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Smad2及P38MAPK在肝泡球蚴病灶旁组织中的表达及意义

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Smad2及P38MAPK在肝泡球蚴病灶旁组织中的表达及意义

作者：李振伟青海大学

学位级别：硕士

研究目的:观察在泡球蚴肝脏组织中Smad2和P38MAPK的表达,并分析二者在肝纤维化进程中的作用及其相互关系。研究方法:将20例经手术治疗的肝泡状棘球蚴病肝组织匹配后分为两类:邻近病变的组织(即病灶旁)与正常肝组织。利用IHC的方式检测Sm... 详细信息

研究目的:观察在泡球蚴肝脏组织中Smad2和P38MAPK的表达,并分析二者在肝纤维化进程中的作用及其相互关系。研究方法:将20例经手术治疗的肝泡状棘球蚴病肝组织匹配后分为两类:邻近病变的组织(即病灶旁)与正常肝组织。利用IHC的方式检测Smad2及P38MAPK的表达情况。苏木素-伊红和马松染色,光镜下观察病理改变与肝纤维化程度。结果:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度高。2,Smad2和P38MAPK在病灶旁组织均比正常肝组织的表达明显较高。3,Smad2和P38MAPK无论在正常肝组织,病灶肝组织,还是整个肝组织中,其表达水平均与纤维化程度正相关;随着纤维化程度的加重,Smad2和P38MAPK的表达水平也都相应增加。4,病灶旁组织中Smad2和P38MAPK的表达成正相关。结论:1,泡球蚴肝脏病灶旁组织比正常肝组织纤维化程度明显严重。2,Smad2和P38MAPK均介入泡球蚴引起肝纤维化的机制中。3,在病灶旁组织中,P38MAPK参与调控对Smad2的正向调节。

关键词：泡球蚴 Smad2 P38MAPK 肝纤维化

肝泡球蚴病边缘区域CT灌注成像与组织病理对照研究

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肝泡球蚴病边缘区域CT灌注成像与组织病理对照研究

作者：姚冰新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:应用CT灌注技术观察肝泡球蚴病的影像特征,并分析病灶边缘区域CT灌注参数与组织病理学指标的关系,探讨CT灌注在评价肝泡球蚴病边缘区域血流状态的应用价值。方法:28例肝泡球蚴病患者行肝脏CT灌注扫描检查,获得病灶中心、病灶边缘... 详细信息

目的:应用CT灌注技术观察肝泡球蚴病的影像特征,并分析病灶边缘区域CT灌注参数与组织病理学指标的关系,探讨CT灌注在评价肝泡球蚴病边缘区域血流状态的应用价值。方法:28例肝泡球蚴病患者行肝脏CT灌注扫描检查,获得病灶中心、病灶边缘区域及周围肝脏组织的各项灌注参数,包括血流量(BF)、血容量(BV)、平均通过时间(MTT)、毛细血管表面通透性(PS)、肝动脉灌流分数(HAF)、肝动脉灌流量(HAP)、门静脉灌流量(PVP);其中17例患者行手术治疗,观察新鲜手术标本后取病灶边缘区域行HE染色和免疫组化测定微血管密度(MVD),分析CT灌注各项参数与MVD的相关性。结果:28例中选取独立肝泡球蚴病灶31个,测得病灶中心、病灶边缘区域及周围肝脏组织的三组各项灌注参数的均值之间的差异均有统计学意义(P0.05);17例术后病灶边缘区域CT灌注参数BF、HAF、HAP与MVD呈正相关(P泡球蚴病灶与周围肝组织间存在边缘浸润带,该区域血流灌注高于病灶内部及周围肝脏组织,CT灌注成像可以反映这一区域的血流状态及病灶的浸润范围,具有较高的临床应用价值。

关键词：泡球蚴肝细胞体层摄影术,X线计算机灌注病理学

CD4～+、CD8～+在泡球蚴感染大鼠移植排斥反应中作用的实验研究

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CD4～+、CD8～+在泡球蚴感染大鼠移植排斥反应中作用的实验研究

