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LAG3分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响

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中国人兽共患病学报 2024年第6期40卷 529-536页

作者：郑旭然邓冰清康雪娇李寅时阿比旦·艾尼瓦尔余倩孜比姑·肉素阿迪莱·多力坤王茂林王慧张传山李静新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830054 新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院、省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室、新疆维吾尔自治区包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆地区高发疾病研究教育部重点实验室(新疆医科大学) 乌鲁木齐830054 新疆维吾尔自治区地方病分子生物学重点实验室乌鲁木齐830054

目的探究淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte activation gene-3,LAG3)分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响。方法将野生型(C57-wild-type, WT)和LAG3基因敲除(LAG3-knockout, LAG3-KO)小鼠经肝门静脉注射泡球蚴原头节,... 详细信息

目的探究淋巴细胞活化基因-3(Lymphocyte activation gene-3,LAG3)分子对泡球蚴感染小鼠肝脏B淋巴细胞亚群及其功能的影响。方法将野生型(C57-wild-type, WT)和LAG3基因敲除(LAG3-knockout, LAG3-KO)小鼠经肝门静脉注射泡球蚴原头节,感染12周免疫组织化学染色观察小鼠肝脏CD19和α-SMA表达及定位,流式细胞术检测小鼠肝脏B细胞及其各亚群和表面CD80、CD86、MHC-Ⅱ分子的表达情况。结果泡球蚴感染12周小鼠肝脏LAG3-KO组CD19阳性区及面积占比略高于WT组,但差异均无统计学意义。α-SMA在LAG3-KO组阳性区及面积占比显著高于WT组(t=-3.224、-3.227,P均泡球蚴感染中期12周,LAG3分子影响小鼠肝脏B细胞亚群及功能,并以B2型淋巴细胞尤为显著,LAG3对B细胞的活化以及MHC-Ⅱ类分子表达产生抑制作用,提示其可能参与泡球蚴感染下的B细胞耗竭。

关键词：泡球蚴淋巴细胞活化基因-3 B细胞 B细胞亚群

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泡球蚴感染对小鼠肝脏TRIF/IRF3通路和IFITM3的影响

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山西医科大学学报 2024年第5期55卷 553-559页

作者：屈晴袁振杨雨阳王菲单骄宇新疆医科大学基础医学院人体寄生虫学教研室乌鲁木齐830017 新疆地方病分子生物学重点实验室新疆医科大学第一附属医院中亚高发疾病发病机制与防治国家重点实验室

目的探索泡球蚴感染后不同时间对小鼠肝脏β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)/干扰素调节因子3(IRF3)通路及干扰素诱导的跨膜蛋白3(IFITM3)的影响。方法对泡型包虫病患者和其他非感染性肝病(肝血管瘤)手术患者的肝脏组织进行HE及免疫组织... 详细信息

目的探索泡球蚴感染后不同时间对小鼠肝脏β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TRIF)/干扰素调节因子3(IRF3)通路及干扰素诱导的跨膜蛋白3(IFITM3)的影响。方法对泡型包虫病患者和其他非感染性肝病(肝血管瘤)手术患者的肝脏组织进行HE及免疫组织化学染色,观察肝组织病理变化及IFITM3和叉头框蛋白P3(Foxp3)的表达。48只C57BL/6J雌性小鼠随机分为感染组(腹腔感染泡球蚴后8,30,60,90,180 d)和对照组。Masson染色观察小鼠肝脏纤维化病变,Western blot和实时荧光定量PCR检测小鼠肝脏TRIF/IRF3通路、IFITM3和Foxp3变化。结果泡型包虫病患者肝脏病灶周围肝组织排列紊乱,有大量炎性细胞浸润;肝血管瘤患者肝脏组织完整。免疫组化检测结果,泡型包虫病患者IFITM3和Foxp3的表达量高于肝血管瘤患者。Masson染色显示泡球蚴感染导致小鼠肝脏纤维化病变。实时荧光定量PCR结果显示,感染组小鼠肝脏TRIF、IRF3、IFNB1和IFITM3 mRNA表达在感染60 d和90 d时均高于对照组(P0.05);Foxp 3 mRNA的表达随着泡球蚴感染时间呈先上升后下降再上升的趋势,在感染180 d上升到峰值(P泡球蚴感染小鼠90 d,肝脏TRIF、IRF3、IFITM3蛋白表达量均高于对照组(P0.05);在感染90 d和180 d时,Foxp3蛋白表达高于对照组,并在180 d上升到峰值(P泡球蚴感染时,小鼠肝脏的TRIF/IRF3通路及IFITM3表达下调,影响了天然免疫的抗病原体功能,抑制宿主发挥抗病原体的作用。

