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山羊卵巢颗粒细胞差异表达基因消减文库的建立

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南京农业大学学报 2010年第6期33卷 95-100页

作者：庞训胜王子玉应诗家张艳丽闫益波吴勇聪孟立王锋南京农业大学羊业科学研究所江苏南京210095 安徽科技学院动物科学学院安徽凤阳233100

为了从单卵泡水平建立非闭锁大小卵泡颗粒细胞基因表达的消减文库,选择繁殖性能正常、空怀高繁殖力黄淮山羊2只,以氯前列烯醇处理40h后取卵巢,计数卵泡并测量卵泡直径,钝性分离采集卵泡颗粒细胞,置于液氮内保存,取样后的卵泡部分组织采... 详细信息

为了从单卵泡水平建立非闭锁大小卵泡颗粒细胞基因表达的消减文库,选择繁殖性能正常、空怀高繁殖力黄淮山羊2只,以氯前列烯醇处理40h后取卵巢,计数卵泡并测量卵泡直径,钝性分离采集卵泡颗粒细胞,置于液氮内保存,取样后的卵泡部分组织采用原位缺口末端标记法(TUNEL)进行闭锁鉴定。选择直径6和4mm非闭锁卵泡,提取颗粒细胞mRNA,扩增cDNA,监测抑制消减杂交及其文库构建的试验环节。结果表明:消减文库的阳性克隆测序成功率100%,从正向文库中随机挑取96个克隆进行差异表达的筛选,发现12个全新表达序列标签;应用RT-PCR对已知序列的抑制素βA亚基基因(INHBA)和谷胱甘肽S-转移酶A1基因(GSTA1)进行表达水平测定,证实了颗粒细胞2个基因mRNA的表达模式与差异显示的结果相同。表明消减文库构建成功。

关键词：山羊卵巢颗粒细胞基因表达消减文库

人肺腺癌细胞系维甲酸特异性cDNA消减文库的建立和鉴定

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中华医学杂志 1996年第7期76卷 542-544页

作者：黎伯铨张雪艳蔡岩王秀琴毛宝龄吴簇中国医学科学院中国协和医科大学肿瘤研究所细胞生物室第三军医大学新桥医院呼吸内科研究所

人肺腺癌细胞系维甲酸特异性ｃＤＮＡ消减文库的建立和鉴定黎伯铨张雪艳蔡岩王秀琴毛宝龄吴采用诱导分化与ｃＤＮＡ文库消减杂交（ｃＤＮＡｌｉ－ｂｒａｒｙｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）相结合的策略，建立了... 详细信息

人肺腺癌细胞系维甲酸特异性ｃＤＮＡ消减文库的建立和鉴定黎伯铨张雪艳蔡岩王秀琴毛宝龄吴采用诱导分化与ｃＤＮＡ文库消减杂交（ｃＤＮＡｌｉ－ｂｒａｒｙｓｕｂｔｒａｃｔｉｖｅｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ）相结合的策略，建立了人肺腺癌细胞系全反式维甲酸（ＲＡ）...

关键词：肺肿瘤细胞系维甲酸 cDNA 消减文库

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干旱胁迫下刚毛柽柳消减文库的构建及分析

植物研究 2005年第1期25卷 69-73页

作者：刘桂丰侯英杰王玉成褚延广北京林业大学生物科学与技术学院东北林业大学林学院哈尔滨150040 东北林业大学林学院

以干旱胁迫下的刚毛柽柳根部组织cDNA为tester,正常生长的刚毛柽柳根部组织cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术 (SSH)构建了干旱胁迫下刚毛柽柳根部组织的消减文库。文库克隆的重组率为 95 % ,插入片段大部分集中在 2 5 0～ 60 0bp之... 详细信息

以干旱胁迫下的刚毛柽柳根部组织cDNA为tester,正常生长的刚毛柽柳根部组织cDNA为driver,利用抑制性消减杂交技术 (SSH)构建了干旱胁迫下刚毛柽柳根部组织的消减文库。文库克隆的重组率为 95 % ,插入片段大部分集中在 2 5 0～ 60 0bp之间。通过对文库阳性克隆的随机测序 ,获得了如Mn SOD、myb相关蛋白、锌指蛋白等 1 7种与干旱胁迫相关的基因 ,它们涉及了植物的渗透调节、信号传递、转录调控、活性氧清除等方面。所得EST序列已被GenBank收录。