作者：张际春新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:观察SD到Wistar大鼠同种心脏移植后,CD4、CD8在不同的实验组移植心脏及受体的脾脏中的浸润,探讨棘球蚴感染后移植排斥反应及治疗的特点。方法:首先建Wistar大鼠感染泡球蚴的动物模型,确定感染后,建SD到Wistar颈部异位心脏移植模型... 详细信息

目的:观察SD到Wistar大鼠同种心脏移植后,CD4、CD8在不同的实验组移植心脏及受体的脾脏中的浸润,探讨棘球蚴感染后移植排斥反应及治疗的特点。方法:首先建Wistar大鼠感染泡球蚴的动物模型,确定感染后,建SD到Wistar颈部异位心脏移植模型。本实验采用随机化分组原则,将24只Wistar分三组 (1) 普通大鼠组(未感染泡状棘球蚴);(2) 泡状棘球蚴感染组;(3) 环孢素治疗组:在感染泡球蚴的基础上,环孢素A,10mg/kg/d,灌胃,每日一次。观察移植心脏的搏动。停跳后即提示移植心脏排斥,同时处死动物摘取移植心脏及受体脾脏;应用免疫组织化学的方法测定移植心脏、受体脾脏中CD4、CD8的变化;结果:在不同的实验组,移植心脏的存活时间以及移植心脏及受体脾脏中的CD4、CD8细胞的浸润有明显的差异。泡球蚴感染大鼠组移植心脏存活时间较普通大鼠组明显延长(P泡球蚴组大鼠心脏存活时间明显延长(P泡球蚴的机体免疫失衡,可能向Th2倾斜从而下调Th1细胞驱动的急性排斥反应而延长移植物的存活时间,而CsA作为强免疫抑制剂,通过抑制CD4、CD8细胞功能而对泡球蚴感染大鼠移植排斥反应有明显抑制作用。同时发现移植心脏和受体脾脏中CD4、CD8细胞浸润具有一致性

关键词：泡球蚴同种心脏移植脾脏细胞免疫 CD4+ CD8+

miRNA-133a在泡球蚴感染所致肝星状细胞活化中作用及与肝纤维化的关系

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miRNA-133a在泡球蚴感染所致肝星状细胞活化中作用及与肝纤维化的...

作者：毕晓娟新疆医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨miR-133a在泡球蚴蛋白共培养所致肝星状细胞活化及泡球蚴感染所致小鼠肝纤维化中的作用。方法:建立肉眼直视下肝脏门静脉接种泡球蚴感染小鼠肝脏模型,对照组注射生理盐水。造模后1月,3月取肝组织,H&E染色检测泡球蚴感染情况,... 详细信息

目的:探讨miR-133a在泡球蚴蛋白共培养所致肝星状细胞活化及泡球蚴感染所致小鼠肝纤维化中的作用。方法:建立肉眼直视下肝脏门静脉接种泡球蚴感染小鼠肝脏模型,对照组注射生理盐水。造模后1月,3月取肝组织,H&E染色检测泡球蚴感染情况,天狼猩红染色检测胶原合成情况,免疫组化检测α-SMA在肝组织中的表达情况。qRT-PCR检测COL1A1、α-SMA和miRNA-133a的表达情况。泡球蚴蛋白(60μg/ml,600μg/ml)体外与肝星状细胞共培养24h后,qRT-PCR检测肝星状细胞中COL1A1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad4、TGFβ-RI、TGFβ-RII和mi RNA-133a基因表达水平。Weston-blot检测肝星状细胞中COL1A1和α-SMA蛋白表达水平。LX-2细胞转染miRNA-133a mimics后检测LX-2细胞中COL1A1、α-SMA、Smad2、Smad3、Smad4和miR-133a基因表达水平。Weston-blot检测COL1A1和α-SMA蛋白表达水平。结果:(1)成功建立肉眼直视下肝脏门静脉接种泡球蚴感染小鼠模型,泡球蚴感染1月和3月后,小鼠病灶旁肝脏中α-SMA和I型胶原mRNA及蛋白表达水平较假手术组显著升高,具统计学差异(P泡球蚴感染1月小鼠病灶近旁肝脏中miRNA-133a表达水平较假手术组显著升高,具统计学差异(P泡球蚴蛋白可刺激肝星状细胞α-SMA和COL1A1 mRNA水平及蛋白水平的显著升高(P泡球蚴蛋白刺激miRNA-133a模拟物转染LX-2细胞,α-SMA、COL1A1、Smad2、Smad3和Smad4 mRNA及蛋白表达水平均较未转染miRNA-133a模拟物LX-2细胞显著升高(P泡球蚴诱发的肝星状细胞活化并影响TGF-β/Smad信号通路中的关键蛋白。结论:miRNA-133a的高表达可促进泡球蚴诱导的肝星状细胞的活化并影响TGF-β/Smad信号通路中关键蛋白的表达。