关键词：泡型包虫病泡球蚴干扰素诱导的跨膜蛋白3 干扰素调节因子3 肝纤维化

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泡球蚴感染小鼠肝脏自噬相关蛋白的表达及其与纤维化关系的研究

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中国病原生物学杂志 2023年第1期18卷 42-46页

作者：古力米热·买买提吐尔逊蔡璇琳位苗苗崔雅阁米娜尔·托力恩沙代提·买买提热夏提麦迪乃姆·艾比布拉齐新伟赵慧马秀敏新疆医科大学附属肿瘤医院检验科省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院

目的通过观察泡球蚴感染不同阶段小鼠肝脏纤维化情况与自噬相关蛋白表达情况,分析在泡球蚴感染中自噬与肝纤维化的关系。方法取雌性BALB/c小鼠45只,随机分为模型组(30只)与对照组(15只)。模型组小鼠感染泡球蚴,并分别于感染8、30、60... 详细信息

目的通过观察泡球蚴感染不同阶段小鼠肝脏纤维化情况与自噬相关蛋白表达情况,分析在泡球蚴感染中自噬与肝纤维化的关系。方法取雌性BALB/c小鼠45只,随机分为模型组(30只)与对照组(15只)。模型组小鼠感染泡球蚴,并分别于感染8、30、60、90、180 d处死,通过HE染色观察小鼠肝脏的组织病理学变化,Masson染色观察小鼠肝脏胶原纤维变化,免疫组化法检测肝脏中Atg5、LC3与α-SMA蛋白的表达情况,qRT-PCR检测肝脏中Atg5、LC3、α-SMA mRNA表达水平。结果模型组小鼠感染泡球蚴8~90 d, Atg5、LC3、α-SMA蛋白及其mRNA表达逐渐增加,其中感染30~90 d时与对照组相比差异均有统计学意义(均P泡球蚴感染早、中期小鼠肝脏自噬相关蛋白高表达,可能促进肝星状细胞活化。

关键词：泡球蚴 Atg5 LC3 α-SMA

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泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响

中国血吸虫病防治杂志 2021年第1期33卷 54-61页

作者：高海军庞华胜孙旭冬张颋景涛王晓玲莫筱瑾胡薇国家卫生健康委员会包虫病防治研究重点实验室、西藏自治区疾病预防控制中心拉萨850000 兰州大学基础医学院中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、国家热带病研究中心、WHO热带病合作中心、科技部国家级热带病国际联合研究中心、国家卫生健康委员会寄生虫病原与媒介生物学重点实验室四川省甘孜藏族自治州疾病预防控制中心

目的评价泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响,为研究泡型棘球蚴病肝纤维化进展及其治疗方法提供参考。方法以泡球蚴感染长爪沙鼠血清(25、50、100μL)和泡球蚴及其生发层细胞、原头节分别对肝星状HSC-T6和LX-2细胞进行体外刺激48 h,... 详细信息

