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达格列净在ox-LDL诱导形成的THP-1源性泡沫细胞焦亡中的作用

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安徽医科大学学报 2023年第8期58卷 1366-1373页

作者：龚才伟赵广建刘大男欧航君赵权威李辉贵州医科大学附属医院心内科贵阳550004 贵州医科大学医学科学研究所贵阳550004

目的探讨达格列净(DAPA)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成的人髓系白血病单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞焦亡中的作用。方法通过ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞构建THP-1源性泡沫细胞焦亡模型。设置实验分组为:空白对照(NC)组、ox-LDL组... 详细信息

目的探讨达格列净(DAPA)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成的人髓系白血病单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞焦亡中的作用。方法通过ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞构建THP-1源性泡沫细胞焦亡模型。设置实验分组为:空白对照(NC)组、ox-LDL组和药物干预(ox-LDL+DAPA)组;以油红O法检测巨噬细胞泡沫化水平;细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测DAPA对泡沫细胞活力的影响;Hoechst 33342/PI双染检测THP-1源性泡沫细胞焦亡;细胞免疫荧光双染检测DAPA对泡沫细胞焦亡中焦亡关键因子Caspase-1表达的影响;采用微量酶标法检测细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用qRT-PCR和Western blot分别检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-18、IL-1βmRNA和蛋白表达水平。结果CCK-8法检测结果提示DAPA的最佳干预浓度为10μmol/L;油红O染色结果示THP-1巨噬细胞源性泡沫细胞焦亡模型构建成功;与NC组比较,ox-LDL组中NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD、IL-18、IL-1β mRNA和蛋白表达水平均升高(P细胞数及LDH活性增加(P细胞胞质内的红色脂滴增多;予DAPA干预后,ox-LDL+DAPA组中前述焦亡相关因子的mRNA和蛋白表达水平均降低(均P细胞数及LDH活性降低(P细胞胞质内的红色脂滴减少(P泡沫细胞焦亡具有抑制作用。

关键词：达格列净人髓系白血病单核细胞泡沫细胞细胞焦亡氧化低密度脂蛋白

山绿茶皂苷BF523抑制氧化低密度脂蛋白诱导泡沫细胞形成的作用机制研究

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中国中药杂志 2019年第13期44卷 2680-2685页

作者：王凌潇吴臻刘孜渝靳凤玉赵云芳屠鹏飞郑姣北京中医药大学中药学院中药现代研究中心北京100029

动脉粥样硬化(AS)导致的心脑血管疾病严重危害人类健康。AS的发病过程十分复杂,其中氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱发的单核巨噬细胞向泡沫细胞的转化,被认为是AS过程中最重要的细胞学改变。课题组以'中药化学生物学'理论为指导,在系统表征... 详细信息

动脉粥样硬化(AS)导致的心脑血管疾病严重危害人类健康。AS的发病过程十分复杂,其中氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱发的单核巨噬细胞向泡沫细胞的转化,被认为是AS过程中最重要的细胞学改变。课题组以'中药化学生物学'理论为指导,在系统表征冬青属植物山绿茶化学成分的基础上,对其抗AS的药效物质进行系统的筛选,发现山绿茶皂苷BF523对泡沫细胞形成具有良好的抑制作用。因此该研究以山绿茶皂苷BF523为研究对象,研究其抑制泡沫细胞形成的作用机制,阐明山绿茶活性化合物改善AS的分子靶标。实验结果显示,山绿茶皂苷BF523显著抑制了ox LDL诱导的巨噬细胞泡沫化,并降低了巨噬细胞中脂质含量。其作用靶标是通过抑制清道夫受体CD36的mRNA和蛋白表达水平,抑制巨噬细胞对ox LDL的吞噬作用,从而抑制AS的发生和发展。该研究不仅阐明了山绿茶皂苷BF523抑制泡沫细胞形成的作用机制,也为'中药化学生物学'理论的充实提供有益探索。

关键词：山绿茶 BF523 泡沫细胞 CD36

益脉降脂汤含药血清对THP-1源性泡沫细胞增殖活性和胆固醇含量的影响

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中国老年学杂志 2022年第10期42卷 2447-2452页

作者：古展鑫卢梦月刘锐刘付昌盛刘华盛广西中医药大学研究生院广西南宁530000 广西中医药大学附属瑞康医院老年病科广西南宁530000

目的探讨益脉降脂汤大鼠含药血清对THP-1源性泡沫细胞增殖活性和细胞内胆固醇含量的影响。方法采用THP-1细胞为泡沫细胞建模来源,使用佛波酯(PMA)诱导分化成巨噬细胞,采用80 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导建立泡沫细胞模型;将细... 详细信息

