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泽漆汤对肺癌原位模型小鼠的抑制作用

中国实验方剂学杂志 2019年第14期25卷 6-12页

作者：胥孜杭朱杨壮壮张飞韦璐瑶苏琳焦肖宁周芹张宁黄珍祯朱娴丹刘菲仲海荣朱诗国陈晓邹纯朴上海中医药大学基础医学院经方理论应用研究中心中药与系统生物学中心科技实验中心上海201203 上海交通大学医学院附属新华医院上海200092

目的:建立小鼠肺癌原位模型,用泽漆汤干预模型小鼠以观其抑瘤功效,并探索潜在作用机制。方法:通过肺内注射1×10^5个LLC-luc细胞建立非小细胞肺癌原位小鼠模型,用泽漆汤(0. 171 g·m L^-1)或生理盐水对模型小鼠进行每日灌胃,连续35 d,... 详细信息

目的:建立小鼠肺癌原位模型,用泽漆汤干预模型小鼠以观其抑瘤功效,并探索潜在作用机制。方法:通过肺内注射1×10^5个LLC-luc细胞建立非小细胞肺癌原位小鼠模型,用泽漆汤(0. 171 g·m L^-1)或生理盐水对模型小鼠进行每日灌胃,连续35 d,观察小鼠的外观表现(精神、毛发、食欲等),生存期及泽漆汤抑瘤效果;每周活体成像检测小鼠肺内荧光信号强弱。流式细胞术检测模型小鼠脾脏中NK细胞数量,CD107α实验检测泽漆汤用药后小鼠脾脏中NK细胞脱颗粒情况。采用Kromasil 1005 C18色谱柱,以0. 025%磷酸-乙腈梯度洗脱,流速1. 0 m L·min^-1,柱温35℃,检测波长265 nm,建立泽漆汤指纹图谱并采用中国药典委员会推荐的中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件(2012版)对10批样品指纹图谱进行评价以完成对泽漆汤的质量控制。结果:泽漆汤能够明显抑制肺癌原位模型小鼠肺部荧光信号(P 泽漆汤干预后小鼠体内肿瘤中NK细胞显著增多(P 泽漆汤指纹图谱的相似度评价结果显示,10批泽漆汤水提液的指纹图谱相似度均≥0. 9,表明不同批次间差异较小。结论:泽漆汤可能通过上调小鼠体内NK细胞数量,增强其脱颗粒能力,从而达到抑制小鼠体内肿瘤生长,延长其生存期的作用。泽漆汤HPLC指纹图谱相似度评价可反映泽漆汤质量的稳定性,为后续研究提供用药基础。

关键词：泽漆汤肺癌小鼠模型 NK细胞质量评价

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泽漆汤治疗痰饮咳喘探析

南京中医药大学学报 2016年第5期32卷 413-415页

作者：雷坤朋朱永忠吴洁南京中医药大学基础医学院江苏南京210023 南京市胸科医院医教科江苏南京210029

泽漆汤出自《金匮要略》,是治疗痰饮咳喘的效方。然因其原文简短,致长期未得以足够重视。通过分析痰饮所致咳喘的机理与临证表现,泽漆汤证的病机、药物组成及功效特点并结合临床实践,揭示该方的作用机制及临床实用价值。认为泽漆汤与十... 详细信息

泽漆汤出自《金匮要略》,是治疗痰饮咳喘的效方。然因其原文简短,致长期未得以足够重视。通过分析痰饮所致咳喘的机理与临证表现,泽漆汤证的病机、药物组成及功效特点并结合临床实践,揭示该方的作用机制及临床实用价值。认为泽漆汤与十枣汤、控涎丹皆可泄水祛痰,然泽漆汤化痰逐水,通阳消饮,降逆止咳,祛邪为主,扶正为辅,适宜于痰饮伏肺或饮停胸胁所致咳喘者。

