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牙鲆淋巴囊肿病自愈过程中细胞因子的表达研究

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2010年第12期40卷 43-50页

作者：邢明青孙修勤郑风荣郑明刚洪旭光曲凌云吴谡琦中国海洋大学生命学院山东青岛266003 国家海洋局第一海洋研究所山东青岛266061

中国北方养殖牙鲆的淋巴囊肿病一般发生在水温较低的10~12月,之后随水温的升高肿瘤脱落、出现自愈现象。搞清自愈机理,是有效抑制和减少淋巴囊肿病的重要科学内容。本文研究了不同饲育水温下健康和患淋巴囊肿病牙鲆细胞因子的表达变化,... 详细信息

中国北方养殖牙鲆的淋巴囊肿病一般发生在水温较低的10~12月,之后随水温的升高肿瘤脱落、出现自愈现象。搞清自愈机理,是有效抑制和减少淋巴囊肿病的重要科学内容。本文研究了不同饲育水温下健康和患淋巴囊肿病牙鲆细胞因子的表达变化,初步探讨了细胞因子在肿瘤自愈中的作用。通过模拟养殖中的水温变化,采用荧光定量PCR（re-al-time fluorescence quantitative PCR）技术,检测了14,18,22和26℃下牙鲆肝、脾、头肾组织中6种细胞因子（白细胞介素1β（IL-1β）、Mx蛋白（Mx）、肿瘤坏死因子（TNF）、肿瘤坏死因子受体（TNFR）、趋化因子（IL-8）和趋化因子受体（IL-8R））表达变化。结果表明,患病牙鲆肝、脾、头肾组织中的IL-8、IL-8R、Mx、IL-1β、TNF和TNFR-1表达量随温度升高而显著升高;健康牙鲆上述细胞因子的表达基本未出现随温度升高而显著上升的现象。本试验结果响应了养殖水温升高肿瘤脱落的现象,提示上述细胞因子在淋巴囊肿病自愈过程中可能发挥了抗病毒作用。

关键词：淋巴囊肿病细胞因子温度自愈

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养殖牙鲆淋巴囊肿病病原的研究

病毒学报 2000年第3期16卷 223-226页

作者：徐洪涛朴春爱姜忠良王文兴中国科学院海洋研究所山东青岛266071 TAMU 国家海洋局第一海洋研究所山东青岛266003

近几年我国海水养殖鱼类发生病毒性传染病 ,病鱼鳍、鳃及体表皮肤出现乳头瘤样赘生物。将发病牙鲆(Paralichthysolivaceus) 表皮瘤组织进行超薄切片 ,电镜下在病变组织明显肥大的细胞胞浆内发现大量球状病毒 ,呈二十面体对称 ,具包膜 ,... 详细信息

近几年我国海水养殖鱼类发生病毒性传染病 ,病鱼鳍、鳃及体表皮肤出现乳头瘤样赘生物。将发病牙鲆(Paralichthysolivaceus) 表皮瘤组织进行超薄切片 ,电镜下在病变组织明显肥大的细胞胞浆内发现大量球状病毒 ,呈二十面体对称 ,具包膜 ,直径约 2 10nm。根据虹彩病毒主要衣壳蛋白 (majorcapsidprotein ,MCP)基因中间保守区序列设计简并引物 ,应用PCR方法从病变组织中扩增出长 6 36bp的片段。经DNA序列测定及同源性分析表明 ,该段核苷酸序列与欧洲分离的淋巴囊肿病病毒 1型 (lymphocysticdiseasevirustype 1,LCDV - 1)MCP基因相应序列有 77%的同源性 ,表明该病毒属虹彩病毒科 (Iridoviridae)淋巴囊肿病毒属 (Lymphocystivirus) ,但与欧洲分离株有一定差异。将该病毒暂命名为淋巴囊肿病病毒中国分离株 (lymphocystisdiseasevirus-Chineseisolate ,LCDV -cn)。

关键词：牙鲆虹彩病毒淋巴囊肿病 DNA序列测定

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牙鲆淋巴囊肿病的病理和病原分离

中国水产科学 2003年第2期10卷 117-120页

作者：宋晓玲黄倢杨冰史成银张立敬中国水产科学研究院黄海水产研究所中国水产科学研究院黄海水产研究所山东青岛266071

应用常规显微和亚显微技术观察和分析患淋巴囊肿病养殖牙鲆(Paralichthysolivaceus)的病理学变化,利用差速离心和蔗糖密度梯度离心技术分离其病原———淋巴囊肿病毒,并利用牙鲆鳃组织细胞系FG-9307为感染基质,观察淋巴囊肿病毒引起的... 详细信息

