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浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡的实验研究

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实用口腔医学杂志 2003年第6期19卷 607-609页

作者：张晔郭传瑸俞光岩北京大学口腔医学院口腔颌面外科 100081

目的 :观察浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡作用 ,探讨浅蓝菌素抗癌的可能性。方法 :TCA 83细胞经浅蓝菌素 (10 μg/ml)处理 2 4h后 ,提取基因组DNA ,行DNA凝胶电泳。舌癌新鲜组织经浅蓝菌素(10 μg/ml)处理 2 4h后 ,行原位细胞凋... 详细信息

目的 :观察浅蓝菌素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡作用 ,探讨浅蓝菌素抗癌的可能性。方法 :TCA 83细胞经浅蓝菌素 (10 μg/ml)处理 2 4h后 ,提取基因组DNA ,行DNA凝胶电泳。舌癌新鲜组织经浅蓝菌素(10 μg/ml)处理 2 4h后 ,行原位细胞凋亡染色 (TUNEL)。结果 :DNA凝胶电泳得到典型的梯状DNA电泳图 ,TUNEL分析显示 ,浅蓝菌素处理组癌细胞凋亡率明显高于未经浅蓝菌素处理的癌细胞凋亡率 (P 浅蓝菌素诱导高分化鳞状细胞癌凋亡的作用更强。结论 :浅蓝菌素可直接诱导口腔鳞状细胞癌细胞发生凋亡 ,为脂肪酸合酶抑制剂的临床应用提供了直接的参考。

关键词：浅蓝菌素口腔鳞状细胞癌细胞凋亡实验癌细胞

浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3生长抑制的研究

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浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3生长抑制的研究

作者：业磊昆明医学院

学位级别：硕士

目的探讨脂肪酸合酶(FAS)的抑制剂浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3的生长抑制作用。方法 1.细胞培养：取人前列腺癌细胞株PC-3常规培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,培养箱内含5%CO2,湿度95%,温度37℃,每3-4天换液传代培养。待... 详细信息

目的探讨脂肪酸合酶(FAS)的抑制剂浅蓝菌素对前列腺癌细胞株PC-3的生长抑制作用。方法 1.细胞培养：取人前列腺癌细胞株PC-3常规培养于含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中,培养箱内含5%CO2,湿度95%,温度37℃,每3-4天换液传代培养。待细胞长至单层后,以0.25%胰蛋白酶消化贴壁细胞,选用对数生长期细胞用于实验。 2.用MTT比色法测定浅蓝菌素对PC-3细胞的光密度OD值,计算其抑制率。 3.通过流式细胞术(FCM)对细胞株的凋亡及细胞周期的变化进行检测。 4.用蛋白免疫印迹(Western blotting)法来检测浅蓝菌素对PC-3细胞中FAS蛋白水平表达的影响。结果 1.PC-3细胞在浅蓝菌素的作用下,细胞增殖被明显阻遏,并呈现出剂量效应关系,在加入浓度为2.5mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L的浅蓝菌素作用24h后,PC-3细胞24h的抑制率分别为(34.78±2.47)%、(46.76±3.18)%、(58.13±3.55)%、(65.31±2.81)%,与对照组相比较有统计学意义(P浅蓝菌素作用后,细胞凋亡增多,PC-3细胞在浅蓝菌素浓度5.0mg/L三个时间组(24h,48h,72h)的细胞凋亡率分别为28.29±1.88%、44.73±2.69%、61.25±1.43%;且G0/G1期细胞比例增加,S期和G2/M期细胞比例减少。 3.蛋白免疫印迹实验中,随着浅蓝菌素作用时间的延长,PC-3细胞中的FAS蛋白水平表达量明显减少,药物作用时间与细胞中蛋白水平表达量呈负相关。结论 1.浅蓝菌素能抑制人前列腺癌细胞PC-3的生长,且其抑制作用呈现时间依赖性和浓度依赖性。 2.浅蓝菌素能干扰人前列腺癌细胞PC-3的细胞周期,将其阻滞在G0/G1并诱导其凋亡。

关键词：脂肪酸合酶浅蓝菌素前列腺癌 PC-3

浅蓝菌素联合吉西他滨抑制人胰腺癌细胞株BXPC-3生长及机制的实验研究

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浅蓝菌素联合吉西他滨抑制人胰腺癌细胞株BXPC-3生长及机制的实验...