关键词：金匮要略泽漆汤痰饮咳喘胸腔积液

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泽漆汤抑制非小细胞肺癌的作用机制研究

泽漆汤抑制非小细胞肺癌的作用机制研究

作者：吴林玲江西中医药大学

学位级别：硕士

目的:泽漆汤是被临床证实能够有效治疗肺癌的一种中药复方,但其作用分子机制尚未明确。本课题以非小细胞肺癌细胞株H1299、H1650和A549为研究对象,采用细胞和分子生物学技术,在体外水平探讨泽漆汤对非小细胞肺癌增殖、迁移和铁死亡的影... 详细信息

目的:泽漆汤是被临床证实能够有效治疗肺癌的一种中药复方,但其作用分子机制尚未明确。本课题以非小细胞肺癌细胞株H1299、H1650和A549为研究对象,采用细胞和分子生物学技术,在体外水平探讨泽漆汤对非小细胞肺癌增殖、迁移和铁死亡的影响,阐明泽漆汤抑制非小细胞肺癌作用的分子机制,为泽漆汤治疗非小细胞肺癌提供理论依据和实验基础。方法:1.中药质谱分析泽漆汤药物成分泽漆汤样本采用超高压液相色谱仪和安捷伦SB-C18色谱柱进行分离,然后采用AB 6500 QTRAP质谱仪(AB SCIEX)进行质谱分析。2.体外水平研究泽漆汤对非小细胞肺癌的影响以非小细胞肺癌细胞株H1299、H1650和A549为研究对象,设置对照组和药物处理组。(1)MTT比色法检测泽漆汤对H1299、H1650和A549细胞增殖的影响。(2)细胞划痕实验和Transwell法检测泽漆汤对H1650和A549细胞迁移的影响。(3)流式细胞术检测泽漆汤对H1299、H1650和A549细胞周期的影响。(4)细胞衰老试剂盒检测泽漆汤对H1299、H1650和A549细胞衰老的影响。(5)活性氧试剂盒检测泽漆汤对H1299、H1650和A549细胞铁死亡的影响。3.泽漆汤抑制非小细胞肺癌的分子机制探讨运用网络药理学、RNA测序和蛋白印迹(western blotting)实验等方法探索泽漆汤抑制非小细胞肺癌的潜在靶点和作用机制。利用TCMSP和Herb数据库筛选出君药泽漆、臣药半夏和石见穿的有效化合物;再运用Herb、swiss target prediction和SEA等数据库筛选相关化合物的分子靶点。Genecard和OMIM数据库筛选出非小细胞肺癌的疾病靶点,再与筛选后的药物靶点做交集,并对交集靶点运用String和DAVID数据库构建蛋白互作及信号通路网络。将H1299、H1650和A549三株非小细胞肺癌细胞株分为对照组和泽漆汤组,提取样本的总RNA干冰寄送美吉生物公司进行RNA测序,并对获得实验结果进行分析。qPCR实验考察泽漆汤处理的H1299、H1650和A549细胞样本中GPX4和ACSL4基因的表达水平;Western blot检测泽漆汤处理后的H1299和A549细胞样本中CCND1、CDC45、MMP2、MMP9、PTGS2、GPX4和SLC7A11蛋白的表达水平。结果:1.质谱分析泽漆汤组分泽漆汤样本(冻干粉溶液)共检测出1067个代谢物,并获得9种物质一级分类,黄酮、酚酸类、生物碱、萜类、醌类、木脂素和香豆素、鞣质、甾体和其他,其中成分含量前十的物质是短叶苏木酚酸、没食子酸、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、汉黄芩苷(汉黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷)、金合欢素-7-O-葡萄糖醛酸苷、3-吲哚丙烯酸、4-O-没食子酰奎宁酸、3-氨基-2-萘甲酸、黄芩苷和N-苯亚甲基异甲胺,物质丰度比为1210000000、790000000、593000000、574000000、496000000、320000000、303000000、297000000、248000000、178000000、43700000。鉴定出来的成分主要来源于泽漆、半夏、石见穿和黄芩等中药。2.体外研究实验结果(1)MTT法实验结果显示,泽漆汤对非小细胞肺癌细胞株H1299、H1650和A549的增殖有明显的抑制作用(p泽漆汤对H1650和A549的横向迁移能力有明显的抑制作用,具有统计学意义(p泽漆汤对H1299、H1650和A549的纵向迁移能力有明显的抑制作用(p泽漆汤将H1299、A549和H1650阻滞在G1期,有效抑制了肿瘤细胞增殖。(4)细胞衰老实验结果显示,泽漆汤组H1299、A549和H1650细胞衰老的数量明显多于对照组,加速了癌细胞的衰老进程。(5)活性氧实验结果显示,与对照组相比,泽漆汤组的H1299、H1650和A549细胞出现了活性氧累积。结合细胞衰老实验结果分析,泽漆汤可能是诱导肺癌细胞出现了铁死亡现象,抑制了肺癌细胞的增殖。3.泽漆汤抑制非小细胞肺癌的分子机制探讨网络药理学分析得到泽漆的有效化合物16种,半夏的有效化合物14种,石见穿的有效化合物2种,与泽漆汤质谱鉴定结果大体一致。筛选出肺癌与泽漆汤的共同靶点有59个,构建的蛋白互作网络图显示EGFR、AKT1、ESR1、KDR、PIK3R1和MMP2等是其关键蛋白,与之相关的信号通路有PI3K-Akt和EGFR等通路。RNA测序结果共检测到表达基因共39479个,表达转录本共204245个,其中已知转录本179

