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洋葱伯克氏菌基因型的鉴定及其在苜蓿模型上的毒力分析

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微生物学报 2008年第11期48卷 1445-1450页

作者：张立新宋江华谢关林安徽农业大学植物保护学院合肥230036 浙江大学生物技术研究所杭州310029 安徽农业大学园艺学院合肥230036

【目的】证实来自我国农业和医院环境中部分洋葱伯克氏菌的基因型并通过苜蓿植物模型探测不同基因型对人体的可能毒力。【方法】采用洋葱伯克氏菌基因型的PCR特异性扩增技术对来源于根围、土壤和医院中的57株洋葱伯克氏菌进行了基因型... 详细信息

【目的】证实来自我国农业和医院环境中部分洋葱伯克氏菌的基因型并通过苜蓿植物模型探测不同基因型对人体的可能毒力。【方法】采用洋葱伯克氏菌基因型的PCR特异性扩增技术对来源于根围、土壤和医院中的57株洋葱伯克氏菌进行了基因型的鉴定,并利用苜蓿植物模型对这些基因型菌株进行了毒力探测。【结果】获得4种不同的基因型,包括基因型Ⅰ、ⅢA、ⅢB、Ⅴ和Ⅸ。来源于医院的基因型Ⅰ和ⅢA菌株以及根围的基因型ⅢB菌株均对苜蓿幼苗有较强的毒力,其对苜蓿幼苗的平均发病率分别达到69%、68%和55%,与农田环境中基因型Ⅴ和Ⅸ对苜蓿幼苗的发病率相比,表现出显著的差异性。【结论】农田环境中洋葱伯克菌的基因型在苜蓿模型上的毒力差异大,根围的基因型ⅢB菌株对苜蓿幼苗具有强毒力,其毒力程度接近于医院致病基因型ⅢA菌。

关键词：洋葱伯克氏菌基因型苜蓿毒力

洋葱伯克氏菌B-1对草莓采后灰霉病控制及其抗菌蛋白研究

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洋葱伯克氏菌B-1对草莓采后灰霉病控制及其抗菌蛋白研究

作者：张婧婷山西大学

学位级别：硕士

目前,我国水果蔬菜减产最主要的原因是在采后贮藏和运输过程中受到病原微生物污染。传统有效的方法是使用化学杀菌剂,但会产生许多危害,比如污染环境、危害身体健康,以及植物产生抗病性等。因此,利用有效且更为安全的防治方法来替代传... 详细信息

目前,我国水果蔬菜减产最主要的原因是在采后贮藏和运输过程中受到病原微生物污染。传统有效的方法是使用化学杀菌剂,但会产生许多危害,比如污染环境、危害身体健康,以及植物产生抗病性等。因此,利用有效且更为安全的防治方法来替代传统的化学防治已经成为一种新的研究方向。本实验立足于生防菌洋葱伯克氏菌B-1,一方面探究其对果实采后过程中病害的预防效果,另一方面通过分离纯化该生防菌的抗菌蛋白,并对抗菌蛋白生物学特性和抑菌机理进行初步探究。论文的实验内容和研究结果如下:(1)洋葱伯克氏菌B-1对草莓贮藏性及品质的影响。一方面,采用自然腐烂法和伤口接种法两种方法考察B-1在不同发酵时间,处理方式(喷淋或浸泡)和不同处理液对草莓采后贮藏影响。另一方面,通过采前喷洒生防菌研究对草莓采后品质影响。实验表明,发酵培养24 h时生防菌洋葱伯克氏菌B-1对草莓果实采后腐烂率最低,相比CK降低了55.04%;草莓果实采后浸泡3 min其腐烂率最低,与CK相比下降了46.74%;不同处理液中,B-1发酵原液、经过5倍稀释的发酵液以及B-1的菌悬液,采用伤口接种法抑制率均为100%,可以完全抑制草莓采后灰霉病的发生。采前喷洒B-1,不仅可以有效降低果实腐烂率,而且对其果实品质没有影响。(2)洋葱伯克氏菌B-1抗菌蛋白的分离纯化。裂解B-1菌悬液,经80%的硫酸铵沉淀,再经过两次不同的柱层析得到抗菌蛋白,电泳检测获得分子量约为17.6 KDa的单一蛋白,质谱分析检测鉴定得到一条可能的肽段序列*** APTISLETIQYHYGK.H。(3)抗菌蛋白的稳定性研究实验。该蛋白最适作用环境偏酸性,对常见的有机试剂以及蛋白酶不敏感,在经过120 min的紫外照射后,蛋白依然具有活性;对于一些还原试剂DTT和巯基乙醇较敏感,50 mg/mL的吐温-80可将其活性增加12.5%。(4)抗菌蛋白的抑菌特性。该抗菌粗蛋白对常见的病原菌具有抑制效果,抑菌活性与其浓度呈正相关。通过体外果实进行伤口接种实验表明:该抗菌蛋白对果实上的灰霉病也具有好的抑菌作用,贮藏第12 d时,与CK相比其果实发病率不足一半。通过扫描电镜和激光共聚焦电镜观察抗菌蛋白对灰霉菌丝的影响,发现经抗菌蛋白处理的菌丝,其外形不光滑,并且发生明显皱缩。在荧光物质的染色下,菌丝DNA含量,线粒体膜电位和活性氧荧光强度均降低,可见抗菌蛋白通过影响灰霉菌丝的生长发育达到抑菌效果。(5)洋葱伯克氏菌B-1的毒安全性评价。本研究通过动物实验对该菌株进行毒理安全性实验,包括经口、经皮以及对眼的刺激性实验。经口实验表明当给予量达到实验的最大剂量时,动物仍没有死亡,可以认为该菌株是低毒无毒物质;经皮实验中,对皮肤的刺激为0且不会产生致敏性;对眼部刺激实验中,对眼部的刺激为0,再观察48 h后对眼睛的刺激依然为0。初步表明了洋葱伯克氏菌B-1的安全性。

