbFGF 20 μL和10 μg/mL VEGF-C 10 μL,6h后加入10 μg/mL HGF 16 μL;VEGF-C+ HGF+ bFGF组细胞同时加入2 mL完全培养基及同前浓度及量的3种诱导因子.另取2个批次大鼠BMSC,同前进行分组,除将HGF+ VEGF-C+ bFGF组、bFGF+ VEGF-C+ HGF组6h的间隔时间调整为12、24 h外,其余处理方法同前.培养10 d,蛋白质印迹法检测LYVE-1、VEGFR3及整合素α9的蛋白表达.对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD-t检验、Bonferroni校正. 结果 (1)阴性对照组、CD90组、CD44组、CD34组细胞表面抗原阳性表达率分别为0.39%、99.84%、99.90%、0.57%.(2)培养10 d,空白对照组、HGF组、bFGF组、HGF+ bFGF组细胞呈长梭形,其余各组细胞呈多边形.(3)培养10d,空白对照组、HGF组、bFGF组、HGF+ bFGF组细胞无LYVE-1、VEGFR3和整合素α9蛋白表达.培养10 d,VEGF-C+ HGF+ bFGF组细胞LYVE-1、VEGFR3和整合素α9的蛋白表达量均明显高于VEGF-C组(t=24.21、11.04、15.43,P细胞LYVE-1的蛋白表达量明显高于VEGF-C组(t=8.69、15.20,P细胞VEGFR3的蛋白表达量明显高于VEGF-C组及VEGF-C+HGF组(t=8.67、7.21,P细胞整合素α9的蛋白表达量明显高于VEGF-C组及VEGF-C+ bFGF组(t=8.80、8.83,P细胞均无LYVE-1、VEGFR3和整合素α9 mRNA表达.培养10d,VEGF-C组细胞LYVE-1、VEGFR3的mRNA表达量明显低于VEGF-C+ bFGF组、VEGF-C+ HGF+ bFGF组(tLYVE-1=6.22、18.01,tVEGFR3=8.49、15.34,P细胞LYVE-1、VEGFR3和整合素α9的mRNA表达量明显高于VEGF-C+ HG

关键词：间充质干细胞血管内皮生长因子C 肝细胞生长因子细胞分化碱性成纤维细胞生长因子淋巴管内皮细胞

淋巴管内皮细胞透明质酸受体1及CD44在子宫内膜癌组织中的表达及意义

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中华妇产科杂志 2009年第6期44卷 460-462页

作者：高莹纪新强孟晓瑜青岛大学医学院附属医院妇产科 266003

子宫内膜癌是妇科生殖系统三大恶性肿瘤之一，其发病率近年呈上升趋势，Ⅰ～Ⅱ期及Ⅲ期患者的5年总生存率分别为92％及65％。淋巴转移是子宫内膜癌预后较差的重要因素之一，因此，研究淋巴系统在肿瘤发展和转移中的作用意义重大。近年... 详细信息

子宫内膜癌是妇科生殖系统三大恶性肿瘤之一，其发病率近年呈上升趋势，Ⅰ～Ⅱ期及Ⅲ期患者的5年总生存率分别为92％及65％。淋巴转移是子宫内膜癌预后较差的重要因素之一，因此，研究淋巴系统在肿瘤发展和转移中的作用意义重大。近年来，随着淋巴管内皮细胞特异标志物——淋巴管内皮细胞透明质酸受体1（LYVE—1）的发现，使淋巴管的生成成为肿瘤研究的新热点。LYVE-1介导细胞外基质中的透明质酸酶通过淋巴管内皮而进入淋巴液，与CD44同源。本研究通过检测LYVE-1与CD44在子宫内膜癌组织中的表达，探讨肿瘤组织内淋巴管的生成及其与肿瘤转移的关系。

关键词：淋巴管内皮细胞子宫内膜癌透明质酸受体 CD44 癌组织受体1 LYVE-1 恶性肿瘤

口腔癌细胞诱导的淋巴管内皮细胞基因表达谱的变化

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华西口腔医学杂志 2009年第3期27卷 330-334页

作者：张壮张松涛韩波夏辉潘剑四川大学口腔疾病研究国家重点实验室四川成都610041 四川大学华西口腔医学院口腔颌面外科教研室四川成都610041

目的探讨在口腔癌细胞影响下淋巴管内皮细胞分子表型的变化。方法利用体外共培养模型,将淋巴管内皮细胞与口腔癌细胞进行共培养,模拟肿瘤中淋巴管内皮细胞的变化。应用Affymetrix U133Plus2.0基因芯片对肿瘤组织中淋巴管内皮细胞(TLEC)... 详细信息