关键词：泽漆汤非小细胞肺癌网络药理学 RNA测序质谱

泽漆汤治疗肺癌恶性胸腔积液及对T淋巴细胞亚群影响的临床观察

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泽漆汤治疗肺癌恶性胸腔积液及对T淋巴细胞亚群影响的临床观察

作者：王嘉山东中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过对比单独腔内化疗（顺铂）与其联合泽漆汤治疗肺癌恶性胸腔积液患者的临床疗效和T淋巴细胞亚群水平变化,探究中医药在治疗癌性胸水方面的潜在价值。方法:将符合纳入排除标准的60例患者随机分为对照组和治疗组,两组各30例。治... 详细信息

目的:通过对比单独腔内化疗（顺铂）与其联合泽漆汤治疗肺癌恶性胸腔积液患者的临床疗效和T淋巴细胞亚群水平变化,探究中医药在治疗癌性胸水方面的潜在价值。方法:将符合纳入排除标准的60例患者随机分为对照组和治疗组,两组各30例。治疗前两组中的中、大量积液患者均进行胸腔穿刺置管引流至胸水基本排净（符合少量标准）并采用流式细胞术进行外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞检测。对照组规律进行顺铂胸腔灌注治疗,治疗组在此基础上加用泽漆汤,直至1周期后试验结束。治疗后进行客观缓解率及疾病控制率、中医证候疗效、生活质量（KPS）评分、淋巴细胞亚群及毒副反应等多方面疗效评价。结果:入组患者在性别、年龄、病理分型、积液位置及治疗前的各项疗效评价指标等方面均无统计学差异,可进行随机对照试验。治疗组的疾病控制率、中医证候疗效评分、KPS评分、淋巴细胞亚群比例明显优于对照组,具有统计学意义;对比治疗后两组毒副反应的发生率,对照组略高于治疗组,但不具有统计学差异。结论:泽漆汤可以有效控制恶性胸腔积液的进展,通过升高CD3+、CD4+和NK细胞,降低CD8+水平来实现免疫调节,能够明显改善患者的中医临床证候,有效提高患者的生存质量,且具有较好的用药安全性。

关键词：泽漆汤腔内化疗肺癌恶性胸腔积液 T淋巴细胞亚群

泽漆汤通过调控髓源抑制细胞重塑肿瘤微环境抑制非小细胞肺癌的机制研究

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泽漆汤通过调控髓源抑制细胞重塑肿瘤微环境抑制非小细胞肺癌的机...