关键词：干旱胁迫刚毛柽柳消减文库抑制性消减杂交技术表达序列标签抗旱性抗旱基因

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辣椒育性恢复相关基因消减文库的质量分析

华北农学报 2009年第6期24卷 161-164页

作者：郭爽王雯杨文才沈火林中国农业大学农学与生物技术学院北京100193

本试验对构建的辣椒育性恢复相关基因的消减cDNA文库进行质量分析。通过对文库构建过程中的各个环节,包括总RNA的提取,mRNA的分离纯化,RasⅠ酶切,接头连接,消减效率检测以及菌落PCR等,进行分析和评估,证明利用抑制消减杂交技术(SSH)所... 详细信息

本试验对构建的辣椒育性恢复相关基因的消减cDNA文库进行质量分析。通过对文库构建过程中的各个环节,包括总RNA的提取,mRNA的分离纯化,RasⅠ酶切,接头连接,消减效率检测以及菌落PCR等,进行分析和评估,证明利用抑制消减杂交技术(SSH)所构建的消减文库是准确可靠的,富集了大量与辣椒育性恢复相关的基因,为进一步精确筛选、克隆、分析辣椒育性恢复相关基因奠定了基础。

关键词：辣椒恢复基因抑制消减杂交消减文库

巨型艾美球虫株间差异表达基因消减文库的构建和分析

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扬州大学学报（农业与生命科学版） 2009年第1期30卷 13-17页

作者：孙文瑶许金俊陶建平吴海清李金贵彭昊张艳姜慧婕扬州大学兽医学院江苏扬州225009

为分离鉴定巨型艾美球虫上海株与南通株间免疫原性的差异表达基因,分别以巨型艾美球虫上海株孢子囊cDNA为驱动组,以南通株孢子囊cDNA为试验组,或相反,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过2轮杂交和2次PCR分别构建了2个抑制性消减文库。随机... 详细信息

为分离鉴定巨型艾美球虫上海株与南通株间免疫原性的差异表达基因,分别以巨型艾美球虫上海株孢子囊cDNA为驱动组,以南通株孢子囊cDNA为试验组,或相反,利用抑制消减杂交(SSH)方法,通过2轮杂交和2次PCR分别构建了2个抑制性消减文库。随机从2个消减文库中分别挑取96个克隆产物,经PCR鉴定上海株和南通株孢子囊消减文库的重组率分别为91%和94%,差异基因片段大小为250～1 000 bp。从每个文库中随机挑取30个阳性克隆测序,并进行同源性比较分析,结果表明:从上海株cDNA消减文库中获得了19个单一有效序列,其中15个为未知序列;从南通株cDNA消减文库中获得了16个单一有效序列,其中13个为未知序列。这些结果将为分离巨型艾美球虫新功能基因和进一步探索球虫抗原变异相关的分子机理奠定基础。

关键词：巨型艾美球虫免疫原性相异株消减文库构建

甘蓝型油菜突变体Cr3529抑制性消减文库的构建

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四川大学学报（自然科学版） 2005年第5期42卷 1029-1032页

作者：刘阳王茂林邱峰周云涛赵云张帆四川大学生命科学学院成都610064 四川省种子管理站成都610041

应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建了甘蓝型幼叶黄化油菜突变体Cr3529和其野生型3529品系幼叶期的正、反向消减文库.经菌落PCR检测,正向消减文库的有效重组率为55.5%;反向消减文库的有效重组率为7... 详细信息

应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术构建了甘蓝型幼叶黄化油菜突变体Cr3529和其野生型3529品系幼叶期的正、反向消减文库.经菌落PCR检测,正向消减文库的有效重组率为55.5%;反向消减文库的有效重组率为76.5%.为进一步克隆消减文库中的差异表达基因和研究这些基因的功能奠定了基础.