应用常规显微和亚显微技术观察和分析患淋巴囊肿病养殖牙鲆(Paralichthysolivaceus)的病理学变化,利用差速离心和蔗糖密度梯度离心技术分离其病原———淋巴囊肿病毒,并利用牙鲆鳃组织细胞系FG-9307为感染基质,观察淋巴囊肿病毒引起的细胞病理变化。结果表明,患病牙鲆的囊肿组织是一些淋巴囊肿细胞的集合体,这些囊肿细胞排列紧密,直径为10～100μm,细胞近圆形,细胞质内散布有大量的嗜碱性包涵体,且多数集中在细胞的边缘部分;囊肿细胞内含有大量病毒粒子,其衣壳外形呈六角或五角形,直径为150～230nm,大多数病毒粒子中央有一致密的核,核外周包围着一双层核衣壳,核衣壳的表面可见一圈把手样亚单位。以患病牙鲆囊肿物制备的上清液接种细胞,7d内未见细胞异常,经盲传2～3代后,细胞出现较明显的细胞病变效应。

关键词：牙鲆淋巴囊肿病病理病原分离

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云纹石斑鱼淋巴囊肿病病变过程的超微研究

海洋与湖沼 1997年第4期28卷 406-410页

作者：张永嘉郭青吴泽阳湛江水产学院养殖系湛江524025

于1989—1990年，对海水网箱养殖的云纹石斑鱼自然感染和人工感染的淋巴囊肿病进行电镜观察。观察结果表明，自然感染和人工感染的淋巴囊肿细胞之间并无区别，它们均含有许多包涵体和病毒颗粒；主要描述用患淋巴囊肿病病鱼的皮肤结节匀... 详细信息

于1989—1990年，对海水网箱养殖的云纹石斑鱼自然感染和人工感染的淋巴囊肿病进行电镜观察。观察结果表明，自然感染和人工感染的淋巴囊肿细胞之间并无区别，它们均含有许多包涵体和病毒颗粒；主要描述用患淋巴囊肿病病鱼的皮肤结节匀浆对实验鱼作皮下注射而感染的淋巴囊肿病的超微病理过程，包括病毒颗粒在成纤维细胞胞膜上的附着和成纤维细胞及其内含物的形态变化等过程；此外，病鱼心脏、肝脏、脾脏、肾脏和肠上皮也有不同程度的病理变化。

关键词：云纹石斑鱼淋巴囊肿病超微病理石斑鱼

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牙鲆淋巴囊肿病DNA疫苗的安全性研究

科学养鱼 2010年第9期32卷 55-57页

作者：张进兴郑风荣曲凌云郑明刚国家海洋局第一海洋研究所 266061

DNA疫苗（核酸疫苗）是利用现代免疫学、生物化学、分子生物学及生物信息学等生物技术研制而成的新型疫苗。核酸疫苗被导入宿主动物体内后,由体细胞摄取,并在细胞内表达病原体的蛋白质抗原,通过一系列的免疫反应刺激机体产生比较广泛的... 详细信息

DNA疫苗（核酸疫苗）是利用现代免疫学、生物化学、分子生物学及生物信息学等生物技术研制而成的新型疫苗。核酸疫苗被导入宿主动物体内后,由体细胞摄取,并在细胞内表达病原体的蛋白质抗原,通过一系列的免疫反应刺激机体产生比较广泛的细胞免疫和体液免疫。与传统的灭活疫苗、

关键词： DNA疫苗淋巴囊肿病安全性牙鲆核酸疫苗现代免疫学生物信息学分子生物学

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牙鲆淋巴囊肿病核酸疫苗的免疫效果评价

科学养鱼 2010年第6期32卷 48-49页

作者：张进兴郑风荣郑明刚曲凌云国家海洋局第一海洋研究所 266061

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA）直接导入动物体内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。动物实验证明，在合适的条件下，DNA接种后既能产... 详细信息

核酸疫苗是将编码某种抗原蛋白的外源基因（DNA或RNA）直接导入动物体内，并通过宿主细胞的表达系统合成抗原蛋白，诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答，以达到预防和治疗疾病的目的。动物实验证明，在合适的条件下，DNA接种后既能产生细胞免疫又能引起体液免疫，核酸疫苗可诱导机体产生全面的免疫应答，