作者：朱杨壮壮上海中医药大学

学位级别：硕士

目的:探究泽漆汤的抑瘤功效,并探索其潜在作用机制。方法:第一部分:通过肺内注射1.2×10个LLC-luc细胞建立小鼠肺癌原位模型,将造模后的小鼠随机分为泽漆汤高、中、低剂量组、对照组和顺铂组,泽漆汤组给予200μl相应剂量的泽漆汤中药灌... 详细信息

目的:探究泽漆汤的抑瘤功效,并探索其潜在作用机制。方法:第一部分:通过肺内注射1.2×10个LLC-luc细胞建立小鼠肺癌原位模型,将造模后的小鼠随机分为泽漆汤高、中、低剂量组、对照组和顺铂组,泽漆汤组给予200μl相应剂量的泽漆汤中药灌胃,对照组给予等量生理盐水灌胃,每日1次,顺铂组给予100μl顺铂腹腔注射,每周1次,观察小鼠的体征表现(精神、活动、体温、口唇、爪甲等)并记录生存期。第二部分:分别于造模后第4、11、18、28天给予泽漆汤(中剂量)组和对照组小鼠活体成像,监测小鼠体内肿瘤生长状况。MTT检测不同浓度的泽漆汤(0,1,2,3,4 mg/ml)对LLC细胞增殖活性的影响。给予模型小鼠泽漆汤(中剂量)或生理盐水灌胃,每日1次,连续4周,流式细胞术检测小鼠脾脏和肿瘤中MDSCs、DCs、Mφ、NK细胞、T细胞等免疫细胞数量的变化,并检测骨髓中MDSCs和T细胞的数量。流式细胞术检测泽漆汤(中剂量)生理盐水干预后第7、14、21、28天小鼠肿瘤中MDSCs和T细胞数量。磁珠分选法分选CD3T细胞并检测其CD8T细胞CD107α脱颗粒状况。ELISA检测小鼠血清中IFNγ的含量。将从泽漆汤(中剂量)组和对照组小鼠脾脏中分选出的T细胞和MDSCs并分别按照1:0、1:1、2:1、4:1的比例共孵育,流式细胞术检测T细胞增殖情况。RT-PCR检测小鼠肿瘤中Arg1、i NOS的基因表达。使用G-MDSCs耗竭抗体敲除小鼠体内G-MDSCs,并给予中剂量的泽漆汤或生理盐水灌胃,每日1次,连续4周,流式细胞术检测小鼠肿瘤和脾脏中G-MDSCs的敲除效率,以及T细胞数量和CD8T细胞CD107α脱颗粒情况,ELISA检测小鼠血清中IFNγ。RT-PCR检测使用G-MDSCs耗竭抗体后小鼠肿瘤中Arg1、i NOS的基因表达。第三部分:基因芯片检测小鼠肿瘤中的基因表达差异。RT-PCR和Western blot检测使用G-ZMDSCs耗竭抗体前、后小鼠肿瘤中S100A9、STAT3和p STAT3的表达情况。结果:第一部分:泽漆汤(中剂量)能够显著延长肺癌原位模型小鼠生存期,并抑制模型小鼠体内荧光信号。第二部分:泽漆汤对LLC细胞增殖无直接抑制作用;泽漆汤(中剂量)显著抑制小鼠脾脏、肿瘤中MDSCs并增加CD8T细胞的数量,对DCs、Mφ、NK细胞、Treg等其他免疫细胞和骨髓中的MDSCs无显著影响;泽漆汤(中剂量)呈时间依赖性抑制小鼠肿瘤中MDSCs数量并增加T细胞数量;泽漆汤(中剂量)促进CD8T细胞CD107α脱颗粒,同时显著增加小鼠血清中IFNγ的分泌;泽漆汤(中剂量)显著下调Arg1基因表达并抑制MDSCs免疫抑制活性;使用G-MDSCs耗竭抗体后,泽漆汤(中剂量)对T细胞的数量和CD107α脱颗粒以及Arg1、i NOS的基因表达均无显著影响;第三部分:泽漆汤(中剂量)干预后小鼠肿瘤中S100A9、STAT3和p STAT3的表达显著下调,而使用G-MDSCs耗竭抗体后,泽漆汤(中剂量)对S100A9、STAT3和p STAT3表达的下调作用被逆转。结论:泽漆汤能够显著抑制肺癌原位模型小鼠体内肿瘤生长并延长其生存期,其机制可能是通过下调S100A9/STAT3信号通路从而抑制MDSCs实现的。

