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黄花蒿HMGR启动子活性表达及核心序列分析

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中草药 2016年第19期47卷 3475-3480页

作者：龙金花向奕肖文军刘硕谦湖南农业大学国家植物功能成分利用工程技术研究中心湖南长沙410128 湖南省植物功能成分利用协同创新中心湖南长沙410128

目的分析研究黄花蒿3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)启动子的活性表达及其核心序列。方法以β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因作为报告基因,通过构建包括HMGR启动子全长序列在内的5个不同长度表达载体,并采用农杆菌介导法转化烟草以及对... 详细信息

目的分析研究黄花蒿3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGR)启动子的活性表达及其核心序列。方法以β-葡萄糖苷酸酶(GUS)基因作为报告基因,通过构建包括HMGR启动子全长序列在内的5个不同长度表达载体,并采用农杆菌介导法转化烟草以及对转化烟草进行GUS染色。结果转HMGR启动子烟草的根、茎、叶、花、果荚均发现蓝色;脱水和高温胁迫会降低该启动子的表达,低温胁迫对其影响不明显;启动子片段Aa GPX1、Aa GPX2和Aa GPX3具有驱动GUS报告基因表达的功能,而Aa GPX4和Aa GPX5则未有此功能。结论 HMGR启动子在烟草整个生长期内均能够稳定表达;该启动子对低温不敏感,而对高温和脱水条件敏感;该启动子的核心序列在P-HMGR-3区域,而Aa GPX2与Aa GPX3片段的非重叠区则存在与HMGR启动子活性强弱相关的调控元件。

关键词：黄花蒿青蒿素 HMGR启动子活性表达核心序列

大鼠甘氨肽α-羟化单氧酶在昆虫细胞中的活性表达

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病毒学报 1998年第3期14卷 246-252页

作者：江智红黄荣杨宇虹吴祥甫李伯良王德宝中国科学院上海生物化学研究所

将编码大鼠甘氨肽α－羟化单氧酶（ＰＨＭ）ｃＤＮＡ基因，插入昆虫杆状病毒转移表达载体ｐＢａｃＰＡＫ８，构建成表达质粒ｐＢａｃＰＨＭ２，与修饰的银纹夜蛾核多角体病毒ＢａｃＰＡＫ６线性化ＤＮＡ共转染秋粘虫细胞Ｓｆ２１，通过... 详细信息

将编码大鼠甘氨肽α－羟化单氧酶（ＰＨＭ）ｃＤＮＡ基因，插入昆虫杆状病毒转移表达载体ｐＢａｃＰＡＫ８，构建成表达质粒ｐＢａｃＰＨＭ２，与修饰的银纹夜蛾核多角体病毒ＢａｃＰＡＫ６线性化ＤＮＡ共转染秋粘虫细胞Ｓｆ２１，通过同源重组，得到在核多角体蛋白基因启动子控制下的ＰＨＭ基因的重组病毒ＢａｃＰＨＭ。用ＢａｃＰＨＭ感染Ｓｆ２１细胞，无血清培养上清在７２小时后检测到酰胺化酶最高活力；用细胞免疫组化法和免疫印迹法检测表达产物，胞内及胞外培养上清液中均显示有约４１ｋＤ的ＰＨＭ表达产物，胞内、胞外产量分别约为５μｇ／１０５细胞数、１μｇ／ｍｌ培养基／１０５细胞数，且分泌至培养基中的酶活力远高于胞内。

关键词：酰胺化核多角体病毒活性表达 PHM

逆境下转BADH基因小麦甜菜碱醛脱氢酶活性表达与甜菜碱积累

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华北农学报 2003年第F9期18卷 36-39页

作者：张艳敏丁占生温之雨蒋春志李辉霍云谦朱至清陈受宜郭北海河北省农林科学院遗传生理研究所河北省农科院粮油作物所中国科学院植物所中国科学院遗传发育研究所

对盐、旱逆境下转BADH基因小麦品系99T6的生长发育、甜菜碱醛脱氢酶活性及甜菜碱积累等进行了研究分析,结果表明,转BADH基因株系在盐逆境下具有明显的生长优势,耐盐能力达到100mmol/L;电导率和质膜相对透性表明转基因株系抗膜损伤能力增... 详细信息