作者：许乐乐苏州大学

学位级别：硕士

第一部分浅蓝菌素对人胰腺癌细胞株BXPC-3的影响及机制目的：研究脂肪酸合酶（fatty acid synthane，FAS）抑制剂浅蓝菌素（Cerulenin，Cer）对胰腺癌BXPC-3细胞体外生长和凋亡的影响，并初步探讨可能的作用机制。方法：采用不... 详细信息

第一部分浅蓝菌素对人胰腺癌细胞株BXPC-3的影响及机制目的：研究脂肪酸合酶（fatty acid synthane，FAS）抑制剂浅蓝菌素（Cerulenin，Cer）对胰腺癌BXPC-3细胞体外生长和凋亡的影响，并初步探讨可能的作用机制。方法：采用不同浓度（0、2.5、5、10、20、40μg/ml）Cer处理胰腺癌细胞BXPC-3，细胞增殖与毒性检测法（CCK8）检测OD值，计算对照组和各实验组BXPC-3细胞的抑制率，并计算最适宜的Cer IC50;取Cer浓度为0、5、10、20μg/ml处理胰腺癌BXPC-3细胞后进行流式细胞术及AnnexinV/PI早期凋亡检测细胞凋亡率和细胞周期的变化;反转录聚合酶链反应（Reverse Transcription Polymerase ChainReaction，RT-PCR）检测FAS mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA表达水平的变化;免疫印迹法（Western Blot）检测细胞凋亡因子Bcl-2、Bax蛋白表达情况，酶测定法检测Caspase8、Caspase9、Caspase3活性。结果：（1）CCK8法显示Cer可明显抑制BXPC-3细胞的生长，并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强（P＜0.05）。（2）流式细胞术及AnnexinV/PI早期凋亡检测出BXPC-3细胞经Cer作用48小时后，细胞周期S期比例上升，从（5.18±0.25）%上升到（25.15±1.15）%，G2期细胞比例下降（P＜0.05）。细胞有明显凋亡，且以早期凋亡为主，在5μg/ml浓度下早期凋亡率为（11.67±0.65）%，10μg/ml浓度下为（29.1±1.31）%，而在20μg/ml浓度下为（48.8±1.23）%，与Cer浓度呈正相关。（3）RT-PCR检测FAS mRNA、Bcl-2mRNA、Bax mRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA表明BXPC-3细胞经Cer作用48小时后，FASmRNA、 Bcl-2mRNA的表达呈浓度依赖性下降，Bax mRNA、Caspase8mRNA、Caspase9mRNA、Caspase3mRNA呈浓度依赖性上升，各浓度组与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。（4） Western Blot结果显示Cer作用于BXPC-3细胞48h可使细胞中的Bcl-2蛋白表达下降，Bax蛋白表达升高，在Cer0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml浓度下Bcl-2/Bax比值分别为（4.29±0.15）、（1.82±0.02）、（1.01±0.08）、（0.38±0.05），差异具有统计学意义（P＜0.05）。（5）酶测定法检测Cer作用于BXPC-3细胞48h可使Caspase8、Caspase9、Caspase3的活性增加，且呈浓度依赖性（P＜0.05）。Cer5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml浓度组Caspase3活性分别为对照组的（1.75±0.31）、（3.27±0.01）、（4.96±0.02）倍;Caspase9活性分别为对照组的（1.40±0.4）、（2.12±0.06）、（3.39±0.02）倍;Caspase8活性分别为对照组的（1.26±0.07）、（1.86±0.11）、（2.5±0.02）倍。结论：Cer以时间、浓度依赖方式抑制胰腺癌BXPC-3细胞的生长，其机制可能是直接抑制肿瘤细胞增殖;阻滞细胞周期于S期;主要通过线粒体途径诱导细胞发生早期凋亡。第二部分浅蓝菌素联合吉西他滨对胰腺癌细胞BXPC-3的影响目的:探讨Cer联合吉西他滨（Gemcitabine，GEM）对胰腺癌细胞BXPC-3的协同抑制作用及机制。方法:以浓度为10μg/ml的Cer联合20μmol/L的GEM处理对数生长期的人胰腺癌BXPC-3细胞，应用CCK8法检测OD值，计算对照组和各实验组BXPC-3细胞的抑制率;AnnexinV/PI双染法检测BXPC-3细胞早期凋亡情况;RT-PCR半定量检测Bcl-2mRNA、Bax mRNA表达水平的变化，Western Blot检测细胞凋亡因子蛋白Bcl-2、Bax表达情况。结果: Cer和GEM都能有效地抑制人胰腺癌BXPC-3细胞增殖，二者联合作用后，具有协同效应;Cer组作用BXPC-3细胞48h时细胞早期凋亡为（31.37±1.04）%，GEM组为（38.33±0.75）%，联合组为（69.43±0.83）%，联合组晚期凋亡率也明显增加;细胞凋亡因子Bcl-2表达明显下降，促细胞凋亡因子Bax表达上升，各组与对照组及单药组与联合组相比均有统计学意义（P＜0.05）。