目的评价泡球蚴持续感染对小鼠肝脏纤维化的影响,为研究泡型棘球蚴病肝纤维化进展及其治疗方法提供参考。方法以泡球蚴感染长爪沙鼠血清(25、50、100μL)和泡球蚴及其生发层细胞、原头节分别对肝星状HSC-T6和LX-2细胞进行体外刺激48 h,采用CCK-8法检测细胞增殖,应用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测HSC-T6细胞培养上清中Ⅰ型胶原蛋白(collagen 1,Col1)和α-平滑肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达量。收集泡球蚴感染1、2、4、6、8个月小鼠血清和肝脏,分别采用ELISA法检测血清中Col1和α-SMA含量,采用天狼猩红染色法动态观察肝脏胶原纤维沉积情况。结果泡球蚴感染沙鼠血清体外可诱导HSC-T6和LX-2细胞增殖,不同血清剂量组细胞增殖率差异均有统计学意义(FHSC-T6=126.50、FLX-2=201.50,P均泡球蚴感染沙鼠血清体外刺激后,HSC-T6细胞培养上清中Col1和α-SMA蛋白含量均上升;且以100μL血清刺激后Col1和α-SMA含量最高,分别为(20.99±2.01)ng/m L和(305.52±16.67)pg/mL。泡球蚴及其生发层细胞、原头节均可体外诱导HSC-T6和LX-2细胞增殖,增殖率分别为(142.65±9.17)%和(189.99±7.75)%、(118.55±8.96)%和(122.54±0.21)%、(156.34±17.45)%和(160.59±31.41)%,不同刺激组细胞增殖率差异均有统计学意义(FHSC-T6=11.24、FLX-2=47.72,P均泡球蚴及其生发层细胞、原头节刺激后,HSC-T6细胞培养上清中Col1和α-SMA含量均增高;且以泡球蚴作用最为明显,Col1和α-SMA含量分别为(4.43±2.23)ng/mL和(285.20±90.67)pg/mL。泡球蚴感染后1~8个月,小鼠肝脏中胶原纤维沉积持续增加;小鼠血清中Col1水平在感染后6个月达最高,为(280.26±23.04)ng/mL;α-SMA水平在感染后8个月达最高,为(33.68±4.45)ng/mL。结论泡球蚴持续感染可促进肝星状细胞体外增殖及小鼠血清中Col1和α-SMA蛋白含量升高,引起小鼠肝脏中胶原纤维沉积增多。泡球蚴感染阶段是引起泡型棘球蚴病肝纤维化的关键期。

关键词：泡球蚴肝星状细胞胶原纤维原头节生发层细胞

泡球蚴感染对小鼠脾脏CD8^+T细胞免疫功能耗竭的影响

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中国血吸虫病防治杂志 2020年第6期32卷 591-597,604页

作者：侯昕伶李亮李玲慧李静王慧蒋铁民张瑞青邵英梅张传山新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院、省部共建中亚高发病成因与防治国家重点实验室、新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830054 新疆医科大学基础医学院新疆农业大学动物医学学院新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心肝胆包虫科

目的观察不同时间、不同剂量泡球蚴感染对小鼠脾脏CD8^+T细胞免疫功能耗竭的影响。方法采集泡球蚴原头蚴虫体,经肝门静脉建立低(50个原头蚴)、中(500个原头蚴)和高剂量(2000个原头蚴)泡球蚴感染小鼠模型,并设生理盐水对照组。于感染后... 详细信息

目的观察不同时间、不同剂量泡球蚴感染对小鼠脾脏CD8^+T细胞免疫功能耗竭的影响。方法采集泡球蚴原头蚴虫体,经肝门静脉建立低(50个原头蚴)、中(500个原头蚴)和高剂量(2000个原头蚴)泡球蚴感染小鼠模型,并设生理盐水对照组。于感染后早(2周)、中(12周)、晚期(24周)分别取小鼠脾脏,研磨分离淋巴细胞。流式细胞术检测不同实验组小鼠脾脏中记忆性CD8^+T细胞表型、免疫抑制性分子2B4表达水平,及其分泌γ⁃干扰素(IFN⁃γ)、肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白细胞介素⁃17A(IL⁃17A)和IL⁃10的能力。结果在感染早期,高剂量泡球蚴感染诱导小鼠脾脏CD8^+T细胞以中心记忆性表型为主,其比例为(35.50±2.00)%,显著高于对照组(25.90%±2.46%)(P泡球蚴感染均诱导小鼠脾脏CD8^+T细胞以效应记忆性表型为主,其比例分别为(25.70±4.12)%和(28.40±4.12)%,均显著高于对照组(10.50%±6.45%)(P均泡球蚴感染中期和晚期,中心记忆性CD8^+T细胞比例显著低于感染早期(P均泡球蚴感染晚期,效应记忆性CD8^+T细胞比例显著高于感染早期和中期(P均泡球蚴感染早期,脾脏CD8^+T细胞分泌IFN⁃γ和IL⁃17A能力显著增强,而高剂量泡球蚴感染虽然促进小鼠脾脏CD8^+T细胞分泌IFN⁃γ和TNF⁃α能力,但感染晚期其分泌IFN⁃γ和TNF⁃α能力显著低于早期和中期(P均泡球蚴感染晚期小鼠脾脏CD8^+T细胞表面免疫抑制性分子2B4呈高表达,其比例分别为(4.73±1.56)%和(4.94±1.90)%,均显著高于低剂量组(2.49%±0.58%)和对照组(2.92%±0.60%)(P均泡球蚴感染中期和晚期,机体利用自身免疫应答能力对虫体起到杀伤和清除;而高剂量泡球蚴感染晚期可诱导小鼠脾脏CD8^+T细胞上调2B4分子表达,导致免疫耗竭,造成慢性寄生。