关键词：泡型包虫病肝纤维化泡球蚴肝星状细胞 miRNA-133a

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放射线治疗小鼠泡球蚴病的超微结构观察

中国病原生物学杂志 2015年第7期10卷 619-622页

作者：薛娜伍志伟景涛刘永琦苏韫颜春鲁甘肃中医学院病原生物学与免疫学教研室甘肃兰州730000 兰州大学包虫病研究所甘肃兰州730030

目的观察放射线治疗小鼠继发性泡球蚴病的疗效,探索新的非手术治疗泡球蚴病方法。方法筛选感染泡球蚴模型小鼠40只,随机分为5组,其中高能6Mev X射线组15只,6Mev能量电子线组5只,8Mev能量电子线组5只,60 Co-γ射线组5只,模型对照组10只(... 详细信息

目的观察放射线治疗小鼠继发性泡球蚴病的疗效,探索新的非手术治疗泡球蚴病方法。方法筛选感染泡球蚴模型小鼠40只,随机分为5组,其中高能6Mev X射线组15只,6Mev能量电子线组5只,8Mev能量电子线组5只,60 Co-γ射线组5只,模型对照组10只(不作任何处理)。实验组小鼠行放射线治疗,5d后剖检,观察泡球蚴囊大体形态及超微结构变化并与模型对照组比较,评泡球蚴感染小鼠放射线治疗效果。结果与模型对照组相比较,6Mev Xray、6Mev E-ray、8Mev E-ray、60 Co-γray治疗组小鼠感染的泡球蚴囊壁组织和生发层细胞均有不同程度的改变和破坏,如线粒体肿胀、核固缩、糖原颗粒增多等,以高剂量组改变和破坏程度更显著。结论 6Mev X-ray、6Mev E-ray、8Mev E-ray、60 Co-γray治疗对小鼠泡球蚴的生长有一定的抑制作用,可使泡球蚴囊发生明显的形态学改变。

关键词：泡球蚴放射治疗形态学小鼠

不同培养基与饲养细胞组合对体外培养泡球蚴原头节的影响

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不同培养基与饲养细胞组合对体外培养泡球蚴原头节的影响

作者：韩振阳石河子大学

学位级别：硕士

背景多房棘球绦虫原头节的体外成囊培养是提取与研究其生发层干细胞的实验基础,D-MEM(高/低糖型)与RPMI-1640是最常用于多房棘球绦虫体外培养的商业培养基,HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC ***-1600)也被证实是适宜的饲养细胞,以上培养基... 详细信息