关键词：浅蓝菌素胰腺癌 Bcl-2 Bax Caspase8 Caspase9 Caspase3 吉西他滨协同效应凋亡

浅蓝菌素对前列腺癌细胞株LNCaP生长抑制的研究

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浅蓝菌素对前列腺癌细胞株LNCaP生长抑制的研究

作者：车帅昆明医学院

学位级别：硕士

目的：探讨浅蓝菌素能否抑制人前列腺癌细胞增殖和诱发凋亡及其可能的机制方法：采用四唑盐(MTT法),流式细胞术和蛋白质印迹等方法检测不同剂量及作用时间下浅蓝菌素对前列腺癌细胞株LNCaP增殖的抑制和诱导的细胞细胞凋亡以伴随的脂肪... 详细信息

目的：探讨浅蓝菌素能否抑制人前列腺癌细胞增殖和诱发凋亡及其可能的机制方法：采用四唑盐(MTT法),流式细胞术和蛋白质印迹等方法检测不同剂量及作用时间下浅蓝菌素对前列腺癌细胞株LNCaP增殖的抑制和诱导的细胞细胞凋亡以伴随的脂肪酸合酶蛋白表达的变化。结果：LNCaP细胞在浅蓝菌素作用下,细胞增殖被抑制,并且呈现剂量-效应依系。浅蓝菌素24小时浓度2.5mg/L-20 mg/L,增殖抑制率分别为：由(43.2±0.6到(65.8±2.12)%(P浅蓝菌素滞肿瘤细胞从G1期进入S期,同时伴有脂肪酸合酶的蛋白表达降低。结论：脂肪酸合酶抑制剂浅蓝菌素通过抑制LNCaP细胞中脂肪酸合酶的表达,细胞增殖并诱发细胞凋亡。

关键词：浅蓝菌素脂肪酸合酶前列腺癌细胞

浅蓝菌素抑制人骨肉瘤U2-OS细胞迁移和侵袭力的体外研究

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浅蓝菌素抑制人骨肉瘤U2-OS细胞迁移和侵袭力的体外研究

作者：王高南昌大学

学位级别：硕士

目的：探讨浅蓝菌素(Cerulenin)对人骨肉瘤U2-OS细胞体外侵袭、迁移力的影响。方法：采用不同浓度(0、1、5.0μg/mL)的脂肪酸合成酶(FASN)抑制剂浅蓝菌素(Cerulenin)处理U2-OS细胞,RT-PCR方法检验U2-OS细胞中FASN的mRNA表达水平。运用Tr... 详细信息

目的：探讨浅蓝菌素(Cerulenin)对人骨肉瘤U2-OS细胞体外侵袭、迁移力的影响。方法：采用不同浓度(0、1、5.0μg/mL)的脂肪酸合成酶(FASN)抑制剂浅蓝菌素(Cerulenin)处理U2-OS细胞,RT-PCR方法检验U2-OS细胞中FASN的mRNA表达水平。运用Transwell小室法检测U2-OS细胞的侵袭力,细胞划痕实验检测U2-OS细胞迁移能力。结果：RT-PCR的结果显示浅蓝菌素能明显下调骨肉瘤细胞中脂肪酸合成酶mRNA的表达。Transwell试验显示经浓度为0、1、5μg/mL浅蓝菌素作用24h后的骨肉瘤细胞侵袭至膜下的细胞个数分别为107.73±2.98、87.33±3.13、52.4±2.74(P浅蓝菌素处理能使细胞的迁移力下降。结论：浅蓝菌素通过下调FASNmRNA而有效的抑制人骨肉瘤U2-OS细胞的体外迁移和侵袭力。

关键词：浅蓝菌素骨肉瘤 U2-OS细胞迁移侵袭

浅蓝菌素阻遏骨肉瘤细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

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浅蓝菌素阻遏骨肉瘤细胞增殖及诱导凋亡的实验研究

作者：解志波南昌大学

学位级别：硕士

目的:探讨脂肪酸合成酶(FAS)抑制剂—浅蓝菌素(Cerulenin)能否阻遏人骨肉瘤细胞增殖与诱发凋亡。方法:采用人骨肉瘤细胞系U2-OS,在体外实验中应用细胞形态学观察及四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)观察FAS抑制剂浅蓝菌素对人骨肉瘤细胞U2-OS生... 详细信息