目的探讨益脉降脂汤大鼠含药血清对THP-1源性泡沫细胞增殖活性和细胞内胆固醇含量的影响。方法采用THP-1细胞为泡沫细胞建模来源,使用佛波酯(PMA)诱导分化成巨噬细胞,采用80 mg/L氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导建立泡沫细胞模型;将细胞分为巨噬细胞组、模型组、阿托伐他汀(西药)组及益脉降脂汤(中药)低、中、高剂量组,其中巨噬细胞组和模型组使用10%大鼠正常空白血清干预,其余各组使用相应含药血清干预,干预12、24、48 h后用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖活性,同时检测各组含药血清干预泡沫细胞后细胞内总胆固醇(TC)含量;油红O染色观察各组细胞脂质蓄积情况。结果巨噬细胞诱导及泡沫细胞模型建立成功;MTT法检测细胞增殖活性结果显示,益脉降脂汤含药血清干预12、24、48 h后,与巨噬细胞组相比,模型组OD值显著减少(P细胞组相比,模型组干预不同时间点细胞内TC含量显著增高(P细胞内TC含量明显降低(P泡沫细胞的脂质蓄积明显减少(P泡沫细胞生存活性,减少泡沫细胞凋亡、改善泡沫细胞胆固醇蓄积的作用。

关键词：益脉降脂汤泡沫细胞含药血清总胆固醇(TC)

胡黄连苷Ⅱ通过激活自噬作用抑制泡沫细胞的形成与炎症反应

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中国免疫学杂志 2022年第3期38卷 313-318页

作者：王明霞蔡雪峰林静黄宗文(指导) 海南省安宁医院神经内科和老年精神科海口571100

目的:从巨噬细胞泡沫化角度探讨胡黄连苷Ⅱ抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:CCK-8法确定胡黄连苷Ⅱ对细胞无毒性的浓度;氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导与药物干预后,采用油红O染色观察泡沫细胞的形成,酶法检测细胞内胆固醇水平;激光共聚... 详细信息

目的:从巨噬细胞泡沫化角度探讨胡黄连苷Ⅱ抗动脉粥样硬化的作用机制。方法:CCK-8法确定胡黄连苷Ⅱ对细胞无毒性的浓度;氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导与药物干预后,采用油红O染色观察泡沫细胞的形成,酶法检测细胞内胆固醇水平;激光共聚焦显微镜观察胡黄连苷Ⅱ对巨噬细胞自噬的影响。采用Western blot检测巨噬细胞ABCA1、ABCG1、NLRP3、ASC的蛋白表达水平。结果:胡黄连苷Ⅱ对ox-LDL诱导的THP-1源巨噬细胞在0~100μmol/L的范围内无细胞毒性。各浓度胡黄连苷Ⅱ的干预均可抑制ox-LDL诱导的泡沫细胞形成。胡黄连苷Ⅱ浓度依赖性降低细胞内总胆固醇、胆固醇酯和胆固醇酯化率,显著增加ABCA1/ABCG1、LC3Ⅱ/Ⅰ和beclin1的表达;减少TNF-α、IL-1β和IL-6等炎症因子的表达,显著降低NLRP3、ASC和caspase-1的表达。结论:胡黄连苷Ⅱ显著抑制巨噬细胞泡沫化,相关的作用机制可能是通过促进巨噬细胞自噬,上调巨噬细胞ABCA1/ABCG1表达,抑制NLRP3炎症小体的激活,从而促进巨噬细胞内胆固醇外排,抑制炎症反应。

关键词：泡沫细胞胆固醇炎症因子动脉粥样硬化

猫耳刺皂苷ilexpernoside C抑制低密度脂蛋白多聚体诱导泡沫细胞形成的活性及机制研究

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中国中药杂志 2016年第3期41卷 498-503页

作者：伦琦星刘炳琳李军赵云芳郑姣屠鹏飞北京中医药大学中药现代研究中心北京100029 北京中医药大学中药学院北京100102

巨噬细胞来源的泡沫细胞在血管壁上的堆积,是动脉粥样硬化的主要成因。该实验构建了低密度脂蛋白多聚体(LDL aggregates)诱导的泡沫细胞模型,对冬青属植物猫耳刺分离的化合物进行体外活性研究,发现ilexpernoside C(IC1)能显著抑制泡沫... 详细信息