关键词：泽漆汤非小细胞肺癌 MDSCs 肺癌原位模型

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泽漆汤化裁治疗悬饮的理论探讨与临床运用

泽漆汤化裁治疗悬饮的理论探讨与临床运用

作者：雷坤朋南京中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过对泽漆汤的证治及方药分析,探讨泽漆汤加减方治疗悬饮(胸腔积液)的可行性及优越性。方法:包括理论研究及临床观察。采用原著学习、文献检索和临床研究的方法,分析、探讨了中医学对悬饮的认识、悬饮的病因病机及中医药治疗方法... 详细信息

目的:通过对泽漆汤的证治及方药分析,探讨泽漆汤加减方治疗悬饮(胸腔积液)的可行性及优越性。方法:包括理论研究及临床观察。采用原著学习、文献检索和临床研究的方法,分析、探讨了中医学对悬饮的认识、悬饮的病因病机及中医药治疗方法,同时探讨了悬饮与现代医学胸腔积液的相关性;论述了泽漆汤的证治及方药作用机制,比较了泽漆汤与十枣汤、控涎丹治疗作用的异同,并且对泽漆汤加减治疗结核性、肺癌胸腔积液进行了理论探讨。临床观察部分则通过收集部分悬饮(结核性胸腔积液)的病例进行研究,具体方法是将泽漆汤加减方试验组与对照组进行疗效比较,主要比较内容包括胸水引流时间及临床症状的改善等等。结果:研究表明"悬饮"与现代医学的胸腔积液具相关性。泽漆汤是治疗悬饮的要方,尤其适宜于治疗癌性胸腔积液、结核性胸膜炎及细菌性胸膜炎等病证。临床观察则证实泽漆汤结合常规治疗在改善悬饮(胸腔积液)患者临床症状及缩短胸水的引流时间方面均优于常规方法。结论:泽漆汤治疗悬饮(胸腔积液)疗效较好,有利于缩短本病的疗程、改善患者的临床症状和提高患者的生存质量,其机理可能与本方能够泄水逐饮兼以扶正,改善胸水的代谢、改善微循环、抗肿瘤、抗结核及增强免疫力等功效有关。本课题的研究可以为临床悬饮(胸腔积液)的治疗提供新的思路与方法。

关键词：《金匮要略》泽漆汤悬饮胸腔积液中医药疗法

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《金匮要略》泽漆汤证治法探讨

中华中医药杂志 2007年第12期22卷 829-831页

作者：庞德湘连建伟浙江中医药大学附属第二医院杭州310005

文章主要发掘《金匮要略》泽漆汤证的治法机理,探讨了泽漆汤证的治疗法则,揭示了泽漆汤治疗的病位、病机和疾病。同时结合临床经验和引证实验结果说明泽漆汤治疗肺癌的可行性。泽漆汤逐水通阳、消痰散结、健脾扶正、清化郁热,是寒热并... 详细信息

