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布鲁氏菌侵染抑制剂的合成改造及活性研究

包头医学院学报 2024年第5期40卷 1-5,11页

作者：吕雅楠多奕仑赵嘉玮董志强郭叶内蒙古科技大学包头医学院药学院内蒙古包头014040 内蒙古科技大学包头医学院内蒙古科技大学包头医学院第一附属医院

目的:研究一种新型抗布鲁氏菌的药物,以求布鲁氏菌病的功能性治愈。方法:通过多肽固相合成法(solid phase peptide synthesis,SPPS)和在液相中进行化学反应等操作,根据布鲁氏菌侵染抑制剂OP11线性肽结构合成改造了三个环肽,即环OP11肽... 详细信息

目的:研究一种新型抗布鲁氏菌的药物,以求布鲁氏菌病的功能性治愈。方法:通过多肽固相合成法(solid phase peptide synthesis,SPPS)和在液相中进行化学反应等操作,根据布鲁氏菌侵染抑制剂OP11线性肽结构合成改造了三个环肽,即环OP11肽、三氮唑丁肽和三氮唑戊肽。通过二硫苏糖醇(dithiothreitol,DTT)测试了目标多肽的稳定性,并使用绵羊布鲁氏菌测定多肽的抗菌活性。结果:使用绵羊布鲁氏菌测试了目标肽的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),测试结果显示,线性OP11肽、环OP11肽、三氮唑丁肽和三氮唑戊肽的MIC值分别为1.281、0.043、0.059、0.052μg/mL。在DTT存在下,环OP11肽中的二硫键可发生还原反应,其半衰期为8 h,而三氮唑丁肽和三氮唑戊肽对DTT稳定。结论:经改造得到的环OP11肽对绵羊布鲁氏菌抑制作用最强,含三氮唑环的丁肽和戊肽的抗菌活性仅次于含有二硫键的环OP11肽。此外,含有三氮唑环的多肽较含有二硫键的多肽化学性质更为稳定。

关键词：布鲁氏菌多肽固相合成二硫苏糖醇活性研究

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鱼鳔氨基酸组成分析及抗氧化活性研究

粮食与食品工业 2024年第2期31卷 28-32页

作者：高思惠马玉芯刘秀军夏广清郭鑫通化师范学院医药学院通化134000 云启供应链数据服务(吉林)有限公司通化134001 通化师范学院长白山生物种质资源研究院通化134000 长白山生物种质资源评价及应用研究通化134000

以鱼鳔为研究对象,采用氨基酸自动分析仪器对鱼鳔蛋白及其多肽的氨基酸种类和含量进行测定并分析。结果表明:鱼鳔蛋白及其多肽均含有16种氨基酸,鱼鳔蛋白总氨基酸含量为92043.85 ng/mg,鱼鳔胰蛋白酶酶解多肽总氨基酸含量为79402.03 ng/... 详细信息

以鱼鳔为研究对象,采用氨基酸自动分析仪器对鱼鳔蛋白及其多肽的氨基酸种类和含量进行测定并分析。结果表明:鱼鳔蛋白及其多肽均含有16种氨基酸,鱼鳔蛋白总氨基酸含量为92043.85 ng/mg,鱼鳔胰蛋白酶酶解多肽总氨基酸含量为79402.03 ng/mg,鱼鳔碱性蛋白酶酶解多肽总氨基酸含量为71978.95 ng/mg,鱼鳔胃蛋白酶酶解多肽总氨基酸含量为335053.03 ng/mg。随后以鱼鳔蛋白为研究对象,对鱼鳔蛋白进行体外和体内抗氧化实验研究。鱼鳔蛋白对NO、羟基自由基有清除能力,对亚铁离子以及铜离子有螯合能力;体内对氧化损伤线虫的存活率的影响在一定范围内均随蛋白浓度的增加而增强,表现出较好的抗氧化能力。

关键词：鱼鳔氨基酸抗氧化活性研究

裸花紫珠乙酸乙酯部位人工胃肠液处理前后化学成分及抗EV71活性研究

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中华中医药杂志 2022年第5期37卷 2769-2773页