巨噬细胞来源的泡沫细胞在血管壁上的堆积,是动脉粥样硬化的主要成因。该实验构建了低密度脂蛋白多聚体(LDL aggregates)诱导的泡沫细胞模型,对冬青属植物猫耳刺分离的化合物进行体外活性研究,发现ilexpernoside C(IC1)能显著抑制泡沫细胞的形成。通过对泡沫细胞形成相关受体的分析发现,IC1能显著抑制低密度脂蛋白相关受体1(LRP1)的表达。因此,该研究认为皂苷IC1通过抑制巨噬细胞的胞吞作用,从而抑制泡沫细胞的形成,使其可能成为一种抗动脉粥样硬化的潜在药物。

关键词：猫耳刺 ilexpernoside C 泡沫细胞低密度脂蛋白多聚体

结核分枝杆菌介导泡沫细胞形成机制的研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2020年第2期40卷 154-159页

作者：王鹏尹斌苏映军贾赤宇厦门大学附属翔安医院烧伤整形科 361102

泡沫细胞(foamy macrophages,FM)又称泡沫样巨噬细胞,是指吞噬了脂质的单核细胞或巨噬细胞,是一种细胞胞质中富含脂滴的特殊表型炎症细胞。在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)所致的肉芽肿、结核性创面等疾病中,FM不仅表... 详细信息

泡沫细胞(foamy macrophages,FM)又称泡沫样巨噬细胞,是指吞噬了脂质的单核细胞或巨噬细胞,是一种细胞胞质中富含脂滴的特殊表型炎症细胞。在结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)所致的肉芽肿、结核性创面等疾病中,FM不仅表现为对免疫反应的抑制,并且能够影响疾病的预后和转归。由Mtb感染所致的FM形成机制存在一定的特异性,这种差异可能是其在胞内长期生存并影响疾病转归的重要因素。因此,研究Mtb介导的FM的形成机制,有助于进一步揭示该疾病的病理演变过程,并为其进一步精准治疗提供新思路。本文就近年来有关Mtb介导的FM的形成机制做一综述。

关键词：结核分枝杆菌泡沫细胞形成机制

丹皮酚通过miR-145抑制CD40/NF-κB通路减轻动脉粥样硬化泡沫细胞炎症机制研究

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丹皮酚通过miR-145抑制CD40/NF-κB通路减轻动脉粥样硬化泡沫细胞...

作者：刘玲安徽中医药大学

学位级别：硕士

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是多种因素导致的慢性炎症性血管疾病,血管壁上泡沫细胞形成是AS斑块形成早期阶段,泡沫细胞分泌的炎症因子可以募集炎症细胞聚集,进一步诱导AS斑块的形成及加重AS炎症反应。ox-LDL过度被巨噬细胞表面... 详细信息