关键词：洋葱伯克氏菌抗菌蛋白分离纯化抗菌机理

洋葱伯克氏菌Burkholderia arboris（Ba1）拮抗番茄枯萎病菌的分子机制研究

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洋葱伯克氏菌Burkholderia arboris（Ba1）拮抗番茄枯萎病菌的分...

作者：徐翠虹浙江大学

学位级别：硕士

番茄(Solanum lycopersicum)是全球农业生产中最重要的蔬菜作物之一。在番茄的生产和运输过程中,许多病害都会严重威胁番茄的产量和质量,番茄枯萎病就是其中之一。近年来,由于防治效果好、防治时效长且环境友好等特点,通过生物代谢产物... 详细信息

番茄(Solanum lycopersicum)是全球农业生产中最重要的蔬菜作物之一。在番茄的生产和运输过程中,许多病害都会严重威胁番茄的产量和质量,番茄枯萎病就是其中之一。近年来,由于防治效果好、防治时效长且环境友好等特点,通过生物代谢产物挖掘生物制剂来防治番茄病害已成为重要的防治策略。伯克氏菌是一种有益于环境保护和农业生产的细菌,对许多病原菌都有着极显著的拮抗效果,所以具有开发成生物制剂的潜力。为了解析伯克氏菌拮抗病原真菌的分子机制,本研究以洋葱伯克氏菌Burkholderia arboris(Ba1)和番茄枯萎病菌(Fusarium oxysporum ***,Fol)为研究对象,获得以下结果:(1)初步分析了洋葱伯克氏菌Ba1产生的拮抗物质特性。通过对峙实验表明Ba1产生的拮抗物质可以显著抑制番茄枯萎病菌Fol真菌的生长。进一步提取了Ba1的粗提物对其进行热稳定性检测和蛋白酶K处理,发现拮抗物质热稳定性较高,且对蛋白酶K不敏感。(2)预测了Ba1拮抗物质的合成途径,构建敲除关键基因的Ba1突变体,发现突变体对Fol真菌拮抗能力并未减弱。首先,我们通过构建Ba1-m Cherry荧光菌株,确定了适合Ba1遗传转化的条件。其次,利用在线分析网站anti SMASH预测了Ba1的次级代谢产物基因簇,根据质谱鉴定的拮抗物质哌嗪二酮类化合物和吡咯并吡嗪酮类化合物的结构,确定了ent E、巨大质粒的第524个和第793个基因是其关键合成基因。最后,通过基因敲除构建了Ba1突变体,结果表明突变体并未减弱抑制Fol真菌生长的能力。(3)构建了Ba1的转座子插入突变体库,筛选获得了两个对Fol真菌拮抗能力减弱的突变体,克隆后发现突变基因分别编码Asn C家族转录调控因子和尿卟啉III甲基转移酶,其中尿卟啉III甲基转移酶突变使Ba1几乎丧失拮抗能力,敲除编码该蛋白的基因Cob A后也验证了这一结果。初步的基因功能分析表明其是钴胺素和西罗血红素合成途径中的重要基因。同时通过非靶向代谢组检测Ba1和突变体中具有显著性差异的代谢物,其中二甲基二硒醚(Dimethyl diselenide)、溶血磷脂酰乙醇胺(Lysophosphatidylethanolamine,LPE)以及一个短肽组氨酸-丙氨酸-苯丙氨酸-赖氨酸(His-Ala-Phe-Lys)在突变体中显著下调。综上所述,本研究对Ba1粗提物的性质进行了初步探索,通过构建Ba1次级代谢产物合成候选基因的突变体以及转座子突变体库,定位到了两个对Ba1拮抗物质有影响的基因,这为今后开发Ba1拮抗物质作为生防制剂的生产和使用提供了前期基础。