对盐、旱逆境下转BADH基因小麦品系99T6的生长发育、甜菜碱醛脱氢酶活性及甜菜碱积累等进行了研究分析,结果表明,转BADH基因株系在盐逆境下具有明显的生长优势,耐盐能力达到100mmol/L;电导率和质膜相对透性表明转基因株系抗膜损伤能力增强;甜菜碱醛脱氢酶活性的增强和甜菜碱积累的增加,说明转基因株系的盐旱逆境抗性是通过甜菜碱积累这一长期、持久的方式解除渗透胁迫,而不是通过脯氨酸积累这种临时的应急反应;以甜菜碱作为靶标性状采用基因工程方法提高植物盐旱耐性是可行的。

关键词：转BADH基因小麦甜菜碱抗盐旱耐性醛脱氢酶活性表达胁迫条件

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木糖还原酶基因在大肠杆菌中活性表达

华侨大学学报（自然科学版） 2008年第3期29卷 383-386页

作者：王晓霞方柏山李雯君华侨大学工业生物技术福建省高等学校重点实验室福建泉州362021

利用聚合酶链式反应(PCR)方法,从休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)基因组DNA扩增得到了木糖还原酶(Xylose Reductase,XR)基因,并在大肠杆菌中活性表达.重组菌在诱导6 h时的XR表达量最大,约为总蛋白的20%.实验考察不同质量浓度的乳糖和... 详细信息

利用聚合酶链式反应(PCR)方法,从休哈塔假丝酵母(Candida shehatae)基因组DNA扩增得到了木糖还原酶(Xylose Reductase,XR)基因,并在大肠杆菌中活性表达.重组菌在诱导6 h时的XR表达量最大,约为总蛋白的20%.实验考察不同质量浓度的乳糖和异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)对酶活性的影响,结果表明,重组菌在以乳糖作为诱导剂时酶活最高为232.38μkat.g-1,以IPTG作为诱导剂时酶活最高为206.04μkat.g-1.

关键词：木糖还原酶乳糖诱导聚合酶链式反应大肠杆菌活性表达

乳腺癌患者端粒酶活性表达与c-Myc基因的相关性

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江苏医药 2006年第9期32卷 874-875页

作者：顾荣民俞乔赵祥生何晓松俞军江苏省肿瘤医院普通外科南京210009

人类端粒酶逆转录酶（hTERT）是新近克隆的端粒酶催化亚单位，是端粒酶活性的限速因素。在端粒酶活性呈阳性的肿瘤中常见hTERT的高表达。研究报道大多数乳腺癌中有端粒酶活性和hTERT的表达，但是其阳性定位和调控机制尚不清楚。本研究采... 详细信息

人类端粒酶逆转录酶（hTERT）是新近克隆的端粒酶催化亚单位，是端粒酶活性的限速因素。在端粒酶活性呈阳性的肿瘤中常见hTERT的高表达。研究报道大多数乳腺癌中有端粒酶活性和hTERT的表达，但是其阳性定位和调控机制尚不清楚。本研究采用PCR-ELISA法检测端粒酶的活性和RT-PCR检测端粒酶逆转录酶mRNA的表达．流式细胞术检测c-Myc蛋白的表达。探讨乳腺癌中hTERT表达的意义及其与癌基因c-Myc的关系.

关键词：端粒酶催化亚单位乳腺癌患者活性表达 c-Myc基因端粒酶逆转录酶mRNA 相关性人类端粒酶逆转录酶 RT-PCR检测

谷氨酰胺转氨酶在Yarrowia lipolytica中的活性表达

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生物学杂志 2019年第1期36卷 11-15页

作者：任蕊蕊刘松李江华堵国成陈坚江南大学生物工程学院无锡214122 江南大学工业生物技术教育部重点实验室无锡214122

谷氨酰胺转氨酶(EC2. 3. 2. 13,Transglutaminase,TGase)是一种重要的食品酶。基于N-端酶原区对折叠的重要影响,TGase通常以无活性的酶原(pro-TGase)形式在异源宿主中表达。以茂源链霉菌(Streptomyces mobaraensis) pro-TGase为基因来源,重组解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica po1h)为研究对象,通过在pro-TGase插入宿主Kex2蛋白酶识别位点(策略1)和共表达pro-TGase与谷氨酰胺转氨酶激活金属蛋白酶(TAMEP,策略2),使proTGase在Y. lipolytica中表达后被切除酶原区,而直接转化为活性TGase。摇瓶发酵结果显示,策略1和策略2构建得到的重组菌的TGase活力分别为5. 26 U/m L和6. 77 U/m L。酶学性质研究表明,策略1和策略2得到的重组菌的TGase比酶活、Km及kcat/Km均明显优于S. mobaraensis TGase。基于Y. lipolytica食品安全性,研究结果为TGase的工业化生产提供了新型高产菌种。