目的:探讨脂肪酸合成酶(FAS)抑制剂—浅蓝菌素(Cerulenin)能否阻遏人骨肉瘤细胞增殖与诱发凋亡。方法:采用人骨肉瘤细胞系U2-OS,在体外实验中应用细胞形态学观察及四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)观察FAS抑制剂浅蓝菌素对人骨肉瘤细胞U2-OS生长的抑制作用,并通过流式细胞仪(FCM)对细胞凋亡和细胞周期变化进行检测。结果:U2-OS细胞在浅蓝菌素作用下,细胞增殖被阻遏,并呈现剂量效应关系,2.5、5、10和20mg/L浅蓝菌素作用24h的抑制率分别为(18.58±2.49)%、(35.11±3.49)%、(56.60±3.53)%和(79.69±2.83)%,与对照组比较有显著差异(P＜0.05)。光镜下凋亡细胞典型形态改变为细胞皱缩,胞膜结构保持完整,胞核固缩,核碎裂,染色质浓缩边集,胞浆空泡化明显,细胞表面有较多浓缩的胞质突起。流式细胞仪显示浅蓝菌素可诱发骨肉瘤细胞发生凋亡并且此作用呈剂量、时间依赖趋势,U2-OS细胞经2.5、5、10、20mg/L浅蓝菌素作用24h的凋亡率分别为7.62±1.03%、22.95±3.12%、38.29±2.35%和51.49±1.76%,与对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05):U2-OS细胞经5mg/L浅蓝菌素作用24、48、72 h的凋亡率分别为(27.92±2.69)%、(45.27±3.25)%和(60.39±1.86)%,与其对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。流式细胞周期分析显示浅蓝菌素能阻滞肿瘤细胞从S期进入G/M期,并诱导其细胞凋亡,浅蓝菌素处理后24h的细胞S期比例明显增高、G/M期细胞比例明显减少,药物浓度为10mg/L时,S期细胞比例由对照组的(38.26±0.78)%升高至处理组的(47.95±0.64)%,G/M期细胞比例由对照组的(16.58±0.63)%减少至处理组的(1.59±0.27)%,与其对照组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)。结论:浅蓝菌素能阻遏骨肉瘤细胞增殖,其作用具有时间和剂量依赖性,并使细胞受阻于S期同时诱导细胞凋亡。有关浅蓝菌素诱导肿瘤细胞凋亡的确切机制尚待进一步研究。

关键词：骨肉瘤浅蓝菌素细胞凋亡脂肪酸合成酶复合物

浅蓝菌素联合表阿霉素对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖的抑制作用

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浅蓝菌素联合表阿霉素对人骨肉瘤细胞U2-OS增殖的抑制作用

作者：邹平安南昌大学

学位级别：硕士

目的：研究浅蓝菌素（Cerulenin）增强表阿霉素（Epirμbicin）对人骨肉瘤细胞（U2-OS）抑制作用,为提高临床肿瘤化疗的疗效提供实验基础。方法： 1.、MTT比色法检测(1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50（μg/ml）浅蓝菌... 详细信息

目的：研究浅蓝菌素（Cerulenin）增强表阿霉素（Epirμbicin）对人骨肉瘤细胞（U2-OS）抑制作用,为提高临床肿瘤化疗的疗效提供实验基础。方法： 1.、MTT比色法检测(1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、50（μg/ml）浅蓝菌素、（1μg/ml,2.5μg/ml,5μg/ml,10μg/ml,25μg/ml）表阿霉素及两者联合用药对人骨肉瘤细胞（U2-OS）的增殖抑制作用。金氏Q值评价联合用药效应。 2、流式细胞术检测各药物组对人骨肉瘤细胞（U2-OS）的凋亡情况并计算各组凋亡率。结果： 1、MTT结果显示表阿霉素及浅蓝菌素均对人骨肉瘤细胞（U2-OS）有抑制作用,且抑制程度呈剂量依赖性,其IC50分别为10.83μg/ml和26.88μg/ml。联合用药细胞抑制率明显增高,Q值分别为1.24 （1μg/ml表阿霉素+1μg/ml浅蓝菌素）和0.96（10μg/ml表阿霉素+20μg/ml浅蓝菌素）。 2、流式细胞仪检测细胞凋亡情况：表阿霉素及浅蓝菌素均可诱导人骨肉瘤细胞（U2-OS）发生凋亡,1μg/ml、5μg/ml、10μg/m表阿霉素处理细胞24小时后,其凋亡率分别为（17.27±2.34）%、（26.07±3.17）%、（31.54±1.33）%;1μg/ml、5μg/ml、20μg/ml。浅蓝菌素处理细胞24小时后,其凋亡率分别为（7.32±0.98）%、（11.17±1.22）%、（38.78±2.13）%。联合用药处理细胞24小时后,细胞凋亡率显著增加：1μg/ml表阿霉素+1μg/ml浅蓝菌素凋亡率为（26.94±1.65）%,Q值=1.17;10μg/ml表阿霉素+20μg/ml浅蓝菌素凋亡率为（66.19±3.97）%,Q值=1.14. 结论：浅蓝菌素及表阿霉素均可诱导U2-OS细胞发生凋亡,抑制增殖;浅蓝菌素能增强表阿霉素对人骨肉瘤细胞U2-OS的抑制效应。