文章主要发掘《金匮要略》泽漆汤证的治法机理,探讨了泽漆汤证的治疗法则,揭示了泽漆汤治疗的病位、病机和疾病。同时结合临床经验和引证实验结果说明泽漆汤治疗肺癌的可行性。泽漆汤逐水通阳、消痰散结、健脾扶正、清化郁热,是寒热并用、攻补兼施之治法,临床主要治疗肺癌、转移性肺肿瘤病等。其治法重视对病位的脏器气机调理,顺应脏腑特性,疏理肺脏气机。肿瘤病正气大虚,脾为后天之本,治当培本,是一大要义。泽漆先煎,去其毒性,为护正安胃之举,时时不忘顾护胃气之义。

关键词：金匮要略泽漆汤肺癌治疗法则

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泽漆汤中紫参的基原考证

中国中医基础医学杂志 2024年第2期30卷 297-302页

作者：郭柏村李子颢张业河南中医药大学中医学院郑州450046

通过研究历代本草方书、医籍及现代文献,对《金匮要略》泽漆汤中紫参基原进行考证,以期为推进经方原方临床应用提供文献支持。据考证结果,历史上对紫参功效的表述较为统一,但植物来源混乱,宋以前对紫参药物形态的记述较为简练,仅能考证... 详细信息

通过研究历代本草方书、医籍及现代文献,对《金匮要略》泽漆汤中紫参基原进行考证,以期为推进经方原方临床应用提供文献支持。据考证结果,历史上对紫参功效的表述较为统一,但植物来源混乱,宋以前对紫参药物形态的记述较为简练,仅能考证为蓼科植物。宋代增设图例,并扩大了紫参植物来源,涉及蓼科、唇形科、毛茛科、百合科、蕨类等多种。明清时期运用紫参组方,而本草方面缺乏开创性成果。近代提出紫参当为重楼、石见穿的观点。考证认为,古代本草著作中紫参基原应为珠芽蓼Bistorta vivipara或拳蓼Bistorta officinalis。结合现代中药学相关考证,认为泽漆汤所用紫参的基原应为蓼科蓼属植物珠芽蓼Bistorta vivipara。

关键词：泽漆汤紫参基原考证珠芽蓼

泽漆汤治疗肺腺癌潜在靶点预测及作用机制研究

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国际中医中药杂志 2023年第7期45卷 861-867页

作者：张旭芳彭涛周文静闫润红山西中医药大学基础医学院晋中030619 山西省中西医结合医院肿瘤科太原030013

目的利用生物信息学方法及体外实验探讨泽漆汤治疗肺腺癌的潜在分子靶标及作用机制。方法基于TCMSP及文献检索,收集泽漆汤活性成分,利用R软件筛选TCGA和GEO数据库中的肺腺癌差异表达基因,并通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)得到共表... 详细信息

目的利用生物信息学方法及体外实验探讨泽漆汤治疗肺腺癌的潜在分子靶标及作用机制。方法基于TCMSP及文献检索,收集泽漆汤活性成分,利用R软件筛选TCGA和GEO数据库中的肺腺癌差异表达基因,并通过加权基因共表达网络分析(WGCNA)得到共表达模块,与泽漆汤靶标匹配映射后获取潜在作用靶点,并对靶点进行GO功能和KEGG通路富集分析。对结果进行实验验证,取肺腺癌细胞株A549、H1299,按随机数字表法分为空白对照组和泽漆汤组。采用细胞增殖实验(CCK-8)检测细胞增殖抑制率,采用Western blot法检测A549、H1299细胞白细胞分化抗原36(CD36)的表达,采用ELISA法检测低密度脂蛋白受体(LDLR)、IL-6水平。结果获得泽漆汤抗肺腺癌活性成分157个,潜在靶点18个,主要包括CD36、IL6、LDLR等。泽漆汤治疗肺腺癌的主要靶点集中在脂质代谢相关途径。实验结果显示,泽漆汤可有效抑制A549、H1299细胞活力和CD36、LDLR、IL-6水平。结论泽漆汤可通过下调CD36、LDLR蛋白表达抑制炎症反应,减缓肺腺癌细胞增殖。

关键词：肺腺癌泽漆汤生物信息学细胞实验