关键词：谷氨酰胺转氨酶 Yarrowia lipolytica 活性表达蛋白酶识别位点活化蛋白酶

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基于开放建筑理论的建筑灵活性表达

城市住宅 2016年第6期23卷 32-36页

作者：黄杰周静敏同济大学建筑与城市规划学院高密度人居环境生态与节能教育部重点实验室

开放建筑体系作为建筑设计的一种新思路,灵活可变的功能及相关构件可以延长建筑的生命周期,提高绿色可持续性能。本文研究分析了开放建筑体系的特征,并基于开放建筑理论,提出建筑灵活性在新建建筑、改造建筑和历史保护建筑中的不同体现... 详细信息

开放建筑体系作为建筑设计的一种新思路,灵活可变的功能及相关构件可以延长建筑的生命周期,提高绿色可持续性能。本文研究分析了开放建筑体系的特征,并基于开放建筑理论,提出建筑灵活性在新建建筑、改造建筑和历史保护建筑中的不同体现,以期对相关项目实践特别是绿色住区的建设与发展提供理论参考。

关键词：建筑理论活性表达历史保护建筑建筑体系建筑设计生命周期新建建筑

鼻咽癌中医辨证分型与预后相关性基因活性表达关系的初步研究

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中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2005年第1期13卷 1-3页

作者：刘书静田道法李东芳湖南中医学院长沙410007 湖南省肿瘤医院

目的探讨鼻咽癌辨证分型与其原发灶癌组织中预后相关性基因活性表达的关系及其对患者预后的意义。方法对60例初诊鼻咽癌患者进行辨证分型,并检测其鼻咽活检标本nm23-H1、VEGF(voscular endoth-elial growth factor,血管内皮生长因子)... 详细信息

目的探讨鼻咽癌辨证分型与其原发灶癌组织中预后相关性基因活性表达的关系及其对患者预后的意义。方法对60例初诊鼻咽癌患者进行辨证分型,并检测其鼻咽活检标本nm23-H1、VEGF(voscular endoth-elial growth factor,血管内皮生长因子)基因表达活性,并于治疗后随访5年,分析其预后相关性。结果辨证分型结果,气阴两虚型患者30例(50.0％),气血凝结型18例(30.0％),火毒困结型12例(20.0％)。气阴两虚型组鼻咽活检标本的nm23基因表达阳性率50.0％,VEGF基因表达阳性率70.0％,分别明显低于或高于其他两组(P活性表达下调,vEGF活性表达上调,预后不良。

关键词：鼻咽癌患者活性表达预后相关性气阴两虚型初诊标本初步研究 VEGF基因

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乳腺癌组织的端粒酶活性表达的研究

四川省卫生管理干部学院学报 2001年第3期20卷 168-169页

作者：刘玮陈平四川省卫生管理干部学院附院四川成都610041 四川省人民医院四川成都610072

目的 :研究乳腺癌组织端粒酶活性的表达 ,探讨端粒酶活性在恶性肿瘤诊断和病情进展中的意义。方法 :采用改良TRAP -银染法检测 30例乳腺癌端粒酶活性并以 30例癌旁组织作对照。结果 :30例乳腺癌组织 ( 86.67% )表达阳性 ,其中 18例术前... 详细信息

目的 :研究乳腺癌组织端粒酶活性的表达 ,探讨端粒酶活性在恶性肿瘤诊断和病情进展中的意义。方法 :采用改良TRAP -银染法检测 30例乳腺癌端粒酶活性并以 30例癌旁组织作对照。结果 :30例乳腺癌组织 ( 86.67% )表达阳性 ,其中 18例术前针吸活检组织 ( 83.33% )表达阳性 ,而癌旁组织 ( 13% )表达阳性 ,两组间比较有统计学差异 (P 活性见于绝大多数乳腺癌 ,可能在乳腺癌的发生发展中起重要作用。

关键词：乳腺癌端粒酶活性表达诊断