作者：杨颖邵骏菁温柔李忠原田景振侯林山东中医药大学药学院济南250355 山东中医药大学青岛中医药科学院青岛266000

目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯部位人工胃肠液处理前后化学成分变化及抗EV71活性,初步筛选其抗EV71的活性成分。方法:采用HPLC对裸花紫珠乙酸乙酯部位的成分进行定性定量分析并建立HPLC图谱;采用体外模拟人工胃肠液模型研究成分代谢的规律... 详细信息

目的:研究裸花紫珠乙酸乙酯部位人工胃肠液处理前后化学成分变化及抗EV71活性,初步筛选其抗EV71的活性成分。方法:采用HPLC对裸花紫珠乙酸乙酯部位的成分进行定性定量分析并建立HPLC图谱;采用体外模拟人工胃肠液模型研究成分代谢的规律并利用EV71体外感染模型研究裸花紫珠的抗EV71活性。结果:建立了木犀草素等7种化学成分的含量测定方法;经人工胃肠液处理前后木犀草苷的含量分别为(0.9033±0.0150)和(0.7572±0.0210)mg/g;木犀草素的含量分别为(0.7067±0.0047)和(0.8953±0.0180)mg/g;金圣草(黄)素的含量分别为(0.0055±0.0006)和(0.0064±0.0003)m g/g;咖啡酸的含量分别为(0.2747±0.0059)和(0.7679±0.0120)m g/g;裸花紫珠乙酸乙酯部位和胃肠液处理物的抗EV71的TI值分别为8.1和15.6。金圣草(黄)素、木犀草素和咖啡酸抗EV71的TI值分别为>102.0、14.6和15.0。结论:经胃肠液处理后,木犀草苷等苷类成分含量降低,木犀草素等苷元类成分含量增加,胃肠液处理物相对于裸花紫珠乙酸乙酯部位抗EV71的EC50降低、TI值增加,木犀草素、金圣草(黄)素和咖啡酸可能为裸花紫珠抗EV71的活性成分。

关键词：裸花紫珠人工胃肠液含量测定活性研究 EV71 木犀草素金圣草(黄)素咖啡酸

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榆荚仁多糖的提取及活性的研究

榆荚仁多糖的提取及活性的研究

作者：张洪航长春工业大学

学位级别：硕士

榆荚仁,别名榆树钱,是榆树的种子,分布于东北、华北、西北、华东、中南、西南及西藏等地。《医林纂要》中称榆荚,圆薄如钱,嫩者可食。榆荚仁中含有大量的多糖、氨基酸、脂肪酸等,具有很高的研究价值。在我国,榆荚仁资源非常丰富,但目前... 详细信息

