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肿瘤 2009年第1期29卷 76-80页

作者：李艳张海燕王喆张必良中国科学院广州生物医药与健康研究院RNA化学生物学研究室广州510663 中国科学院研究生院北京100080 广州呼吸疾病国家重点实验室广州510663

目的:通过活体动物光学成像系统建立稳定表达荧光素酶的乳腺癌裸鼠移植瘤模型。方法:用脂质体包裹带有neo抗性基因及荧光素酶报告基因的真核表达质粒pGL4.17[luc2/neo],体外转染人乳腺癌细胞株MCF-7,将获得稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞... 详细信息

目的:通过活体动物光学成像系统建立稳定表达荧光素酶的乳腺癌裸鼠移植瘤模型。方法:用脂质体包裹带有neo抗性基因及荧光素酶报告基因的真核表达质粒pGL4.17[luc2/neo],体外转染人乳腺癌细胞株MCF-7,将获得稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞株(MCF-7-luc)进行皮下接种BALB/c裸鼠及尾静脉接种SCID小鼠,建立BALB/c裸鼠皮下移植瘤模型和SCID小鼠尾静脉移植瘤模型,通过活体成像系统监测体内肿瘤的生长及转移情况。结果:经过筛选得到1个能够用于建立裸鼠皮下移植瘤模型及SCID小鼠尾静脉移植瘤模型的稳定表达荧光素酶的乳腺癌细胞株,并成功建立了乳腺癌裸鼠皮下移植瘤模型及SCID小鼠尾静脉移植瘤模型。结论:通过活体动物光学成像系统成功获得的稳定表达荧光素酶的乳腺癌皮下移植瘤和尾静脉移植瘤模型,为人乳腺癌的相关研究提供了一个直观、方便、灵敏和可靠的平台。

关键词：乳腺肿瘤模型,动物荧光素酶类活体动物体内光学成像系统移植瘤

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靶向EGFR的siRNA有效抑制小鼠肺癌移植瘤的生长

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中国科学技术大学学报 2009年第7期39卷 706-713页

作者：汪本助李艳张海燕王喆张必良中国科学院广州生物医药与健康研究院广东广州510663 中国科学技术大学生命科学学院安徽合肥230027 呼吸疾病国家重点实验室广东广州510663

采用RNA干扰技术来研究靶向EGFR的siRNA对肺癌皮下移植瘤生长的影响.化学合成了3条针对EGFR的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),转染不同的EGFR siRNA后,A549细胞(高表达EGFR)EGFR的mRNA和蛋白表达均有显著降低,其中EGFR siRNA_1的沉默效果最为明显.转染EGFR siRNA_1后A549细胞的凋亡率明显增加,增殖活性明显降低.最后,利用稳定表达荧光素酶报告基因的人肺腺癌细胞株(A549-luc)建立裸鼠皮下移植瘤模型,采用活体动物体内光学成像系统实时检测以及通过检测肿瘤体积来检测对照组和EGFR siRNA_1给药组移植瘤的生长情况,结果发现EGFR siRNA_1治疗组肿瘤的生长速度较空白对照组和Notarget siRNA对照组明显变慢,说明干扰EGFR基因表达对肺癌皮下移植瘤的生长具有明显的抑制作用.

关键词： RNA干扰 siRNA A549细胞表皮生长因子受体活体动物体内光学成像系统基因治疗

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辐照对水流动力学注射介导的小鼠体内基因表达的影响

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苏州大学学报（医学版） 2011年第1期31卷 102-105页

作者：包光明胡博张胤晟赵雷卞士中刘海燕苏州大学医学部法医学系江苏苏州215123 苏州大学医学部肿瘤细胞与分子免疫实验室江苏苏州215123

目的探寻辐照对水流动力学注射(HGT)介导的荧光素酶报告基因在小鼠体内的表达影响,从而评估水流动力学注射方法在小鼠造血干细胞移植模型中应用的有效性。方法将实验鼠分为辐照组和非辐照组,尾静脉大体积快速注射带有荧光素酶报告基因... 详细信息

目的探寻辐照对水流动力学注射(HGT)介导的荧光素酶报告基因在小鼠体内的表达影响,从而评估水流动力学注射方法在小鼠造血干细胞移植模型中应用的有效性。方法将实验鼠分为辐照组和非辐照组,尾静脉大体积快速注射带有荧光素酶报告基因的真核表达质粒PGL3-luc。于注射后6h腹腔注射荧光素酶底物,并通过活体动物体内光学成像系统检测基因表达的初始水平。将辐照组小鼠进行700c Gy非清髓性全身照射,并于水流动力学注射后12、24、48、72、96、120 h通过活体动物体内光学成像系统对两实验组小鼠体内目的基因的表达水平进行监测。结果通过尾静脉进行水流动力学注射的PGL3-luc质粒在注射后6h于小鼠肝脏大量表达,其平均表达水平为(3739±924.8)相对荧光单位(RLU)/(sec·mg)蛋白。在各个时间监测点辐照组与非辐照组相比实验鼠体内基因表达水平差异均有统计学意义(均P>0.05),其表达水平均于水流动力学注射72 h后显著降低。结论小鼠移植前的辐照预处理对水流动力学注射介导的基因在小鼠体内的表达并无影响,该种新型基因转移表达方法可以有效地应用于小鼠造血干细胞移植模型中。

关键词：水流动力学注射辐照造血干细胞移植活体动物体内光学成像系统

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供体NK细胞及水流动力学注射介导的IL-15对非清髓异基因造血干细胞移植的促进作用

供体NK细胞及水流动力学注射介导的IL-15对非清髓异基因造血干细...