关键词：核酸疫苗淋巴囊肿病免疫效果评价牙鲆抗原蛋白宿主细胞免疫应答

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牙鲆淋巴囊肿病的诊断技术研究

高技术通讯 2003年第1期13卷 89-94页

作者：孙修勤黄捷刘允坤曲凌云洪旭光张进兴国家海洋局第一海洋研究所青岛266061 水科院黄海所青岛266071

使用本实验室设计的PCR引物 ,在标记反应体系下 ,通过PCR反应合成了碱基数为 172bp的牙鲆 (Paralichthysolivaceus)囊肿病 (Lymphocystisdisease ,LCD)的地高辛标记探针。在其琼脂糖凝胶电泳图 172bp处有明显的亮带 ,由软件分析得出 ,... 详细信息

使用本实验室设计的PCR引物 ,在标记反应体系下 ,通过PCR反应合成了碱基数为 172bp的牙鲆 (Paralichthysolivaceus)囊肿病 (Lymphocystisdisease ,LCD)的地高辛标记探针。在其琼脂糖凝胶电泳图 172bp处有明显的亮带 ,由软件分析得出 ,合成探针的浓度为 5 0 0ng/ μl,此结果证明 ,该产物确是所需的探针 ,且具有很好的合成效率。通过实验证明本文采用的核酸探针杂交诊断方法可以有效地定性和定位LCDV。实验结果还提示 ,LCDV是通过血液在牙鲆体内传播的、并可能同时存在垂直和水平两种传播方式。

关键词：淋巴囊肿病诊断技术牙鲆 LCD 探针-杂交

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中药防治大菱鲆淋巴囊肿病的试验研究

科学养鱼 2014年第7期36卷 57-58页

作者：李文全辽宁葫芦岛市海洋与渔业科学研究所 125000

大菱鲆英文名为turbot,商品名叫多宝鱼,原产于法国、英国等欧洲国家的大西洋北部海域,为底栖冷水性鱼类,其性格温顺,体型优美,肌肉丰厚、白嫩、骨刺少、出肉率高,鳍边含有丰富的胶质蛋白、口感爽滑,是理想的保健和美容食品。自1992年中... 详细信息

大菱鲆英文名为turbot,商品名叫多宝鱼,原产于法国、英国等欧洲国家的大西洋北部海域,为底栖冷水性鱼类,其性格温顺,体型优美,肌肉丰厚、白嫩、骨刺少、出肉率高,鳍边含有丰富的胶质蛋白、口感爽滑,是理想的保健和美容食品。自1992年中国水产科学研究院黄海水产研究所雷霁霖教授把该鱼引入我国,雷教授带领的科研团队先后攻克了亲鱼培养、苗种繁育、成鱼养殖等技术环节,经过20多年的发展,目前我国大菱鲆养殖面积达到了400万米2,年产值近40亿元。

关键词：大菱鲆淋巴囊肿病中药防治中国水产科学研究院黄海水产研究所试验冷水性鱼类欧洲国家

牙鲆抗淋巴囊肿病相关微卫星标记的筛选及两种免疫相关基因的克隆与初步分析

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牙鲆抗淋巴囊肿病相关微卫星标记的筛选及两种免疫相关基因的克隆...

作者：范彩霞上海海洋大学

学位级别：硕士

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水养殖鱼类，经济价值较高，被广泛养殖。近年来，随着牙鲆养殖规模不断壮大，各种病害频繁发生。为了牙鲆养殖业的健康稳定发展，应采取传统育种与分子手段相结合的手段培育性能更好的新品... 详细信息