目的探讨在口腔癌细胞影响下淋巴管内皮细胞分子表型的变化。方法利用体外共培养模型,将淋巴管内皮细胞与口腔癌细胞进行共培养,模拟肿瘤中淋巴管内皮细胞的变化。应用Affymetrix U133Plus2.0基因芯片对肿瘤组织中淋巴管内皮细胞(TLEC)与淋巴管内皮细胞(LEC)基因表达的差异进行了检测和比较。并对功能相似的表达差异基因进行分类。结果差异基因表达谱共发现了677个基因表达差异在1倍以上,其中在TLEC中表达上调的基因有384条,下调的基因有293条。这些基因与细胞黏附、凋亡、运动、发育及血管生成有关。同时这些基因还参与细胞的信号传导、免疫应答、细胞代谢等过程。结论LEC与TLEC在分子水平是有差别的。以此为基础,可以针对淋巴管内皮细胞进行靶向阻断,达到治疗口腔癌淋巴道转移的目的。

关键词：口腔癌淋巴管内皮细胞淋巴道转移基因芯片

淋巴管内皮细胞podoplanin表达的分子探针标记和体外MR成像研究

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淋巴管内皮细胞podoplanin表达的分子探针标记和体外MR成像研究

作者：张松第三军医大学

学位级别：硕士

目的通过对金磁微粒(GoldMag)物理化学及生物学特性的检测,研究GoldMag应用于磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)分子成像的可行性。以GoldMag为载体构建podoplanin靶向的分子探针(GoldMag-pod),探讨GoldMag-pod对淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cell, LEC)的特异性标记作用,以期为GoldMag-pod体内研究肿瘤淋巴管生成提供实验基础和理论依据。材料与方法分子探针的制备及理化性能评价:(1)以GoldMag为载体,采用“一步法”合成分子探针(GoldMag-pod或GoldMag-IgG),分子探针表面用牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)封闭非特异性结合位点;(2)分光光度计测量各样品在280 nm处的吸光值,计算GoldMag的抗体偶联效率及抗体载药量;(3)透射电子显微镜观察和测量USPIO、GoldMag、GoldMag-pod和GoldMag-IgG纳米微粒的形态和平均粒径;(4)Zeta激光粒度分析仪测量以上4种纳米微粒的Z-平均粒径和Zeta电位;(5)酶联免疫吸附剂测定(ELISA)法测定抗体(IgG抗体及抗podoplanin抗体)与GoldMag结合前后的免疫活性,评价GoldMag对抗体免疫活性的影响程度;(6)选择FSE T1WI、FSE T2WI和GRE T*WI成像序列,对系列浓度的USPIO、GoldMag、GoldMag-BSA纳米微粒进行MR扫描,研究纳米微粒的MR信号特点。 GoldMag-pod对LEC细胞的靶向标记及MR体外成像:(1)对人真皮原代淋巴管内皮细胞和人脐静脉血管内皮细胞培养和传代;(2)以系列浓度的GoldMag-pod体外标记LEC行普鲁士蓝染色,研究GoldMag-pod和LEC的阳性结合率与标记物浓度的关系;(3)对培养的LEC和VEC细胞行免疫荧光染色和免疫细胞化学染色,观察GoldMag-pod对LEC的特异性标记情况(;4)噻唑蓝(MTT)法检测系列浓度的GoldMag对LEC细胞活性的影响;(5)透射电镜观察GoldMag-pod在LEC细胞内的代谢情况;(6)对系列浓度的GoldMag孵育LEC溶液、GoldMag-pod标记LEC溶液、GoldMag-pod溶液和GoldMag溶液进行GRE T*WI成像,观察各组溶液的MR信号改变情况。结果分子探针的制备及理化性能评价:(1)GoldMag凭借其表面胶体金的非共价偶联作用,能将抗podoplanin抗体及IgG抗体成功吸附在其表面;(2)GoldMag-pod的抗体偶联效率和抗体载药量分别为52.94%和1 mg的GoldMag偶联79.41μg的抗podoplanin抗体;GoldMag-IgG的抗体偶联效率和抗体载药量分别为58.74%和1 mg的GoldMag偶联88.11μg的IgG抗体;(3)USPIO、GoldMag、GoldMag-pod和GoldMag-IgG纳米微粒均呈类圆形,其平均粒径分别为14.7±1.4,47.7±4.1,66.8±4.9和67.3±5.5 nm;(4)以上4种微粒的Z-平均粒径分别为17.4、49.9、70.2和72.5 nm;Zeta电位分别为10.1±4.1,13.7±5.6,-17.5±4.0和-16.1±3.9 mV;(5)抗podoplanin抗体与GoldMag结合后其免疫活性下降为原先的42.05%;IgG抗体免疫活性下降为原先的43.34%;(6)3种纳米微粒溶液的FSE T1WI信号强度改变不明显,FSE T2WI信号强度随纳米微粒铁浓度的增高而轻微降低,GRE T2*WI信号强度随纳米微粒铁浓度的增高而显著降低。 GoldMag-pod对LEC细胞的靶向标记及MR体外成像:(1)人真皮原代淋巴管内皮细胞和人脐静脉血管内皮细胞在体外培养环境中生长状态良好;(2)普鲁士蓝染色结果表明GoldMag-pod对LEC的阳性标记率随GoldMag-pod浓度的增高而增高(;3)免疫荧光染色和免疫细胞化学染色结果表明,GoldMag-pod能对LEC特异性标记,但与抗podoplanin抗体相比,其免疫活性较弱;(4)MTT法结果显示GoldMag对LEC细胞活性的影响很小;(5)透射电镜结果显示GoldMag-pod被LEC吞噬,存在于溶酶体内,细胞的形态功能没有明显改变;(6)系列浓度的GoldMag孵育LEC、GoldMag-pod标记LEC、GoldMag-pod和GoldMag溶液的GRE T*WI信号强度,随各组溶液浓度的增加而逐渐降低,其降低程度各组间比较依次增强。结论 GoldMag是一种核壳结构的双功能复合微粒,“一步法”能将抗体(抗podoplanin抗体或IgG抗体)

