检索结果-南通市图书馆

作者：余君彤暨南大学

学位级别：硕士

放线菌是海洋沉积物中最重要的细菌类型，分布广泛，种类繁多。海洋放线菌生活于苛刻特殊的海洋环境使其具备复杂独特的代谢途径，其次级代谢产物在结构类型以及生物活性等方面都很特殊而使放线菌成为最重要的药用微生物种群。浅蓝霉素a... 详细信息

放线菌是海洋沉积物中最重要的细菌类型，分布广泛，种类繁多。海洋放线菌生活于苛刻特殊的海洋环境使其具备复杂独特的代谢途径，其次级代谢产物在结构类型以及生物活性等方面都很特殊而使放线菌成为最重要的药用微生物种群。浅蓝霉素a（CaerulomycinsA）是从海洋蓝灰异壁放线菌（Actinoalloteichus cyanogriseus）中分离得到的次级代谢产物，具有较强的抗肿瘤抗真菌活性以及中度的抗细菌活性。台勾霉素B（Tiacumicin B）是由陆生放线菌指孢囊菌（Dactylosporangium aurantiacum subsp. hamdenensis）NRRL18085产生的18元环大环内酯类抗生素，可抑制由艰难梭菌（Clostridium difficile）引起的传染病。天然产物的生物合成大致可分为前体形成、骨架构建以及后修饰三部分。天然抗生素的合成过程，在基本骨架形成后，通常都会进行多步的后修饰改造。研究表明，代表性的后修饰酶包括甲基转移酶、P450氧化酶、酰基转移酶、糖基转移酶、卤化酶、氨基转移酶和磷酸化酶等等。这些后修饰反应大幅度地增加了天然产物的种类及其结构的多样性，是组合生物学重要研究手段。本文结合浅蓝霉素和台勾霉素生物合成的初步研究结果，探讨其后修饰作用及其发挥功能的相关酶类，为通过生物组合的方法设计和制造出新的具有更高应用价值的天然产物奠定了基础。为验证浅蓝霉素a合成中后修饰酶CrmM和台勾霉素B合成中后修饰酶TiaP1和TiaP2的功能，本研究分别对这三个基因进行了克隆。成功地克隆并构建了浅蓝霉素a生物合成基因簇中crmM基因，台勾霉素B生物合成基因簇中tiaP1和tiaP2基因组氨酸标签以及GST（谷胱甘肽S转移酶，glutathione S-transferase）标签的原核表达载体;实现了CrmM GST标签融合蛋白在*** BL21中的表达和纯化，以及TiaP1，TiaP2组氨酸标签融合蛋白在*** BL21中的表达和纯化;对CrmM的体外活性研究结果显示，CrmM具有第二个吡啶环4位O-甲基转移的功能，验证了CrmM为甲基转移酶，并对产物进行了质谱鉴定;通过生物转化验证了TiaP2可能发挥羟基化作用。

关键词：海洋放线菌浅蓝霉素a 台勾霉素B 甲基转移酶 P450氧化酶

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海洋来源放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6产浅蓝霉素a的发酵条件优化

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中国海洋药物 2014年第5期33卷 9-15页

作者：贾海健王聪王乂刘培培朱伟明中国海洋大学海洋药物教育部重点实验室医药学院山东青岛266003

目的对海洋来源放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6产浅蓝霉素a的发酵条件进行优化,提高浅蓝霉素a的产量。方法对培养基的组成、接种量、起始pH、盐度、发酵时间、前体浓度及大孔吸附树脂添加量等条件的研究,通过单因素... 详细信息

目的对海洋来源放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6产浅蓝霉素a的发酵条件进行优化,提高浅蓝霉素a的产量。方法对培养基的组成、接种量、起始pH、盐度、发酵时间、前体浓度及大孔吸附树脂添加量等条件的研究,通过单因素和正交试验,选择最优发酵条件;结果获得了浅蓝霉素a的最佳发酵条件,培养基组成(可溶性淀粉20g,甘油20g,蛋白胨20g,CaCO32g,2-吡啶甲酸400mg,XAD-16大孔吸附树脂50g,陈海水1L)、装液量150/500mL(体积分数)、5d种龄、3.3%盐度、起始pH=7.5、摇床(180r·min-1,28℃)发酵12d。结论以最佳发酵条件发酵,优化后的浅蓝霉素a的产量为优化前的7.0倍,达到610.5mg/L。

关键词：浅蓝霉素a 发酵优化海洋放线菌 Actinoalloteichus cyanogriseus

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新型免疫抑制剂浅蓝霉素a诱导肾损伤炎症的作用

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安徽医科大学学报 2023年第9期58卷 1429-1434页

作者：单润润庾聚涛谢嫚嫚罗秀峰谢春亚崔宗宇刘晓颖陈奇安徽医科大学生命科学学院合肥230032 安徽医科大学药学院合肥230032 安徽医科大学第二临床医学院合肥230032