牙鲆(Paralichthys olivaceus)是我国重要的海水养殖鱼类，经济价值较高，被广泛养殖。近年来，随着牙鲆养殖规模不断壮大，各种病害频繁发生。为了牙鲆养殖业的健康稳定发展，应采取传统育种与分子手段相结合的手段培育性能更好的新品种。本文以牙鲆为材料，筛选出了与牙鲆抗淋巴囊肿病相关的微卫星标记，并对两种免疫相关基因进行了克隆及初步分析。得到了一以下结果:Ⅰ牙鲆抗淋巴囊肿病相关微卫星分子标记的筛选为了筛选出中国牙鲆群体的抗淋巴囊肿病相关SSR标记，采用分群分析法对102个牙鲆个体(感病56个，抗病46个)进行了抗淋巴囊肿病相关SSR标记的筛选。首先构建了抗、感基因池(抗病个体和感病个体各15个)，并利用178对微卫星引物对其进行了扫描;对于在抗、感池间扩增出差异条带的引物，用构成抗、感池的30个个体对其进行了第一次单个体验证;对于在第一次单个体验证中差异显著的引物用102个个体进行了第二次验证。结果显示，有4对引物(scaffold4402585、scaffold826003、scaffold703284和scaffold18597)在抗、感基因池间扩增出了差异条带;经第一次单个体验证，表明scaffold826003(P=0.023)和scaffold18597(P178bp=0.028，P173bp=0.009)的差异条带在抗、感个体中呈显著性差异;经第二次单个体验证，发现scaffold18597的差异条带在抗、感个体中出现的频率分别为60.9%和14.3%(P=0.001)，差异显著;对scaffold18597在10个抗病个体中扩出的差异条带进行了克隆并测序，经blast比对，证实其为黄海所水产基因组与细胞工程研究室公布的牙鲆微卫星标记scaffold18597中的一段，同源性达到96%。研究表明微卫星标记scaffold18597可能与牙鲆抗淋巴囊肿病相关，为中国牙鲆分子标记辅助育种提供了参考。 Ⅱ牙鲆免疫相关基因的克隆与初步分析选用补体相关基因C1q-like3和胞粘蛋白因子基因Cytohesin-1，采用cDNA末端快速扩增技术，对两个基因分别进行了克隆，并对其结构进行了分析。之后，对牙鲆C1q-like3基因进行了转录组水平的表达分析;并在牙鲆Cytohesin-1基因中筛查了单核苷酸多态性(SNP)位点。从而对两种免疫相关基因的功能与牙鲆抗病的关联性进行了分析。 1.C1ql3基因的克隆与表达分析补体系统是一种重要的免疫效应系统，在先天性免疫中起着非常重要的作用。补体相关分子广泛存在，并参与宿主的免疫应答。研究克隆了牙鲆C1q-like3基因(定义为PoC1ql3)。PoC1ql3的cDNA全长1482bp，包括4bp的5’UTR，801bp的编码区和677bp的3’UTR。801bp的开放阅读框编码266个氨基酸，与其基因组序列比对发现该基因含有两个外显子和一个内含子。同源比对和进化分析表明，牙鲆C1ql3基因与斑马鱼和罗非鱼亲缘关系很近。健康组织C1ql3的实时定量分析显示PoC1ql3在肝脏和脾脏中高表达，在血液和肌肉中很少表达，并在其他组织中低表达。鳗弧菌感染后，C1ql3在肝中的表达在6h达到最高峰，在脾中则在48h上升到最大值，分别是其PBS对照组的2.89和2.64倍。细菌的感染能显著增加PoC1ql3在免疫组织中的表达，这可能说明了C1ql3与牙鲆炎症反应和自我平衡功能相关。 ***-1基因的克隆与SNP检测 Cytohesin-1基因在小鼠、人类等物种的研究表明，其在机体中发挥免疫功能的作用，与免疫调节具有一定的相关性。研究通过基因克隆技术获得了牙鲆Cytohesin-1基因的cDNA全长序列1631bp，包括175bp的5’UTR，1203bp的开放阅读框和253bp的3’UTR。1203bp的开放阅读框共编码400个氨基酸。cDNA序列与基因组序列比对结果显示，牙鲆Cytohesin-1基因含有11个外显子和10个内含子。多氨基酸序列比对表明，该基因在各物种中较为保守，都含有Sec7结构域。进化分析显示，牙鲆Cytohesin-1基因与鲈鱼亲缘关系最近，并与其他鱼类聚为一支，与鸟类、哺乳类距离较远。采用牙鲆抗鳗弧菌病与感鳗弧菌病样本各30个，通过外显子直接测序法筛查相关SNP位点，发现外显子8多位点套峰，可能存在碱基的插入或缺失的情况，同时分别在外显子9、10和11筛查到了疑似SNP位点。筛查出的疑似SNP位点需通过进一步的验证，以确定SNP位点与疾病的关联性，以期指导育种实践。

关键词：牙鲆微卫星淋巴囊肿病基因克隆表达分析单核苷酸多态性