背景多房棘球绦虫原头节的体外成囊培养是提取与研究其生发层干细胞的实验基础,D-MEM(高/低糖型)与RPMI-1640是最常用于多房棘球绦虫体外培养的商业培养基,HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC ***-1600)也被证实是适宜的饲养细胞,以上培养基与饲养细胞两两组合对多房棘球绦虫体外生长的影响尚未见直接的对比研究。目的构建多房棘球绦虫体外培养模型,观察泡球蚴在不同饲养细胞(HeLa细胞与大鼠肝癌细胞(ATCC ***-1600))及含有10%胎牛血清的不同培养基(D-MEM(高/低糖型)与RPMI-1640)下生长情况,为体外培养泡球蚴获取泡球蚴囊泡提供新的思路。方法预先培养HeLa细胞及大鼠肝癌细胞(ATCC ***-1600),从饲养6个月以上种鼠体内提取泡球蚴原头节后分别与不同饲养细胞及培养基体外共同培养。实验根据饲养细胞与培养基成分的不同,组合成6组:I组:HeLa细胞与RPMI-1640培养基;II组:HeLa细胞与D-MEM(高糖型)培养基;III组:肝癌细胞与RPMI-1640培养基;IV组:肝癌细胞与D-MEM(高糖型)培养基;V组:HeLa细胞与D-MEM(低糖型)培养基;VI组:肝癌细胞与D-MEM(低糖型)培养基,观察泡球蚴原头节的生存、生长和发育,每7天计算原头蚴成囊率,并使用显微镜目镜测微尺测量囊泡平均直径大小。培养结束后注射器分别抽取小鼠体内囊泡及培养56D囊泡囊液,并用BCA蛋白定量试剂盒测定各组囊液蛋白含量。结果(1)原头蚴在6种组合中均可长期存活,大部分都形成囊泡,囊泡直径分布在1-6 mm;(2)培养第56天原头蚴成囊率和囊泡平均直径均为大鼠肝癌细胞与D-MEM(高糖型)培养基组效果最佳(P泡平均直径(3.379±0.199)mm;(3)囊泡囊液蛋白定量检测分析结果显示:6个实验组囊液蛋白含量均低于体内囊泡,实验组中,Ⅳ组蛋白含量为六组中最高(P泡大小与数量优于其他2种培养基,培养基葡萄糖含量与囊泡生长速度相关。2.大鼠肝癌细胞(CRL-1600)作为饲养细胞囊泡大小与数量优于HeLa细胞。3.D-MEM(高糖型)与大鼠肝癌细胞(CRL-1600)共同作用的环境下原头蚴生长发育的成囊率及囊泡大小最佳,可作为体外培养泡球蚴原头蚴获得囊泡的最优选择。

关键词：泡球蚴体外培养培养基饲养细胞囊泡

不同浓度泡球蚴囊液干预对大鼠肝星状细胞TGF-β1、IL-6、TNF-α表达的影响

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不同浓度泡球蚴囊液干预对大鼠肝星状细胞TGF-β1、IL-6、TNF-α...

作者：姚宝洪青海大学

学位级别：硕士

目的：研究泡球蚴囊液刺激环境对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）TGF-β1、IL-6、TNF-α表达的影响。方法：用浓度分别为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.9、1.7、3.4、6.8、13.5mg/ml的泡球蚴囊液与大鼠HSC-T6细胞共培养24h，0mg/ml... 详细信息

目的：研究泡球蚴囊液刺激环境对大鼠肝星状细胞（HSC-T6）TGF-β1、IL-6、TNF-α表达的影响。方法：用浓度分别为0、0.01、0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.9、1.7、3.4、6.8、13.5mg/ml的泡球蚴囊液与大鼠HSC-T6细胞共培养24h，0mg/ml浓度组做空白对照。ELISA法(酶联免疫吸附测定法)检测各浓度泡球蚴囊液处理组转化生长因子β1（TGF-β1）、白细胞介素6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的表达变化。结果：TGF-β1的表达在泡球蚴囊液浓度为0.01～6.8mg/ml范围内略高于空白对照组，但差异无统计学意义;泡球蚴囊液浓度高于3.4mg/ml时，IL-6的表达极显著增加（P 泡球蚴囊液处理组相比空白对照组分别增加3028.65、3879.23倍;泡球蚴囊液浓度≤0.2mg/ml时，TNF-α的表达趋于平稳;此后急剧增加又逐渐下降，其中泡球蚴囊液浓度为0.4mg/ml时TNF-α的表达量达到最大，为空白对照组的3.53倍，差异具统计学意义（P泡球蚴囊液对大鼠HSC-T6细胞TGFβ1无明显的刺激分泌作用;高浓度的泡球蚴囊液可刺激大鼠HSC-T6细胞IL-6的表达分泌;一定浓度的泡球蚴囊液可刺激HSC-T6细胞TNF-α分泌。