关键词：洋葱伯克氏菌拮抗作用番茄枯萎病菌次级代谢产物生物制剂

不同来源的洋葱伯克氏菌基因型对洋葱的致病性分析

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植物保护 2009年第2期35卷 117-120页

作者：张立新宋江华安徽农业大学植物保护学院合肥230036 安徽农业大学园艺学院合肥230036

通过对农田环境和医院的洋葱伯克氏菌基因型在洋葱上的致病性研究,结果表明,来源于根围的基因型Ⅲ和基因型Ⅰ的部分菌株,以及来源于医院的基因型Ⅰ和Ⅲ菌株均能使洋葱鳞茎腐烂,表现出与洋葱致病菌LMG1222相似的致病症状,但基因型Ⅴ和Ⅸ... 详细信息

通过对农田环境和医院的洋葱伯克氏菌基因型在洋葱上的致病性研究,结果表明,来源于根围的基因型Ⅲ和基因型Ⅰ的部分菌株,以及来源于医院的基因型Ⅰ和Ⅲ菌株均能使洋葱鳞茎腐烂,表现出与洋葱致病菌LMG1222相似的致病症状,但基因型Ⅴ和Ⅸ没有使洋葱发病。农田和医院环境中均存在对洋葱致病的洋葱伯克氏菌,而且各基因型对洋葱的致病性有差异。

关键词：洋葱伯克氏菌基因型洋葱致病性

生防菌株洋葱伯克氏菌对草莓果实采后病害控制及安全性评价

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食品工业科技 2018年第1期39卷 96-101,106页

作者：范三红张婧婷施俊凤山西大学生命科学学院山西太原030006 山西省农业科学院农产品贮藏保鲜研究所山西太原030031

采用自然腐烂法和伤口接种法研究生防菌株洋葱伯克氏菌Burkholderia contaminans(简称B-1),在不同发酵时间、处理方式和处理液对草莓果实采后贮藏的影响,并进行该生防菌的大鼠急性经口毒性实验、家兔皮肤及眼刺激性实验和豚鼠皮肤变态反... 详细信息

采用自然腐烂法和伤口接种法研究生防菌株洋葱伯克氏菌Burkholderia contaminans(简称B-1),在不同发酵时间、处理方式和处理液对草莓果实采后贮藏的影响,并进行该生防菌的大鼠急性经口毒性实验、家兔皮肤及眼刺激性实验和豚鼠皮肤变态反应(致敏)实验。结果表明:与CK相比,生防菌B-1发酵培养24 h、采后果实浸泡3 min及稀释5倍的发酵液处理草莓果实,其采后腐烂率分别下降了55.04%、46.74%和39.98%,而且发酵原液、稀释5倍发酵液及菌悬液对草莓果实伤口接种灰霉病抑制率达100%。该生防菌的大鼠急性LD_(50)>5000 mg/kg,皮肤刺激强度和眼刺激积分指数(I.A.O.I)为0,眼刺激平均指数(M.I.O.I)48 h为0,皮肤变态反应(致敏)实验致敏率为0。本研究表明该细菌作为生防菌具有安全性,为该生防菌的生产性应用奠定基础。