关键词：多房棘球蚴病泡球蚴脾脏 CD8^+T细胞免疫耗竭 2B4 小鼠

泡球蚴感染小鼠肝脏中IL-10和TGF-β1的动态变化

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2012年第1期30卷 32-35页

作者：赵慧白雪聂晓涵王江涛王西完庞楠楠李玉娇马秀敏温浩丁剑冰新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830011 新疆医科大学乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础学院乌鲁木齐830011

目的观察泡球蚴感染小鼠肝脏中白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β1)的动态变化。方法将60只雌性BALB/c小鼠随机均分为实验组和对照组,实验组腹腔注射活原头节悬液0.2ml(约含400个原头节),对照组腹腔注射等量生理盐水,分别... 详细信息

目的观察泡球蚴感染小鼠肝脏中白细胞介素-10(IL-10)和转化生长因子-β(TGF-β1)的动态变化。方法将60只雌性BALB/c小鼠随机均分为实验组和对照组,实验组腹腔注射活原头节悬液0.2ml(约含400个原头节),对照组腹腔注射等量生理盐水,分别于接种后2、8、30、90、180和360d各处死5只小鼠,取肝组织进行病理学检查,并用免疫组织化学法检测肝组织中IL-10和TGF-β1的表达情况。结果实验组小鼠,腹腔和肝小叶出现多处直径不等的小囊泡,随感染时间的延长逐渐增多增大,与周围肝组织分界不明显。HE染色显示,实验组小鼠肝脏出现炎症细胞浸润,泡球蚴纤维囊壁与肝细胞和囊壁之间炎症反应带的形成等不同程度的病理改变;对照组小鼠肝小叶结构完整,偶见少量炎症细胞浸润,肝细胞胞浆疏松化和脂肪变性。实验组小鼠肝组织表达水平随着泡球蚴感染时间的延长而逐渐上升,感染后90d,实验组小鼠肝组织中IL-10和TCF-β1的表达水平均达高峰,细胞阳性率分别为(16.39±1.73)%和(23.69±2.29)%,与对照组比较[(1.09±0.10)%和(0.98±0.09)%]差异均有统计学意义(P泡球蚴感染中晚期,IL-10和TGF-β1表达水平均提高,其免疫抑制作用不利于清除和控制肝脏中泡球蚴。

关键词：泡球蚴 CD4^+CD25^+调节性T细胞细胞因子

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泡球蚴组织体外培养的生长发育观察

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2007年第2期25卷 93-96页

作者：张亚楼王婷婷周晓涛江涛齐新伟刘辉刘涛林仁勇温浩新疆医科大学一附院包虫病研究所乌鲁木齐830054

目的观察体外培养泡球蚴的生长发育特性。方法在肝癌细胞系条件下体外培养泡球蚴,用光学显微镜定期观察其数量、大小及形态变化,并绘制囊泡生长曲线。用电子显微镜观察囊泡形态结构。结果体外培养后泡球蚴增多,至22 d其数量相当于开始... 详细信息

目的观察体外培养泡球蚴的生长发育特性。方法在肝癌细胞系条件下体外培养泡球蚴,用光学显微镜定期观察其数量、大小及形态变化,并绘制囊泡生长曲线。用电子显微镜观察囊泡形态结构。结果体外培养后泡球蚴增多,至22 d其数量相当于开始培养第3～4天的6～7倍;囊泡具有出芽生殖能力。起初均为小囊泡,随时间增加,囊泡的直径也增加,在第22天时约30％为大的囊泡,70％为小的囊泡。发现介于原头蚴与囊泡之间的形态。结论肝癌细胞系体外培养的泡球蚴,生长发育较好且数量增加,可获得纯度较高的分泌或排泄抗原,该方法可为泡球蚴生物学及相关实验研究提供充分实验材料。