目的探究高浓度浅蓝霉素a(Cae A)对人肾小管上皮细胞HK2的影响,并探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在此过程中发挥的作用。方法采用MTT法测定不同浓度的Cae A对HK2细胞活力的影响;采用实时定量PCR,Western blotting以及免疫... 详细信息

目的探究高浓度浅蓝霉素a(Cae A)对人肾小管上皮细胞HK2的影响,并探讨NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)在此过程中发挥的作用。方法采用MTT法测定不同浓度的Cae A对HK2细胞活力的影响;采用实时定量PCR,Western blotting以及免疫荧光法检测高浓度Cae A对肾损伤分子1(KIM-1)以及NLRP3表达情况的影响;同时用实时定量PCR方法,检测高浓度Cae A对白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素33(IL-33)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA表达情况;随后将HK2细胞分为对照组、高浓度Cae A组和高浓度Cae A加NLRP3抑制剂CY-09组,Western blotting检测KIM-1和NLRP3蛋白的表达变化。结果MTT的结果显示,高浓度Cae A可以抑制HK2细胞活力;实时定量PCR,Western blotting和免疫荧光实验表明,高浓度Cae A可以上调KIM-1和NLRP3的水平,以及IL-1β、IL-18、IL-33、MCP-1、TNF-α的mRNA表达水平,而CY-09能显著下调NLRP3和KIM-1的蛋白水平。结论高浓度的Cae A能明显抑制HK2细胞的活力,诱导HK2细胞发生损伤及炎症反应,有显著的肾毒性,而且该肾毒性是通过激活NLRP3通路来实现的。

关键词：浅蓝霉素a 细胞损伤细胞炎症药物肾毒性

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海洋来源放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6产浅蓝霉素a的发酵条件优化

海洋来源放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6产浅...

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作者：贾海健中国海洋大学

学位级别：硕士

本课题组对海洋来源放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6的次生代谢产物进行研究，发现主产物为浅蓝霉素a。并发现其有显著的抗肿瘤活性。浅蓝霉素a在1959年首先从蓝色链霉菌（Streptomyces caeruleus）中分离发现，并报... 详细信息

本课题组对海洋来源放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6的次生代谢产物进行研究，发现主产物为浅蓝霉素a。并发现其有显著的抗肿瘤活性。浅蓝霉素a在1959年首先从蓝色链霉菌（Streptomyces caeruleus）中分离发现，并报道了其具有抗真菌活性。最近研究表明，浅蓝霉素a也具有免疫抑制作用，而且相对于著名的免疫抑制剂环孢霉素A，浅蓝霉素a能更加有效的抑制白细胞的增殖。鉴于浅蓝霉素a有着新颖的二联吡啶的结构特征和较强的免疫抑制活性，现在美国的Nostrum药物公司正致力于将浅蓝霉素a开发为免疫抑制剂方面的新药。然而浅蓝霉素a的产量较低，为提高浅蓝霉素a的发酵产量，我们对放线菌Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6产浅蓝霉素a的发酵条件进行了初步的优化。本论文主要包括以下内容：1．浅蓝霉素a发酵条件的优化：本文对浅蓝霉素a产生菌Actinoalloteichuscyanogriseus WH1-2216-6的发酵条件（培养基的组成、接种量、pH值、盐度、培养时间、碳氮源的选择及用量、前体及大孔吸附树脂的添加量）进行优化，最终将浅蓝霉素a的发酵产量提高到619.9mg/L，基本达到工业化生产的要求，为浅蓝霉素a的进一步研究开发提供了原料保障。2.提取分离浅蓝霉素a的工艺优化：优化结果显示，利用最优的分离流程能够使浅蓝霉素a的分离提取效率达到98%。3.对发酵优化过程中Actinoalloteichus cyanogriseus WH1-2216-6次生代谢产物的初步分离：本文在对发酵优化过程中所得提取物进行初步的分离并鉴定，得到5个联吡啶类化合物。

关键词：浅蓝霉素a 发酵优化海洋放线菌分离工艺次生代谢产物

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氨基转移酶GrmG和人源SNX7蛋白的结构和功能研究

氨基转移酶GrmG和人源SNX7蛋白的结构和功能研究

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作者：冯站安徽大学

学位级别：硕士

(Ⅰ)CrmG是以5'-磷酸吡哆醛PLP为辅因子的转氨酶,属于Fold-type Ⅰ型天冬氨酸超家族酶类,参与浅蓝霉素a在体内的生化合成反应。据报道,浅蓝霉素a具有显著的免疫抑制剂的生物活性。CrmG基因位于海洋放线菌类异壁放线菌属蓝黑异壁放线菌WH... 详细信息