关键词：洋葱伯克氏菌草莓采后病害抑制率安全性评价

不同洋葱伯克氏菌基因型对水稻种子萌发及幼苗生长的影响

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种子 2009年第4期28卷 12-13,17页

作者：张立新宋江华安徽农业大学植物保护学院合肥230036 安徽农业大学园艺学院合肥230036

利用洋葱伯克氏细菌的悬浮液浸种处理水稻种子,测试水稻根围等来源的不同洋葱伯克氏菌基因型对水稻种子发芽和活力的影响。结果表明,在供试的14株Bcc菌中,7株细菌使水稻种子的发芽率下降。来源于水稻根围的部分Bcc基因型Ⅲ和Ⅴ菌显著降... 详细信息

利用洋葱伯克氏细菌的悬浮液浸种处理水稻种子,测试水稻根围等来源的不同洋葱伯克氏菌基因型对水稻种子发芽和活力的影响。结果表明,在供试的14株Bcc菌中,7株细菌使水稻种子的发芽率下降。来源于水稻根围的部分Bcc基因型Ⅲ和Ⅴ菌显著降低了种子的发芽率和活力指数,抑制了幼苗的生长。同时来源于医院的4株Bcc基因型Ⅰ和Ⅲ菌对水稻种子萌发和幼苗生长也表现出较强的抑制作用。

关键词：洋葱伯克氏菌基因型水稻萌发

洋葱伯克氏菌无细胞培养物的生防及促生活性研究

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安徽农业科学 2013年第29期41卷 11696-11698页

作者：郑梦晨尚金楠沈瑶杨晓霞包崇山方媛浙江师范大学化学与生命科学学院浙江金华321004

为了防止洋葱伯克氏菌在农业环境中对人类的危害,采用离心和过滤的方法获得洋葱伯克氏菌无细胞培养物,并研究其在平板上对植物病原真菌的拮抗作用和对水稻的促生作用。结果表明:洋葱伯克氏菌对植物病原真菌具有明显的拮抗作用,其中菌株R... 详细信息

为了防止洋葱伯克氏菌在农业环境中对人类的危害,采用离心和过滤的方法获得洋葱伯克氏菌无细胞培养物,并研究其在平板上对植物病原真菌的拮抗作用和对水稻的促生作用。结果表明:洋葱伯克氏菌对植物病原真菌具有明显的拮抗作用,其中菌株R1、R15、R19、R20、R21、R25、R28的抑菌效果显著,在这7株菌中R15表现出对灰霉菌的强烈抑制作用和对稻瘟菌的较强抑制作用,并且表现出明显的促生作用。

关键词：洋葱伯克氏菌无细胞培养物拮抗促生

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洋葱伯克氏菌是人类的敌人还是朋友?

洋葱伯克氏菌是人类的敌人还是朋友?

洋葱伯克氏菌基因型的鉴定及其在苜蓿模型上的毒力分析

中国植物病理学会2004年学术年会

作者：罗远蝉谢关林浙江大学生物技术研究所浙江大学生物技术研究所

＜正＞洋葱伯克氏菌（Burkholderia cepacia）是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的格兰氏阴性细菌。它是一种重要的生防菌和环保菌,目前许多国家都把它作为生物农药和环保制剂使用。但同时,它也可以引起植物病害和人类病害。迄今,... 详细信息

＜正＞洋葱伯克氏菌（Burkholderia cepacia）是一种广泛存在于水、土壤、植物和人体中的格兰氏阴性细菌。它是一种重要的生防菌和环保菌,目前许多国家都把它作为生物农药和环保制剂使用。但同时,它也可以引起植物病害和人类病害。迄今,***分为九个基因型。目前尚无法区分这些基因型中哪些是非致病菌、哪些是植物致病菌、哪些是人体致病菌。因此,对***在农业生产中的使用进行风险评估十分有必要。本文就前人所作的研究,对***给我们带来的利益、危害及目前对该菌的研究热点,难点进行

关键词：洋葱伯克氏菌致病毒

来源： cnki会议评论

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