关键词：浅蓝菌素表阿霉素 U2-OS细胞增殖抑制

脂肪酸合成酶抑制剂浅蓝菌素对裸鼠膀胱癌移植瘤生长抑制的作用

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中华实验外科杂志 2018年第6期35卷 1097-1099页

作者：仇世钦刘经纬孙旭杰朱永梁君峰高德荣郑帅帅姜波宋士强青岛市城阳区人民医院泌尿外科 266109 青岛市市立医院泌尿外科 266071

目的观察应用浅蓝菌素（Cer）抑制脂肪酸合成酶（FASN）对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立膀胱癌细胞5637裸鼠皮下移植瘤模型，将成瘤的20只小裸鼠随机分成阴性对照组、Cer治疗组，观察并记录两组裸鼠体重及移植瘤的体积的变化... 详细信息

目的观察应用浅蓝菌素（Cer）抑制脂肪酸合成酶（FASN）对人膀胱癌裸鼠移植瘤生长的影响。方法建立膀胱癌细胞5637裸鼠皮下移植瘤模型，将成瘤的20只小裸鼠随机分成阴性对照组、Cer治疗组，观察并记录两组裸鼠体重及移植瘤的体积的变化。免疫组织化学法检测各组裸鼠皮下移植瘤中细胞核增殖抗原（Ki-67）的表达；脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）法检测移植瘤组织的细胞凋亡水平。结果随机分组的裸鼠分别应用Cer和二甲基亚砜（DMSO）处理后体重变化差异无统计学意义；Cer治疗组裸鼠移植瘤的体积较DMSO对照组明显减小（P=0．023）；Ki-67的表达较对照组明显减少（P=0．034），Cer治疗组的细胞凋亡水平明显升高（P=0．026）。结论FASN抑制剂Cer可促进裸鼠膀胱癌移植瘤细胞的凋亡并且对移植瘤生长有明显的抑制作用。

关键词：脂肪酸合成酶浅蓝菌素膀胱癌细胞核增殖抗原凋亡裸鼠

浅蓝菌素脂质体的制备及其对肿瘤细胞体外增殖影响的研究

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广东药学院学报 2009年第2期25卷 126-130页

作者：付达华熊典虹朱亮漳州卫生职业学院药学系福建漳州363000 广东药学院药科学院广东广州510006

目的制备浅蓝菌素脂质体并研究其对HER2/neu(erbB-2)原癌基因过表达肿瘤细胞株体外增殖的影响。方法采用超声薄膜分散法制备浅蓝菌素脂质体;正交设计优化处方;HPLC法测定药物包封率及脂质体中药物浓度;离心加速实验及冷藏实验考察脂质... 详细信息

目的制备浅蓝菌素脂质体并研究其对HER2/neu(erbB-2)原癌基因过表达肿瘤细胞株体外增殖的影响。方法采用超声薄膜分散法制备浅蓝菌素脂质体;正交设计优化处方;HPLC法测定药物包封率及脂质体中药物浓度;离心加速实验及冷藏实验考察脂质体稳定性;活细胞计数法测定细胞生长曲线;MTT法测定游离浅蓝菌素及浅蓝菌素脂质体对细胞的增殖抑制作用。结果浅蓝菌素脂质体的平均粒径为134.3 nm,稳定性良好,最佳处方条件下药物包封率为(53.45±3.67)%,脂质体中药物质量浓度为(1.126±0.065)mg/mL,剂量依赖性抑制SK-B r3和SK-Ov3细胞的增殖,IC50分别为9.62和9.32μmol.L-1。结论该制备工艺和处方可行,所制备的浅蓝菌素脂质体对SK-B r3细胞和SK-Ov3细胞有明显的增殖抑制作用,且作用强于游离浅蓝菌素。

关键词：浅蓝菌素脂质体包封率肿瘤细胞 IC50