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作者：包光明苏州大学

学位级别：硕士

一、辐照对水流动力学注射介导的小鼠体内基因表达的影响目的:探寻辐照对水流动力学注射(Hydrodynamic Gene Transfer, HGT)介导的荧光素酶报告基因在小鼠体内表达影响,从而评估水流动力学注射方法在小鼠造血干细胞移植模型中应用的有... 详细信息

一、辐照对水流动力学注射介导的小鼠体内基因表达的影响目的:探寻辐照对水流动力学注射(Hydrodynamic Gene Transfer, HGT)介导的荧光素酶报告基因在小鼠体内表达影响,从而评估水流动力学注射方法在小鼠造血干细胞移植模型中应用的有效性。方法:将实验鼠分为辐照组和非辐照组,尾静脉大体积快速注射带有荧光素酶报告基因的真核表达质粒PGL3-luc。于注射后6h腹腔注射荧光素酶底物,并通过活体动物体内光学成像系统检测基因表达的初始水平。将辐照组小鼠进行700cGy非清髓性全身照射,并于水流动力学注射后12h、24h、48h、72h、96h、120h通过活体动物体内光学成像系统对两实验组小鼠体内目的基因的表达水平进行监测。结果:通过尾静脉进行水流动力学注射的PGL3-luc质粒在注射后6h于小鼠肝脏大量表达,其平均表达水平为3739±924.8相对荧光单位(relative light units,RLU)/(sec·mg)蛋白。在各个时间监测点辐照组实验鼠与非辐照组实验鼠相比体内基因表达水平均无显著差别(均p>0.05),其表达水平均于水流动力学注射72h后显著降低。结论:小鼠移植前的辐照预处理对水流动力学注射介导的基因在小鼠体内的表达并无影响,该种新型基因转移表达方法可以有效地应用于小鼠造血干细胞移植模型中。二、供体NK细胞及水流动力学介导的IL-15对非清髓异基因造血干细胞移植的促进作用目的:探讨供体NK细胞与IL-15在非清髓异基因造血干细胞移植中对植入可能存在的协同促进效应。方法:采用C57BL/6(H-2)小鼠做为供体鼠,同时用所获取的造血干细胞体外培养供体NK细胞;采用BABL/c(H-2)小鼠做为受体鼠,进行全身性照射的非清髓性移植前预处理。构建重组小鼠IL-15基因的pcDNA3.1表达载体,于移植前一天通过水流动力学注射介导IL-15在受体鼠内表达。尾静脉注射构建异基因造血干细胞移植模型,共设以下四组:尾静脉注射供体造血干细胞组;尾静脉注射供体NK细胞和供体造血干细胞组;尾静脉注射供体造血干细胞并在移植前一天经水流动力学介导的IL-15表达组;供体造血干细胞、NK细胞输注及移植前一天经水流动力学介导的IL-15表达组。造血系统再造完成后,取以上各组的受体鼠脾细胞,流式细胞仪检测供体细胞的植入率,检测供体来源的B细胞、NK细胞、巨噬细胞、CD4T细胞、CD8T细胞数量;3H嵌入法检测脾细胞在H-2抗原刺激下的增殖情况;细胞毒性试验检测脾细胞对H-2抗原包被的肿瘤细胞EL4的杀伤作用;CTLL-2细胞增殖实验检测脾细胞在H-2抗原刺激下所表达的IL-2水平。对以上实验结果进行统计学处理分析。结果:在采用腹腔注射IL-15的实验体系中,尾静脉注射供体NK细胞和供体造血干细胞并在移植前一天经水流动力学介导的IL-15表达组植入率明显高于其它三组(p﹤0.05);其受体鼠脾细胞中供体来源的B细胞、NK细胞、巨噬细胞、CD4T细胞、CD8T细胞数量明显高于其它三组(p﹤0.05);3H嵌入、细胞毒性实验、及IL-2水平的检测结果均与其它三组有显著性差异(p﹤0.05)。结论:在小鼠的非清髓异基因造血干细胞移植模型中,供体NK细胞和IL-15的联合使用能够显著协同促进植入、增加供者来源的各细胞亚群的百分比,并能够抑制受者的异基因反应。

关键词：水流动力学注射辐照造血干细胞移植活体动物体内光学成像系统异基因反应 NK细胞 IL-15

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