关键词：泡球蚴肝星状细胞转化生长因子 β1白细胞介素6肿瘤坏死因子-α

泡球蚴Em18重组蛋白的表达及其抗原性检测的研究

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中国寄生虫病防治杂志 2005年第1期18卷 33-36页

作者：王俨林仁勇丁剑冰卢晓梅张静萍王星梁晓慧张亚楼张琰温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达... 详细信息

　目的　构建泡球蚴18(Em18)基因的原核表达质粒,获得高效表达、有生物活性的Em18重组蛋白,为包虫病诊断试剂的研制奠定基础。　方法　用DNAman软件设计引物,分别在引物5′端和3′端添加EcoRⅠ和 XhoⅠ酶切位点,以pMD18 T/Em18原核表达质粒为模板,PCR扩增Em18基因片断,经酶切,克隆入原核表达载体 pET 41a(+),构建原核表达质粒 pET41a Em18;转化大肠埃希菌BL21(DE3),酶切、PCR及测序鉴定其插入序列的正确性。经 IPTG诱导表达 rEm18 GST重组蛋白和GST重组蛋白,用谷光甘肽 Sepharose 4B亲合层析柱分别进行纯化,通过 SDS PAGE和Western blot试验分析鉴定。　结果　测序表明构建的 pET41a Em18 原核表达质粒均为正确连接,插入 Em18 基因片断为486 bp。SDS PAGE检测表明Em18基因以 rEm18 GST重组蛋白的方式得到成功表达,在相对分子质量单位 50ku处有表达条带;Western blot分析显示,rEm18 GST重组蛋白能被泡型棘球蚴病人阳性血清识别,具有良好的抗原性。　结论　成功构建了 pET41a Em18原核表达质粒,获得的 rEm18 GST重组蛋白具有生物活性和抗原性,有望应用于泡型包虫病诊断试剂的研制。

关键词：泡球蚴 Em18基因原核表达鉴定

泡球蚴18基因的克隆、原核表达质粒的构建及其初步表达的研究

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新疆医科大学学报 2005年第1期28卷 18-20页

作者：王俨林仁勇丁剑冰卢晓梅张静萍王星梁晓慧张亚楼张琰温浩新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院基础医学院免疫学教研室新疆乌鲁木齐830054

目的: 克隆、分析泡球蚴 18 (Em18)抗原基因,构建 pET41a Em18 原核表达质粒,并初步诱导表达Em18重组蛋白。方法: DNAman软件设计引物,RT PCR法克隆 Em18 cDNA并构建 pMD18 T/Em18 质粒,测序确定序列,利用DNAman和BLAST软件,对其进行基... 详细信息

目的: 克隆、分析泡球蚴 18 (Em18)抗原基因,构建 pET41a Em18 原核表达质粒,并初步诱导表达Em18重组蛋白。方法: DNAman软件设计引物,RT PCR法克隆 Em18 cDNA并构建 pMD18 T/Em18 质粒,测序确定序列,利用DNAman和BLAST软件,对其进行基因序列分析。构建 pET41a Em18 原核表达质粒,测序鉴定插入序列正确性。IPTG初步诱导和表达 rEm18 GST重组蛋白,SDS PAGE电泳检测。结果: 测序结果显示Em18抗原基因长度为 486 bp,编码 161 个氨基酸。BLAST 比对分析表明为一新序列并被 GenBank 收录(AY513691)。构建的 pET41a Em18原核表达质粒,经 IPTG诱导后,SDS PAGE检测表明 rEm18 GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为50 KDa处有表达条带。结论: 成功克隆并构建了 pET41a Em18 原核表达质粒,初步诱导表达出 rEm18 GST重组蛋白,为新一代包虫病诊断试剂盒的研制奠定基础。

关键词：泡球蚴 Em18基因重组蛋白