动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)是多种因素导致的慢性炎症性血管疾病,血管壁上泡沫细胞形成是AS斑块形成早期阶段,泡沫细胞分泌的炎症因子可以募集炎症细胞聚集,进一步诱导AS斑块的形成及加重AS炎症反应。ox-LDL过度被巨噬细胞表面受体摄取,是形成泡沫细胞主要原因之一。micro RNAs在心血管疾病有特异性表达谱,参与多种生理,病理反应。mi R-145是抗炎mi RNA之一,mi R-145可能调控下游靶基因白细胞分化抗原(CD40)等炎症靶基因延缓AS的发生发展,因此mi R-145作为CD40上游的调控因子,可能是治疗AS新的靶点。丹皮酚(Paeonol,Pae)是从中药植物牡丹的干燥根皮中提取纯化得到的主要活性之一,具有抗炎、降血脂、活血化瘀等作用,前期课题组已有研究证实Pae可以抑制AS的炎症反应,然而该抗炎的作用是否与Pae通过调控泡沫细胞mi R-145水平有关尚需进一步探究。首先在体内实验中,我们用高脂饲料复制Apo E小鼠AS模型,观察Pae的治疗作用及对小鼠主动脉中巨噬细胞源性泡沫细胞中CD40蛋白及mi R-145表达的影响。在体外实验中,用ox-LDL作为诱导剂,使巨噬细胞诱导成泡沫细胞,观察泡沫细胞mi R-145及CD40蛋白表达情况以及丹皮酚的干预后的表达水平,从基因水平阐明Pae治疗AS提供新靶点和科学依据。基于以上研究背景,我们提出以下科学假说丹皮酚通过上调mi R-145,抑制CD40/NF-κB通路,减轻动脉粥样硬化小鼠血管巨噬细胞源性泡沫细胞炎症反应,发挥抗动脉粥样硬化的作用机制。目的探讨丹皮酚通过调控mi R-145,影响CD40/NF-κB通路,抑制动脉粥样硬化小鼠血管巨噬细胞源性泡沫细胞炎症反应,发挥抗动脉粥样硬化的作用机制。方法高脂饮食喂养Apo E小鼠20周复制动脉粥样硬化模型,造模成功后,给予丹皮酚灌胃,分为正常对照组、模型组、丹皮酚中剂量组(200 mg/kg)、丹皮酚高剂量组(300 mg/kg);油红O染色观察主动脉斑块病理形态;酶联免疫吸附法(ELISA)测小鼠血清白介素-1(Interleukin-1,IL-1)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(Tumour necrosis factor-α,TNF-α);激光共聚焦显微镜测主动脉蛋白CD40与CD36共定位;实时荧光定量PCR测主动脉mi R-145表达情况。氧化低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)刺激RAW264.7细胞建立巨噬细胞源性泡沫细胞炎症模型,将mi R-145模拟剂(mi R-145 mimic)、mi R-145抑制剂(mi R-145 inhibitor)转染入细胞,分为空白组、模型组、丹皮酚(60μmol/L,Pae)组、mi R-145 mimic组、mi R-145 inhibitor+Pae组、mi R-145inhibitor组、mi R-145 inhibitor+Pae组。油红O染色观察细胞荷脂情况,Western blot测蛋白CD40和核转录因子-κB(nuclear factorκB,NF-κB)磷酸化水平,ELISA测TNF-α、IL-1、IL-6。结果1.Pae降低Apo E小鼠主动脉斑块面积的形成及主动脉泡沫细胞炎症因子的表达1.1 Pae降低Apo E小鼠主动脉斑块面积的形成用高脂饮食喂养Apo E复制AS模型,Pae可以减轻AS小鼠主动脉斑块面积的形成。1.2 Pae降低Apo E小鼠主动脉泡沫细胞炎症因子的表达Pae降低Apo E小鼠CD36蛋白与CD40蛋白共定位系数;降低Apo E小鼠血清炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α的水平;Pae可升高Apo E小鼠主动脉mi R-145的含量。2.ox-LDL诱导巨噬细胞成泡沫细胞2.1 ox-LDL对巨噬细胞毒性的影响在ox-LDL浓度为80 mg/L时,与空白组相比有显著性差异(P细胞,油红O染色显示巨噬细胞内有明显的脂滴,表面巨噬细胞源性泡沫细胞模型建立成功。2.2 ox-LDL对巨噬细胞炎症反应的影响ox-LDL浓度为80 mg/L时,巨噬细胞分泌的炎症因子IL-1、IL-6、TNF-α与空白组相比明显增多(P细胞表面CD36蛋白表达的影响ox-LDL浓度为80 mg/L时,CD36蛋白的荧光强度明显升高(P细胞源性泡沫细胞模型建立成功。3.Pae上调巨噬细胞源性泡沫细胞中mi R-145的表达通过RT-PCR检测mi R-145水平,验证诱导后的巨噬细胞源性泡沫细胞的表达情况及丹皮酚对其的作用。结果表明:与空白组相比,模型组巨噬细胞源性泡沫细胞低表达mi R-145,丹皮酚作用下的细胞与模型组相比m

关键词：动脉粥样硬化丹皮酚 miR-145 泡沫细胞炎症

免疫荧光双重染色对临床结核性创面石蜡组织中泡沫细胞及结核分枝杆菌显示效果的比较分析

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中华烧伤杂志 2021年第2期37卷 157-163页

作者：王鹏尹斌贾赤宇鲍武苏映军洪超厦门大学医学院 361102 厦门大学附属翔安医院烧伤整形与创面修复科 361102 厦门市疾病预防控制中心 361021

目的观察免疫荧光双重染色对临床结核性创面石蜡组织中泡沫细胞及结核分枝杆菌(MTB)的显示效果,并与3种常规染色方法进行比较。方法采用实验研究方法。2019年4月—2020年5月,厦门大学附属翔安医院烧伤整形与创面修复科收治10例符合入选... 详细信息