榆荚仁,别名榆树钱,是榆树的种子,分布于东北、华北、西北、华东、中南、西南及西藏等地。《医林纂要》中称榆荚,圆薄如钱,嫩者可食。榆荚仁中含有大量的多糖、氨基酸、脂肪酸等,具有很高的研究价值。在我国,榆荚仁资源非常丰富,但目前有关榆荚仁多糖的研究非常少。因此,本课题主要对榆荚仁多糖的提取工艺、分级纯化、和其结构进行了研究分析,并通过体外实验研究了榆荚仁多糖的生物活性。具体研究内容如下:采用水提醇沉方法提取榆荚仁多糖(UPFP),对榆荚仁多糖提取时的液料比、提取温度、提取时间和提取次数四个因素进行考察,并应用响应面实验优化了榆荚仁多糖提取工艺参数,最佳提取工艺为:液料比为1:22,提取温度为82℃,提取时间为4 h,提取次数为3次,此时多糖得率为7.46%。并采用Sevage法去除榆荚仁多糖中的蛋白质,使用该方法去除6次后,多糖损失率为1.34%,蛋白去除率可达96.89%。采用DEAE-纤维素离子交换柱层析和CL-6B琼脂糖凝胶柱层析对得到的榆荚仁粗多糖进行分级精制。先通过DEAE-纤维素纯化分级后得到3个级分,UPFP-1、UPFP-2、UPFP-3,通过硫酸苯酚法测得总糖含量,间羟基联苯法测得各级分中糖醛酸含量,其中UPFP-2、UPFP-3中含有糖醛酸,将两个含糖醛酸级分通过CL-6B琼脂糖凝胶柱层析得到UPFP-2-1、UPFP-3-1两个级分,经总糖和糖醛酸含量检测,两个级分均含有糖醛酸。使用高效液相色谱法分析精制分级后的各级分多糖的单糖组成,其中:UPFP-2-1的单糖组成为葡萄糖、核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、半乳糖醛酸,其比例分别为45.53:23.77:19.76:2.84:3.25:4.84;UPFP-3-1的单糖组成为葡萄糖、核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、氨基半乳糖、半乳糖醛酸,其比例分别为41.13:21.17:18.22:4.16:5.21:5.72:4.39;将精制分级后的两个级分UPFP-2-1和UPFP-3-1进行分子量检测,测得分子量分别为426788和831206。将精制分级后的榆荚仁多糖UPFP-2-1和UPFP-3-1两个级分进行紫外全波长扫描,在190 nm附近有最大吸收峰,符合多糖的特征吸收峰,且其他波长几乎无杂峰,证明分级纯化效果良好,并对这两个级分进行红外全波长扫描,结果表明具有多糖的吸收峰,榆荚仁多糖为吡喃多糖。通过测定榆荚仁多糖的总抗氧化能力、清除DPPH自由基的能力、清除·OH自由基的能力以及清除超氧阴离子(O-·)自由基的能力研究其体外抗氧化功能;测定榆荚仁多糖对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力研究其体外降血糖功能;测定榆荚仁多糖与胆酸盐结合能力研究其体外降血脂能力,结果表明榆荚仁多糖具有良好的抗氧化能力和降血糖能力,同时也具有一定的降血脂功能。

关键词：榆荚仁多糖提取纯化分级精制单糖组分活性研究

天然产物Des-D及其类似物的合成与抗HIV活性研究

