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D-4F对脊髓损伤后泡沫型巨噬细胞脂质代谢的作用和机制研究

D-4F对脊髓损伤后泡沫型巨噬细胞脂质代谢的作用和机制研究

引用

作者：李金鑫安徽医科大学

学位级别：硕士

目的:本研究旨在探讨D-4F是否可以促进小鼠脊髓损伤后神经功能的恢复及其可能的治疗机制。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组和治疗组,并利用细钳钳夹小鼠胸段(T10)脊髓构建小鼠脊髓损伤模型。免疫细胞化学染色用来评估... 详细信息

目的:本研究旨在探讨D-4F是否可以促进小鼠脊髓损伤后神经功能的恢复及其可能的治疗机制。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组和治疗组,并利用细钳钳夹小鼠胸段(T10)脊髓构建小鼠脊髓损伤模型。免疫细胞化学染色用来评估巨噬细胞在体外实验中,分别在对照组(只加荧光髓磷脂),D-4F组,以及D-4F加ABCA1通道抑制剂组中,在不同的浓度下的髓磷脂排出情况;组织免疫荧光染色用于检测脊髓损伤前和损伤后3、7、14、28天髓磷脂在损伤部位的累积及ABCA1的表达情况,以及损伤后28天的神经恢复情况;油红染色用于检测巨噬细胞在体外实验中,分别在对照组(只加髓磷脂),D-4F组,以及D-4F加ABCA1通道抑制剂组,在不同的浓度下的髓磷脂排出情况,以及体内实验中脊髓损伤后3、7、14、28天髓磷脂在损伤部位的累积情况;蛋白质印迹法用于检测脊髓损伤前和损伤后3、7、14、28天ABCA1的表达情况,以及巨噬细胞在对照组,髓磷脂组,髓磷脂加D-4F组,D-4F组中的髓磷脂排出及ABCA1的表达情况;小鼠运动功能评分用于评估小鼠脊髓损伤后神经功能的恢复情况。实验对象的随机分配、小鼠脊髓损伤模型的建立、数据采集、数据分析等研究过程均遵守“盲法”。结果:(1)RAW 264.7细胞吞噬髓磷脂碎片24小时,当髓磷脂碎片浓度为0.5 mg/ml时吞噬达到饱和,而D-4F可以促进泡沫型巨噬细胞髓磷脂碎片的排出,其作用的最佳浓度可能为50μg/ml,并且具有统计学意义(P泡沫型巨噬细胞的减少,并且具有统计学意义(P泡沫型巨噬细胞的脂质外排中发挥作用。并且具有统计学意义(P细胞上ABCA1的表达,间接证明了D-4F可能通过ABCA1通路来促进泡沫型巨噬细胞对髓磷脂碎片的清除,并且差异具有统计学意义(P泡沫型巨噬细胞的减少、神经保护和损伤后运动功能的恢复。这些发现为脊髓损伤的治疗提供了新的研究方向和证据。

关键词： D-4F 脊髓损伤泡沫型巨噬细胞髓鞘碎片 ABCA1

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海藻糖促进脊髓损伤后髓鞘碎片清除和运动功能恢复的作用机制研究

海藻糖促进脊髓损伤后髓鞘碎片清除和运动功能恢复的作用机制研究

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作者：陈奕豪安徽医科大学

学位级别：硕士

背景:脊髓损伤后（Spinal cord injury,SCI）,脊髓发生脱髓鞘反应,产生大量髓磷脂碎片堆积在损伤部位。这些髓磷脂碎片的存在可以诱导免疫细胞释放多种炎症因子从而促进炎症反应的发生,并且可以抑制少突胶质细胞增生和纤维瘢痕的形成,... 详细信息

背景:脊髓损伤后（Spinal cord injury,SCI）,脊髓发生脱髓鞘反应,产生大量髓磷脂碎片堆积在损伤部位。这些髓磷脂碎片的存在可以诱导免疫细胞释放多种炎症因子从而促进炎症反应的发生,并且可以抑制少突胶质细胞增生和纤维瘢痕的形成,这将阻碍神经轴突再生影响运动感觉功能的恢复。因此,有效快速的清除髓磷脂碎片将对脊髓损伤的预后至关重要。单核细胞来源的血源性巨噬细胞（BDMs）是参与髓磷脂碎片吞噬降解的主要细胞类型。但是巨噬细胞吞噬大量的髓磷脂碎片后会形成泡沫型巨噬细胞,导致巨噬细胞迁移功能下降,炎症因子释放增多。在动脉粥样硬化中,巨噬细胞吞噬外源性脂质也发生同样的反应,但在海藻糖作用下增强巨噬细胞自噬溶酶体功能后泡沫细胞形成下降,炎症因子释放减少导致粥样斑块形成减缓,延缓了动脉粥样硬化的进展。本研究旨在探究脊髓损伤后,海藻糖对巨噬细胞自噬反应的影响,是否减少泡沫型巨噬细胞的形成,以及对脊髓损伤预后的作用。方法:将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、脊髓损伤组和海藻糖治疗组,并构建小鼠脊髓挫伤模型。组织免疫荧光染色用于观察每组在脊髓损伤后降解的髓磷脂碱性蛋白（degraded myelin basic protein,d MBP）被F4/80的巨噬细胞吞噬情况和髓磷脂在损伤核心的清除情况。每组的巨噬细胞的自噬溶酶体功能在脊髓损伤后的变化情况和神经轴突运动功能的恢复情况,以及纤维瘢痕的形成情况。体外实验使用RAW264.7巨噬细胞,细胞免疫荧光染色探究海藻糖对巨噬细胞吞噬和排出髓磷脂的情况,海藻糖对吞噬髓磷脂的巨噬细胞的自噬功能的影响。最后在体内体外使用ORO染色检测海藻糖对泡沫型巨噬细胞影响。结果:首先,我们验证了脊髓损伤7天时,海藻糖使F4/80巨噬细胞吞噬髓磷脂碎片增多,加速损伤核心的髓磷脂碎片的清除。脊髓损伤7天之后,巨噬细胞的自噬和溶酶体功能受到抑制,导致巨噬细胞降解和排出所吞噬的脂质的能力下降,使巨噬细胞内脂质堆积进而形成泡沫型巨噬细胞。我们研究发现海藻糖可以在脊髓损伤后提高巨噬细胞的自噬和溶酶体功能,增强巨噬细胞降解脂质的能力,进而使泡沫型巨噬细胞形成减少。髓磷脂碎片的清除和泡沫型巨噬细胞形成的下降导致炎症反应的减少,这可能抑制了纤维瘢痕的形成,导致神经轴突的生长和运动功能的恢复。体外实验验证了海藻糖可以增强巨噬细胞吞噬髓磷脂的功能和对胞内过多脂质的排出的能力,而且也增强了巨噬细胞的自噬功能。最后我们在体内外都发现海藻糖可以在脊髓损伤后增强转录因子EB（TFEB）的表达和核定位,而TFEB正是调控自噬溶酶体基因表达的转录因子,这可能是海藻糖增强巨噬细胞自噬溶酶体的功能的原因。结论:我们的研究进一步探讨了海藻糖对于脊髓损伤恢复的作用。海藻糖可以促进损伤核心巨噬细胞清除髓鞘碎片、神经再生和损伤后运动功能的恢复,以及减轻炎症反应、减少泡沫型巨噬细胞和纤维瘢痕的形成。这些发现为脊髓损伤的治疗提供了新的研究方向和证据。

关键词：海藻糖脊髓损伤泡沫型巨噬细胞自噬髓鞘碎片

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