关键词：抑制消减杂交消减文库菌落PCR

吉富罗非鱼YY超雄鱼和XY雄鱼消减文库的构建及差异基因分析

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西南农业学报 2014年第3期27卷 1314-1320页

作者：陈明罗洪林朱佳杰王瑞甘西罗永巨李莉萍广西水产科学研究院、广西水产遗传育种与健康养殖重点实验室广西南宁530021

以吉富罗非鱼YY超雄鱼和XY雄鱼的血液为试验材料,采用抑制性消减杂交技术（SSH）构建YY超雄罗非鱼和XY雄鱼的消减文库.采用PCR方法评价文库的质量后,通过DNA测序技术对204个克隆进行测序,经手动去除载体和引物序列后获得86条Contig,应用... 详细信息

以吉富罗非鱼YY超雄鱼和XY雄鱼的血液为试验材料,采用抑制性消减杂交技术（SSH）构建YY超雄罗非鱼和XY雄鱼的消减文库.采用PCR方法评价文库的质量后,通过DNA测序技术对204个克隆进行测序,经手动去除载体和引物序列后获得86条Contig,应用BLASTX和BioGPS程序对所获Contigs进行生物信息学分析.成功构建了吉富罗非鱼YY超雄鱼和XY雄鱼消减文库,文库库容量（CFU）为3860,库重组率为95％,所获得的DNA片段集中分布在400～ 650 bp之间.获得31条罗非鱼序列,19条非罗非鱼序列,36条序列未发现同源蛋白,可能为YY罗非鱼的新基因.对罗非鱼种属的25条差异序列进行BioGPS功能分类分析发现这些序列参与12个生物过程,可将其分为至少8个不同的分子功能群.所获序列中编码磷酸甘油酰基转移酶-4样蛋白和N-（-乙酰转移酶-10 X2同种型的基因可能与罗非鱼的性发生发育相关.进一步分析发现血红蛋白、促红细胞生成素受体样蛋白、热休克蛋白、谷光氨肽样蛋白和锌指蛋白Gfi-1B样蛋白可能在YY超雄罗非鱼抗环境温度和应激方面发挥重要作用.所构建的吉富罗非鱼YY超雄鱼和XY雄鱼消减文库质量较高,适合YY超雄罗非鱼与XY雄鱼差异基因的筛选,为今后开发YY超雄罗非鱼性别鉴定方法奠定了坚实基础.

关键词：吉富罗非鱼超雄鱼消减文库差异基因

内皮差异表达基因消减文库的构建及在创伤修复中的应用(英文)

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中国临床康复 2004年第5期8卷 972-973,T004页

作者：梁自文罗向东杨宗城解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所重庆市400038

目的:建立人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的消减cDNA文库。方法:提取培养人脐静脉内皮细胞内毒素刺激6h后mRNAs,反转录合成cDNA,与对照组间进行抑制消减杂交富集差异表达基因,亚克隆入T/A质粒并转化感受态大肠杆菌。结果:成... 详细信息

目的:建立人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后差异表达基因的消减cDNA文库。方法:提取培养人脐静脉内皮细胞内毒素刺激6h后mRNAs,反转录合成cDNA,与对照组间进行抑制消减杂交富集差异表达基因,亚克隆入T/A质粒并转化感受态大肠杆菌。结果:成功构建了人脐静脉内皮细胞内毒素刺激后上调和下调差异表达基因两个消减cDNA文库,为进一步筛选新的内皮细胞活化相关基因打下基础。结论:经抑制消减杂交建立的消减cDNA文库富集并均一化了内毒素刺激后不同丰度的差异表达基因,对深入理解内皮细胞活化机制及参与组织修复的过程具有重要意义。

关键词：血管内皮差异表达基因消减文库创伤修复遗传学

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PCR在消减文库构建中的应用

河南医科大学学报 2001年第2期36卷 165-166页

作者：殷智榕高冬玲陈奎生姜国忠张云汉河南医科大学第一附属医院病理科郑州450052 河南省肿瘤病理重点实验室郑州450052

目的 :消减文库构建过程中 ,用PCR技术快速筛选重组阳性克隆。方法 :将白色单菌落加入氨苄抗性LB培养液中 ,37℃摇振培养过夜 ,取细菌悬液作PCR模板。结果和结论 :以PCR方法筛查重组阳性克隆 ,可以简便快速鉴定重组阳性克隆 ,不需提取... 详细信息

目的 :消减文库构建过程中 ,用PCR技术快速筛选重组阳性克隆。方法 :将白色单菌落加入氨苄抗性LB培养液中 ,37℃摇振培养过夜 ,取细菌悬液作PCR模板。结果和结论 :以PCR方法筛查重组阳性克隆 ,可以简便快速鉴定重组阳性克隆 ,不需提取质粒。筛选重组阳性克隆可直接用细菌悬液作PCR模板 ,在消减文库构建时 ,能大大提高工作效率。

关键词： PCR 重组阳性克隆消减文库