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天然产物Des-D及其类似物的合成与抗HIV活性研究

作者：员彤彤西北大学

学位级别：硕士

近年来艾滋病(AIDS,病原体为HIV)已经逐渐变成一种可控的慢性疾病,但患者始终无法彻底痊愈。目前药物治疗HIV会产生一定的耐药性,所以研发高效低毒抗HIV的药物一直是众多药物学家们的研究热点。2005年,吴久鸿等人从国内植物毛叶假鹰爪(D... 详细信息

近年来艾滋病(AIDS,病原体为HIV)已经逐渐变成一种可控的慢性疾病,但患者始终无法彻底痊愈。目前药物治疗HIV会产生一定的耐药性,所以研发高效低毒抗HIV的药物一直是众多药物学家们的研究热点。2005年,吴久鸿等人从国内植物毛叶假鹰爪(Desmos dumosus)中分离得到了一种β-位羟基取代的查尔酮类天然产物Desmosdumotin D(以下简称Des-D),药理结果显示其具有高效的抗HIV活性。由于它在植物中的含量太低,这严重限制了其后续的生物活性研究。本论文通过化学合成的手段完成了天然产物Des-D的制备,再对其进行分子结构改造,合成了系列Des-D类似物,并对其进行了抗HIV活性评价。具体工作如下:(1)参照K.Nakagawa-Goto博士的Des-D全合成路线,我们从提高产率、降低操作难度、降低成本等角度出发优化整条路线,总收率则由4.4%提高至5.4%。改进的部分包括:在醛中的羰基还原成亚甲基的步骤中将不易储存的还原剂Na BHCN改为Zn粉后,产率从53.0%提高至86.4%;个别中间体可在甲醇中重结晶,简化分离纯化操作;在引入苯甲酰氧基的步骤中,不影响下一步反应的前提下采用双酰化产物代替原中间体单酰化产物,产率由55.3%提高至73.0%;在Baker-Venkataraman重排中,室温下选用溶剂DMSO与碱t-Bu OK,可解决纯化困难的问题。最终得到的产物Des-D是烯醇与双酮共存(摩尔比为2:1)的互逆异构体。(2)在合成Des-D类似物的研究中,首先是对A环的修饰,选用廉价且方便获取的原料2,6-二羟基苯乙酮和全合成中间体为底物探索Baker-Venkataraman重排的普适条件,合成一系列5个类似物;选择化合物22为底物在B环的可修饰位点上引入卤族元素或烷基,完成了8个查尔酮类似物的合成;通过引入亲水性基团来提高类似物水溶性的操作并未成功,过程中得到3个新的类似物。其关键中间体和目标产物均通过H NMR、C NMR以及HRMS等进行了结构表征。(3)完成了Des-D及10个类似物对HIV-1整合酶的抑制活性研究。实验结果显示:天然产物Des-D的IC值为13.6μmol·L,活性最高。化合物21与14的IC值分别为101.3μmol·L和161.0μmol·L。化合物20,39无明显抑制作用,IC值均大于200μmol·L,其余化合物表现无活性。在此基础上利用计算机模拟分子对接研究Des-D、21与HIV-1整合酶的结合机制。初步构效关系分析:A环C-4位甲氧基为有效官能团,C-5位醛基为可能的药效团,C-6位的羟基能较好的与HIV-IN核心结构域结合,不能被保护,B环引入卤族元素或烷基修饰对活性没有提高。

