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FGF10，FGF7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响和比较

FGF10，FGF7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响和比较

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作者：张咏鑫深圳大学

学位级别：硕士

目的:从临床组织样本中分离人原代泪腺干细胞并进行鉴定与培养,研究并比较FGF10,FGF7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响,同时建立泪腺3D气液培养模型,为泪腺再生研究提供可靠的研究方法与实验数据。方法:1、获取手术切除的人泪腺... 详细信息

目的:从临床组织样本中分离人原代泪腺干细胞并进行鉴定与培养,研究并比较FGF10,FGF7和Bmp7对人原代泪腺干细胞增殖分化的影响,同时建立泪腺3D气液培养模型,为泪腺再生研究提供可靠的研究方法与实验数据。方法:1、获取手术切除的人泪腺组织,取一半进行免疫组化染色及泪腺器官标志性蛋白的免疫荧光。2、另一半进行细胞分离和传代培养。3、免疫荧光染色检测泪腺组织特异性标志物的表达(AQP5、CK15)。4、免疫荧光染色检测泪腺干细胞特异性标志物的表达(Nestin、P63)。5、比较不同浓度FGF10,FGF7和Bmp7对细胞形态的影响,CCK-8检测细胞增殖。6、根据以上检测结果分别选择FGF10,FGF7和Bmp7的实验浓度,用于构建人原代泪腺干细胞3D气液培养模型。结果:1、泪腺组织AQP5、CK15、Lactoferrin和BARX2表达阳性,验证组织来源为泪腺;P63、Ki67表达阳性,说明组织中有具有干细胞特性的细胞。2、泪腺细胞AQP5、CK15表达阳性,提示其来源于泪腺组织。3、P63、Nestin高表达,证明分离得到的细胞具有干细胞特性。4、FGF10,FGF7和Bmp7对细胞增殖分化的影响与比较,对CCK8结果进行分析得到:FGF10实验浓度为100 ng/ml,FGF7实验浓度为100 ng/ml,Bmp7在100ng/ml时最适合用于刺激细胞从快速增殖向分化的过渡。5、对人原代泪腺干细胞3D气液培养物进行H&E染色观察,FGF10,FGF7和Bmp7诱导培养形成的泪腺类器官更类似于腺泡细胞,而不是泪腺组织中的导管细胞。结论:FGF10在100 ng/ml时细胞生长状态最好;FGF7需在100 ng/ml时才能刺激刺激腺体上皮的出芽;Bmp7在100 ng/ml时最适合用于刺激细胞从快速增殖向分化的过渡。以上浓度的FGF10、FGF7和Bmp7组合培养,在气液界面诱导下,人泪腺干细胞可分化形成类似于腺泡细胞的3D气液类器官。

关键词：泪腺再生泪腺干细胞 FGF10 FGF7 Bmp7

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