关键词：多房棘球绦虫体外培养泡球蚴

泡球蚴感染对Balb/c小鼠肝脏TGF-β1及其信号蛋白表达的影响

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免疫学杂志 2011年第3期27卷 215-220页

作者：李瑶林仁勇徐琦魏绪法王俊华张传山温浩丁剑冰新疆医科大学第一附属医院新疆包虫病基础医学重点实验室乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

目的观察泡球蚴(Em)感染对Balb/c小鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体TβRⅠ/Ⅱ和信号蛋白Smad2/3表达的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,泡状棘球蚴原头蚴混悬液肉眼直视注射肝脏诱导小鼠肝泡球蚴感染模型,对照组... 详细信息

目的观察泡球蚴(Em)感染对Balb/c小鼠肝脏转化生长因子β1(TGF-β1)及其受体TβRⅠ/Ⅱ和信号蛋白Smad2/3表达的影响。方法 Balb/c小鼠随机分为实验组和对照组,泡状棘球蚴原头蚴混悬液肉眼直视注射肝脏诱导小鼠肝泡球蚴感染模型,对照组以相同方法注射生理盐水。于感染第60天处死小鼠,取肝脏组织。用RT-PCR检测肝组织TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达;Western blot和免疫组织化学技术检测肝组织TGF-β1、TβRⅠ(TGFβⅠ型受体)、TβRⅡ(TGFβⅡ型受体)、Smad2/3在肝内的表达及定位;HE和Masson染色,光镜下观察肝组织病理改变和肝组织纤维化程度。结果与对照组小鼠比较,Em感染小鼠肝组织内TGF-β1、Smad2、Smad3 mRNA表达升高。Em感染后TGF-β1、Smad2/3蛋白表达增加。TGF-β1、TβRⅠ与Smad2/3阳性反应主要位于肝细胞浆,TβRⅡ主要在肝细胞膜表达,上述指标在两组间表达具有显著性差异。结论在Em感染的肝组织中TGF-β1、TβR及Smad2/3蛋白表达均增高。TGF-β1/Smads信号蛋白参与了Em感染致肝纤维化及肝损伤过程。Em感染可能通过TGF-β1/Smads通路介导宿主与寄生虫间的共生。

关键词：泡球蚴 TGF-β1 TβR TGF-β1/Smads信号

泡球蚴感染C57BL/6小鼠肝脏CD34表达的动态变化

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中国人兽共患病学报 2019年第3期35卷 234-238,244页

作者：周青杨雄峰韩欢欢郭黎姣姜慧娇王小义李林林廖振宇陈雪玲吴向未石河子大学医学院第一附属医院石河子832008 石河子大学医学院免疫学教研室石河子832002

目的观察泡球蚴(Em)感染C57BL/6小鼠肝脏CD34微血管密度(MVD)的动态变化。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组,实验组通过肉眼肝叶穿刺感染泡球蚴(Em),对照组通过注射等量PBS。分别于感染后30 d、60 d、90 d及120 d后取小鼠... 详细信息

目的观察泡球蚴(Em)感染C57BL/6小鼠肝脏CD34微血管密度(MVD)的动态变化。方法将40只C57BL/6小鼠随机分为实验组和对照组,实验组通过肉眼肝叶穿刺感染泡球蚴(Em),对照组通过注射等量PBS。分别于感染后30 d、60 d、90 d及120 d后取小鼠肝脏组织,苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏的病理组织学改变,免疫组织化学染色观察泡球蚴感染后CD34-MVD的动态改变。结果实验组泡球蚴组织各时间点中CD34-MVD分别为(39.10±11.84)/HP、(66.80±11.08)/HP、(111.20±8.00)/HP和(56.14±7.12)/HP,实验组泡球蚴周围肝组织分别为(1.14±0.82)/HP、(1.56±0.92)/HP、(2.32±1.43)/HP和(1.38±0.82)/HP;对照组分别为(1.00±0.94)/HP、(1.30±1.06)/HP、(2.00±1.15)/HP和(1.10±0.87)/HP。实验组与对照组比较,差异均有统计学意义(P泡球蚴组织内比较,差异有统计学意义(F=94.63,P泡球蚴周围肝组织内比较,差异无统计学意义(F=3.24,P>0.05);对照组内比较,差异无统计学意义(F=1.98,P>0.05)。结论泡球蚴浸润性生长过程中可能伴随着血管新生,血管新生可能为其生长重要的机制之一。

关键词：泡球蚴 CD34 MVD 动态变化