关键词：毛叶假鹰爪素D 化学合成类似物 HIV-1 活性研究

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大麻二酚混合胶束体系的构建及活性研究

大麻二酚混合胶束体系的构建及活性研究

作者：粟艳婷上海应用技术大学

学位级别：硕士

大麻二酚(Canabidiol,CBD)是工业大麻植物的提取物,具有多种药用活性而没有精神致幻作用,在治疗癫痫、焦虑症、癌症及炎症疼痛等方面的疾病发挥重要的作用。此外,CBD还具有治疗痤疮、改善皮肤发炎、抗衰老、治疗湿疹等护肤作用。目前,CB... 详细信息

大麻二酚(Canabidiol,CBD)是工业大麻植物的提取物,具有多种药用活性而没有精神致幻作用,在治疗癫痫、焦虑症、癌症及炎症疼痛等方面的疾病发挥重要的作用。此外,CBD还具有治疗痤疮、改善皮肤发炎、抗衰老、治疗湿疹等护肤作用。目前,CBD在临床应用中主要用于治疗癫痫症,对于难治愈性癫痫和罕见病多发性硬化症引起的疼痛的治疗起到了良好的效果,并且减少了副作用的发生。CBD已被证实对人体具有良好的安全性和耐受性,这一特性使得CBD在药物和化妆品开发领域具有广阔的应用前景。但是,CBD具有较强的亲脂性和在水中的溶解性差,稳定性差,生物利用度较低,在实际应用中存在一定的局限性。因此,本论文从解决CBD溶解度及扩大其适用范围的角度出发,研究了一种混合胶束体系来增加CBD在水中的溶解度。本论文以聚合物泊洛沙姆(P407)和小分子甜茶苷(RUB)构建混合胶束体系,通过P407和RUB混合在水中自组装形成“核-壳”的结构将CBD包载于疏水性的内核中,而亲水性的外壳则与水分子接触,从而增加CBD的溶解度。主要研究内容与结果如下:1.混合胶束制备工艺研究与制备,采用溶剂蒸发法制备混合胶束,通过单因素实验确定了超声时间40 min,旋蒸温度40℃,固液比40:1的最佳工艺条件。从单因素实验中选取影响指标的最大因素,以载药比和P407:RUB(w/w)为自变量,包封率为因变量,通过中心设计-响应面分析模型确定了混合胶束制剂的最优制备处方为载药比为4:1,P407:RUB为6:1。2.CBD混合胶束制剂的表征,最优处方制备的CBD混合胶束制剂的载药量为18.6%,包封率为92.8%;透射电镜下观察到CBD混合胶束的表观形貌为致密的球体,平均粒径为103 nm±2.66 nm,分散系数指数为0.274,zeta电位为-16.54 m V;CBD混合胶束的饱和溶解度为15.60 mg/m L,比纯CBD的自身溶解度增大了约1500倍;红外光谱分析显示CBD特征基团的吸收峰消失了,差示量热扫描仪和热重分析显示CBD被载体包封于核内并且在混合胶束中发生了物相变化;离心稳定性、稀释稳定性和长期储存稳定性研究等均表明了CBD混合胶束具有良好的动力学和热力学稳定性,达到在4℃和常温下稳定存放180天以上的效果。3.探究了CBD混合胶束制剂的体外释放特性、抗氧化特性、抗菌活性、抗透明质酸酶及抗酪氨酸酶活性等作用。结果表明,CBD混合胶束制剂相比于CBD具有明显的缓释作用;CBD混合胶束可以有效提高CBD的抑菌效果,对金黄色葡萄糖菌的IC为3.9μg/m L,比单纯使用CBD的IC(72.3μg/m L)约低18倍,MIC和MBC都为31.25μg/m L,低于CBD的4倍和8倍;CBD混合胶束在浓度为3.1μg/m L时能够清除82.3%的ABTS自由基或其浓度为50μg/m L时能够清除84.7%的DPPH自由基,其对ABTS自由基的EC为0.36μg/m L,对DPPH自由基的EC为4.71μg/m L,表明CBD混合胶束具良好的抗氧化活性;CBD混合胶束在低浓度条件下对透明质酸酶的抑制效果优于CBD,其半数有效抑制浓度(IC)为1.2 mg/m L左右;其对酪氨酸酶活性的影响也具有一定的抑制作用,在浓度为62.5μg/m L时能够抑制达45%的酪氨酸酶活性。4.将CBD包载于混合胶束体系内提高了CBD的溶解性后扩大了它的应用范围,可以应用到保湿水、乳液等溶液剂和膏霜剂等半固体制剂中。结果表明CBD混合胶束能够以9.43 mg/m L的溶解度溶解到保湿水中,在溶液剂中具有良好的溶解度。此外,CBD混合胶束也能够很好的溶解于乳液和膏霜剂中,保持制剂形态不变化,在40℃的高温下也没有破坏乳膏霜的结构,保持良好的稳定性。本文成功构建了以泊洛沙姆和甜茶苷包载CBD的混合胶束体系,有效增加了CBD的水溶性和稳定性,并赋予缓慢释放的特性。混合胶束体系还能够保持CBD的抗氧化、抗酶等活性,提高了抑菌作用,并扩大了CBD的应用。

关键词：大麻二酚甜茶苷混合胶束溶解度活性研究

灵芝孢子破壁、多糖和谷胱甘肽提取、多糖分离纯化及活性研究

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灵芝孢子破壁、多糖和谷胱甘肽提取、多糖分离纯化及活性研究

作者：郭颖梅齐鲁工业大学

学位级别：硕士

灵芝是一种珍贵的中药材,属担子菌、灵芝科,被誉为“草药之王”,在中国已有两千多年的历史。灵芝孢子粉是灵芝在成熟期弹射出的种子,具有灵芝的全部基因信息和相似的功能成分。灵芝孢子粉可以调节免疫系统、降血脂、抗过敏、抗疲劳、抗... 详细信息