目的观察免疫荧光双重染色对临床结核性创面石蜡组织中泡沫细胞及结核分枝杆菌(MTB)的显示效果,并与3种常规染色方法进行比较。方法采用实验研究方法。2019年4月—2020年5月,厦门大学附属翔安医院烧伤整形与创面修复科收治10例符合入选标准的结核性创面患者(男女各5例,年龄28~77岁),取其扩大清创术中切取并于该院病理科保存的创面石蜡组织进行研究。将每例患者创面石蜡组织制成40张切片,分别进行苏木精-伊红(HE)染色、免疫组织化学染色、抗酸-免疫组织化学染色、免疫荧光双重染色,每种方法10张。计算4种染色方法切片剔除率;观察4种染色方法的创面肉芽肿组织识别检出情况并计数,观察4种染色方法的创面组织泡沫细胞识别检出情况;比较4种染色方法的创面肉芽肿组织及非肉芽肿组织中MTB检出情况;比较抗酸-免疫组织化学染色和免疫荧光双重染色的创面肉芽肿组织及非肉芽肿组织中泡沫细胞的亚型分型及其分布、MTB检出率,创面组织中泡沫细胞形态清晰度以及MTB与泡沫细胞的非特异性着色率和阳性反应丢失率。对数据行Fisher确切概率法检验、单因素方差分析、独立样本t检验、Wilcoxon符号秩检验。结果HE染色、免疫组织化学染色、抗酸-免疫组织化学染色、免疫荧光双重染色切片剔除率分别为3%(3/100)、1%(1/100)、6%(6/100)、2%(2/100),总体比较差异无统计学意义(P=0.26)。4种染色方法均能识别创面肉芽肿组织,肉芽肿结构数相近(F=1.284,P=0.28)。4种染色方法均能识别创面组织泡沫细胞,每张切片均检出。HE染色和免疫组织化学染色创面肉芽肿组织与非肉芽肿组织中均未见MTB;抗酸-免疫组织化学染色和免疫荧光双重染色均显示MTB在创面肉芽肿组织及非肉芽肿组织中均有分布,多数MTB分布于创面肉芽肿组织中。抗酸-免疫组织化学染色不能区分泡沫细胞是否吞噬MTB;免疫荧光双重染色显示吞噬了MTB的泡沫细胞多分布在创面肉芽肿组织中,未吞噬MTB的泡沫细胞多分布在创面非肉芽肿组织中。免疫荧光双重染色的创面肉芽肿组织及非肉芽肿组织MTB检出率分别为(89.00±0.08)%、(82.67±0.05)%,明显高于抗酸-免疫组织化学染色的(54.56±0.14)%、(44.44±0.13)%(t=-12.495、-7.961,P泡沫细胞清晰度更佳(Z=-3.162,P泡沫细胞非特异性着色率和阳性反应丢失率分别为(9.11±0.07)%、(9.22±0.07)%,明显低于抗酸-免疫组织化学染色的(20.67±0.06)%、(44.00±0.12)%(t=4.569、15.519,P泡沫细胞在临床结核性创面石蜡组织中的共定位显像。

关键词：结核,皮肤泡沫细胞分枝杆菌,结核石蜡切片免疫荧光双重染色染色效果

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泡沫细胞胆固醇逆向转运机制及药物干预研究

中华内科杂志 2010年第8期49卷 696-699页

作者：吕湛苟连平陈玲谢彬秦俭川北医学院附属医院心内科四川南充637000 重庆医科大学附属第一医院心内科

目的人THP-1单核/巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨罗格列酮、洛伐他汀对三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABC）A1表达和细胞内胆固醇含量的影响.方法低密度脂蛋白（LDL）提取,Cu^2＋氧化法获得氧化型LDL（ox-LDL）.建立泡沫细胞模型.W... 详细信息

目的人THP-1单核/巨噬细胞源性泡沫细胞为研究对象,探讨罗格列酮、洛伐他汀对三磷酸腺苷结合盒转运蛋白（ABC）A1表达和细胞内胆固醇含量的影响.方法低密度脂蛋白（LDL）提取,Cu^2＋氧化法获得氧化型LDL（ox-LDL）.建立泡沫细胞模型.Western blot检测洛伐他汀、罗格列酮对THP-1单核/巨噬细胞ABCA1蛋白表达的影响.泡沫细胞分9组,分别给予相应的干预因子,培养24 h,检测各组细胞内胆固醇含量.结果与对照组比较,洛伐他汀组、罗格列酮组、各ABCA1单克隆抗体预处理组细胞内胆固醇含量无明显变化（P〉0.05）;而载脂蛋白（Apo）A-I组、洛伐他汀＋ApoA-I组、罗格列酮＋ApoA-I组显著降低（P〈0.05）.结论胆固醇逆向转运需在ApoA-I和ABCA1蛋白共同参与下完成,并能降低细胞内胆固醇含量.罗格列酮能通过促进ABCA1蛋白表达介导胆固醇向胞外转运,使细胞内胆固醇含量进一步降低.

关键词：泡沫细胞胆固醇动脉粥样硬化