关键词：磁共振成像分子成像金磁微粒 podoplanin 淋巴管内皮细胞

淋巴道转移潜能及ANXA7对肝癌细胞共培养淋巴管内皮细胞的调控作用

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山东医药 2022年第28期62卷 1-6页

作者：王静文钱雪娇章明放唐建武天津市第一中心医院病理科天津300192 天津市第一中心医院呼吸科南开大学医学院大连医科大学基础医学院病理教研室

目的探讨淋巴道转移潜能及膜联蛋白A7(ANXA7)对肝癌细胞共培养淋巴管内皮细胞(LEC)的调控作用。方法将各肝癌细胞及LEC共培养,收集与F细胞(高淋巴道转移潜能)、P细胞(低淋巴道转移潜能)、F_(A7下调)细胞(ANXA7表达下调)、F_(无关序列)... 详细信息

目的探讨淋巴道转移潜能及膜联蛋白A7(ANXA7)对肝癌细胞共培养淋巴管内皮细胞(LEC)的调控作用。方法将各肝癌细胞及LEC共培养,收集与F细胞(高淋巴道转移潜能)、P细胞(低淋巴道转移潜能)、F_(A7下调)细胞(ANXA7表达下调)、F_(无关序列)细胞、P_(A7上调)细胞(ANXA7表达上调)、P_(空载体)细胞共培养的LEC(L-F_(共)、L-P_(共)、L-F_(A7下调共)、L-F_(无关序列共)、L-P_(A7上调共)、L-P_(空载体共)细胞)以及正常LEC用于实验。分别用实时定量PCR、Western blotting检测共培养LEC内淋巴管内皮相关分子(VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、NRP-2、PDPN、LYVE-1、SOX18)mRNA与蛋白表达。用细胞免疫荧光法检测共培养LEC内淋巴管内皮相关分子定位,用ELISA法检测细胞上清液VEGF-C、VEGF-D水平,用淋巴管成管实验测算淋巴管成管节点数和分支总长度。结果VEGF-C、VEGF-D、VEGFR-3、NRP-2、PDPN、LYVE-1、SOX18在mRNA和蛋白水平表达上,L-P_(共)、L-F_(共)细胞高于LEC(P均细胞高于L-P_(共)细胞(P均细胞相比,L-F_(A7下调共)细胞上述分子表达均低(P均细胞上述分子表达均高(P均细胞中VEGF-C、VEGFR-3、PDPN相对表达量与同类分子(VEGF-D、NRP-2及LYVE-1/SOX18)比较变化更显著(P均细胞质内表达;VEGFR-3/NRP-2主要在细胞膜表达,少量在细胞质表达;PDPN、LYVE-1主要在细胞质表达;SOX18主要在细胞核表达,少量于细胞质表达。ANXA7调控前,细胞上清液中VEGF-C、VEGF-D表达比较,L-F_(共)、L-P_(共)细胞高于LEC,L-F_(共)细胞高于L-P_(共)细胞(P均细胞上清液中VEGF-C相对表达量与同类分子(VEGF-D)比较变化更显著(P均细胞均多于LEC,L-F_(共)细胞多于L-P_(共)细胞(P均细胞少于L-F_(无关序列共)细胞(P均细胞多于L-P_(空载体共)细胞(P均淋巴道转移潜能和ANXA7表达上调,可促进与肝癌细胞共培养的LEC淋巴管内皮相关分子表达,提高淋巴管成管能力。

关键词：肝癌细胞淋巴管内皮细胞体外共培养淋巴道转移潜能膜联蛋白A7 淋巴管内皮相关分子淋巴管成管