灵芝是一种珍贵的中药材,属担子菌、灵芝科,被誉为“草药之王”,在中国已有两千多年的历史。灵芝孢子粉是灵芝在成熟期弹射出的种子,具有灵芝的全部基因信息和相似的功能成分。灵芝孢子粉可以调节免疫系统、降血脂、抗过敏、抗疲劳、抗氧化、抗肿瘤、抗炎等多种功能。所以本研究以灵芝孢子粉为原料,先对其进行超微粉碎破壁,确定最佳破壁条件,再用电镜和红外扫描对比破壁前后孢子粉的变化,以及破壁效果对多糖得率的影响。然后再从破壁后的孢子粉里提取多糖,最终确定最佳提取条件。通过最佳提取条件得到的粗多糖进行分离纯化可得组分均一的多糖,并对粗多糖和纯化多糖进行抗氧化试验,测定其抗氧化活性。对提取灵芝孢子粉多糖时产生的副产物蛋白进一步充分利用,从中提取谷胱甘肽,试验结果如下:(1)灵芝孢子粉破壁试验:对灵芝孢子粉粗破碎,然后进行一定浓度的高压均质、冷冻干燥,再用超微粉碎机进行破壁,以主轴转速和粉碎时间为单因素,最终确定最佳工艺条件为主轴转速2200 r/min、粉碎时间20 min,此时破壁率达到98%左右。通过外观、色泽、气味、滋味、质构的观察,比较了灵芝孢子粉破壁前后的不同;通过对电镜图前后和红外光谱分析的对比,发现破壁后有效成分充分释放,且灵芝孢子粉内的有效成分没有明显变化;通过灵芝孢子粉多糖得率的比较,得出破壁前灵芝孢子粉多糖的得率为0.83%,破壁后为1.55%,且多糖得率与灵芝孢子粉的破壁率呈正相关。(2)以超声时间、水浴温度、料液比、超声功率以及提取次数为单因素,采用超声辅助热水浸提法提取灵芝孢子粉多糖,并通过正交试验对灵芝孢子粉多糖的提取工艺进行优化。结果表明,各个影响因素对多糖得率影响的先后次序为料液比>超声功率>超声时间>水浴温度。最佳提取工艺条件为料液比1:30(g/m L)、超声功率450 W、超声时间1.5 h、水浴温度50℃、提取次数2次,通过上述最佳工艺条件得出多糖得率为6.04%。以灵芝孢子粉粗多糖为原料,用Sevag法分离蛋白,再用D392阴离子交换树脂吸附法和活性炭进行对比脱色,树脂吸附法测得多糖的脱色率平均值是86.55%,多糖的保留率平均值是80.35%;活性炭吸附法测得多糖的脱色率平均值是67.78%,多糖的保留率平均值是72.09%,最终确定用D392阴离子交换树脂吸附法,经脱蛋白脱色得到初步纯化的粗多糖GLSP-1。然后将GLSP-1经DEAE-52纤维素和Sephadex G-100凝胶柱层析分离纯化,得到组分均一、纯度较高的灵芝孢子粉纯多糖(GLSP60A-1)。通过紫外全波段的扫描,GLSP60A-1在260 nm和280 nm处均没有吸收峰,说明分离纯化后的多糖不含核酸和蛋白质;红外光谱扫描的结果显示GLSP60A-1含有多糖典型的特征吸收峰,而且结构中含有ɑ-型糖苷键,具有吡喃糖环结构。(3)比较三种方法提取GSH可知,铜盐法置换GSH得率为71.29%,三种不同类型的树脂吸附GSH中LX-18树脂提取得率最高为79.35%,三种反胶束萃取法萃取GSH中AOT-异辛烷萃取得率最高为82.07%。最终选取操作过程不复杂,误差因素较少且GSH得率最高的AOT-异辛烷反胶束萃取法来进行GSH的提取,并进行单因素和响应面优化试验,最终得到提取GSH的最佳工艺条件为AOT-异辛烷浓度36.96 g/L、W25.4和K浓度0.53 mol/L,此时GSH得率最高,其平均值可达89.583%。(4)在DPPH自由基清除试验中,DPPH自由基清除能力的强弱为VC>GLSP-1>GLSP60A-1。其中,GLSP-1样品和GLSP60A-1样品的EC分别为0.38 mg/m L、4.22 mg/m L。在ABTS自由基清除试验中,ABTS自由基清除能力的强弱为VC>GLSP60A-1>GLSP-1。GLSP-1样品和GLSP60A-1样品的EC分别为1.20mg/m L、0.19 mg/m L。在OH自由基清除试验中,OH自由基清除能力的强弱为VC>GLSP-1>GLSP60A-1。GLSP-1样品和GLSP60A-1样品的EC分别为0.18mg/m L、4.51 mg/m L。