(Ⅰ)CrmG是以5'-磷酸吡哆醛PLP为辅因子的转氨酶,属于Fold-type Ⅰ型天冬氨酸超家族酶类,参与浅蓝霉素a在体内的生化合成反应。据报道,浅蓝霉素a具有显著的免疫抑制剂的生物活性。CrmG基因位于海洋放线菌类异壁放线菌属蓝黑异壁放线菌WH1-2216-6的基因序列,位于青蓝霉素A生物合成的基因簇中。CrmG蛋白全长有523个氨基酸残基,由PLP结合的大的结构域和C端酶催化结构的小域构成。为了了解该酶在体内的催化合成机制,我们对CrmG展开结构生物学研究。我们把该目的基因片段克隆到pET-28a载体上,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,经镍柱层析和分子筛层析纯化后得到纯度在95%以上的蛋白,动态光散射和Native-Page显示蛋白状态均一性良好。通过结晶和X-Ray衍射后我们解析了 CrmG的全长和CrmG与谷氨酸的复合物晶体结构,分辨率在2.3A和1.8A,都属于1222空间群,每个不对称单位含有一个蛋白分子,经PISA分析可得到两个同源二聚体之间相互作用形成了四聚体的结构。整体结构上类似于同家族蛋白的subclass Ⅱ。型构象。野生型蛋白CrmG结构和CrmG与谷氨酸复合物的结构没有发生大的构象变化,而在活性口袋部位的电子密度都不够完整,与前者比较,从Thr202到His208和Ser231到Va1249缺失。分析此结构可能缺失了 1个β-折叠和1-2个α-螺旋,此部分柔性较大,该段序列是否参与了该酶底物的特异性催化或参与该酶二聚体的形成还需要进一步对其PLP结合型的二聚体结构的解析。另外,我们发现该酶氨基酸序列在121-196位上有两个α-螺旋和256-266位的两个β-折叠构成向外伸展的尾巴状结构构象,比对同源家族蛋白序列发现该段序列极不保守,此结构类型在该家族酶类中首次发现,此区域远离活性口袋。酶活性位点定点突变实验证实,将Phe55突变成Gln后没有影响到该酶的活性,而Lys344与PLP的吡啶环上的醛基结合形成Schiff碱构象是该酶活性的基础,把它突变成Ala后酶活丧失,Va1317突变成Ala后,该酶也失去活性,推测可能是缬氨酸残基侧链起到稳定外部亚酰胺中间体的构象作用。(Ⅱ)Sorting nexin7(SNX7)蛋白是SNXs家族蛋白的一员,该家族蛋白在细胞内吞和内体分选运输过程中发挥重要调节作用。SNX7含有PX结构域和BAR结构域,属于SNX-PX-BAR亚家族蛋白。斑马鱼体内实验表明,SNX7是在肝脏中大量表达的抗凋亡蛋白,在胚胎肝脏早期的发育中发挥关键的调节作用。本实验为了从蛋白水平对SNX7的结构和功能进行研究,我们将编码人源SNX7PX-BAR(SNX7全长的一个片段,包含PX结构域序列和BAR结构域序列)的cDNA片段插入到表达载体p28a中,经过扩增后,再将重组质粒转化到大肠杆菌Rosseta2(DE3)中诱导表达,在IPTG诱导下可以得到分子量约为43kDa的融合蛋白。并用镍柱亲和层析、离子交换和分子筛层析对蛋白SNX7PX-BAR进行了纯化,得到纯度在95%以上的蛋白。Western-Blotting结果表明,经过纯化后获得了高纯度的SNX7PX-BAR蛋白。动态光散射实验显示SNX7PX-BAR蛋白均一性良好。磷脂结合实验表明,SNX7PX-BAR具有较为广泛的磷脂酰肌醇结合能力,与PtdIns(5)P、PtdIns(4,5)P2 和 PtdIns(3,4,5)P3 的结合能力相对较强,而与 PtdIns(4)P的结合能力较弱。到目前为止,还未得到SNX7PX-BAR蛋白的晶体,为了得到该蛋白的结构,相关工作还需进一步的开展。

关键词：氨基转移酶浅蓝霉素a 晶体结构 Sorting nexins7(SNX7) 可溶表达纯化磷脂结合检测

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甲基化在肽类抗生素生物合成中的意义

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生物学教学 2022年第6期47卷 4-6页

作者：苏爱珍王一涵薛永常大连工业大学生物工程学院大连116034

肽类抗生素是一类广泛存在于自然界各种生物中的活性肽,在肽合成酶的催化下通过非核糖体途径合成,并经过甲基化、酰化及环化反应等修饰成为具有活性的抗生素。其中,甲基化修饰影响肽类抗生素的抗菌活性与细菌耐药性。本文综述了肽类抗... 详细信息

肽类抗生素是一类广泛存在于自然界各种生物中的活性肽,在肽合成酶的催化下通过非核糖体途径合成,并经过甲基化、酰化及环化反应等修饰成为具有活性的抗生素。其中,甲基化修饰影响肽类抗生素的抗菌活性与细菌耐药性。本文综述了肽类抗生素生物合成的基本原理以及甲基化与去甲基化在改造红霉素、万古霉素、浅蓝霉素a中的作用,以期为肽类抗生素研究提供参考资料。

关键词：肽类抗生素甲基化红霉素A 万古霉素浅蓝霉素a

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