关键词：灵芝孢子粉多糖分离纯化谷胱甘肽活性研究

两株海洋真菌次生代谢产物的分离纯化、结构鉴定以及生物活性研究

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两株海洋真菌次生代谢产物的分离纯化、结构鉴定以及生物活性研究

作者：黄瑞丰南方医科大学

学位级别：硕士

微生物次生代谢产物是抗生素等药物的重要来源。由于不同于陆地的生态环境,海洋微生物来源的天然产物更是具有独特的分子骨架以及优良的生物活性。本论文选取了两株海洋相关的真菌或放线菌为研究对象,对这些菌株进行放大培养后对其产生... 详细信息

微生物次生代谢产物是抗生素等药物的重要来源。由于不同于陆地的生态环境,海洋微生物来源的天然产物更是具有独特的分子骨架以及优良的生物活性。本论文选取了两株海洋相关的真菌或放线菌为研究对象,对这些菌株进行放大培养后对其产生的次生代谢产物进行分离、鉴定、以及活性研究,总共分离得到29个化合物,其中2个为新化合物;采用核磁共振波谱以及质谱等波谱手段确定了这些化合物的平面结构以及相对构型,同时对部分化合物进行了抗流感病毒等活性研究。从深圳红树林土壤来源的Trichodermasp.T-4-1真菌分离得到20个化合物,其中一个为新化合物(1);从南沙冲浪区沉积物来源的Penicillium sp.Z16真菌分离得到9个化合物,其中一个为1个为新化合物(21)。另外,从深圳红树林土壤来源的菌株SBT6-2中分离得到2个化合物(31,32);从深圳红树林树叶内生菌株SBY8-1分离得到2个化合物(18,30);从广州动物园非洲狮的新鲜粪便菌株FZS-12中分离得到3个化合物(33-35)。采用致细胞病变效应的方法测试了化合物对甲型流感病毒的活性,并选取活性最佳的化合物15测试对A/Puerto Rico/8/34(H1N1),A/FM/1/47小鼠适应性病毒株,699(H3)临床分离株,A/Puerto Rico/8/34NA-H274Y突变株,B型流感病毒株等的抗病毒活性,活性数据分别为1.25±0.35、2.41±0.49、1.36±0.54、2.56±0.09、1.88±0.14 μM。

关键词：海洋来源次生代谢产物分离纯化结构鉴定活性研究

肠道病毒71型3C蛋白酶在大肠杆菌中的表达及活性研究

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病毒学报 2012年第3期28卷 195-200页

作者：陈丽杨志建周正蔡威特滕新泽张高峡上海泽润生物科技有限公司疫苗研发中心上海201203

本研究利用大肠杆菌表达系统构建肠道病毒71型3C蛋白酶,并进行纯化,对其酶活性进行研究。首先,将3C蛋白酶基因克隆至pET28a载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化获得3C蛋白酶,经肠激酶酶切去除N端His标签后获得无His标... 详细信息

本研究利用大肠杆菌表达系统构建肠道病毒71型3C蛋白酶,并进行纯化,对其酶活性进行研究。首先,将3C蛋白酶基因克隆至pET28a载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,Ni-NTA柱亲和层析纯化获得3C蛋白酶,经肠激酶酶切去除N端His标签后获得无His标签的3C蛋白酶,再以荧光多肽为底物进行酶活性研究。经过双酶切鉴定和测序证实,重组表达质粒pET28a-3C构建正确,表达的重组3C蛋白酶相对分子质量约22kD;纯化后有无His标签的3C蛋白酶均能催化荧光底物3B-3C,并且两者的酶动力学数据无显著差异,含有His标签的3C蛋白酶Km、Vmax、Kcat分别为22μM、434nM.Min-1、0.0669 Min-1;其最适反应pH为7.0,最佳反应温度为30℃～37℃。本实验成功表达并纯化了重组3C蛋白酶,该酶具有良好的活力,为抗病毒抑制剂、结构蛋白组装、疫苗开发及3C蛋白酶检测方法的研发奠定了基础。

关键词：肠道病毒71型 3C蛋白酶活性研究载体构建蛋白表达