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泛素特异性肽酶22调控乙型肝炎病毒X蛋白水平及功能

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中华微生物学和免疫学杂志 2022年第6期42卷 434-442页

作者：周世颖吴琼张翼张璐林旭陈婉南福建医科大学基础医学院消化道恶性肿瘤教育部重点实验室福建省肿瘤微生物学重点实验室福州350122

目的探究泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)与乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)相互作用对HBx蛋白水平及其生物学功能的影响。方法通过GST pull-down、免疫共沉淀以及激光共聚焦试验检测HBx... 详细信息

目的探究泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)与乙型肝炎病毒X蛋白(hepatitis B virus X protein,HBx)相互作用对HBx蛋白水平及其生物学功能的影响。方法通过GST pull-down、免疫共沉淀以及激光共聚焦试验检测HBx与USP22的相互作用。瞬时转染USP22真核表达质粒或干扰USP22表达的siRNA,Western blot检测肝细胞中HBx蛋白表达水平的变化。以环己酰亚胺(cycloheximide,CHX)、蛋白酶体抑制剂MG132(carbobenzoxy-Leu-Leu-leucinal,MG132)分别处理转染后的细胞,检测HBx蛋白的降解速率。进一步通过细胞内泛素化试验检测USP22对HBx泛素化的影响,明确USP22影响HBx蛋白稳定性的具体机制。最后,以双荧光素酶报告试验和平板克隆试验检测USP22对HBx生物学功能的影响。结果USP22与HBx存在相互作用。USP22显著增加HBx蛋白稳定性,并通过去除HBx的泛素化抑制HBx通过蛋白酶体降解,进而增强HBx的生物学功能。结论USP22抑制HBx通过泛素依赖-蛋白酶体途径降解,增强HBx蛋白稳定性并促进HBx功能。

关键词：乙型肝炎病毒X蛋白泛素特异性肽酶22 泛素蛋白酶体蛋白降解

泛素特异性肽酶22诱导胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的观察

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中国临床药理学与治疗学 2017年第4期22卷 412-417页

作者：王宛明董贾中管淑敏河南省濮阳市人民医院消化科

目的:探讨泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)在胰腺癌吉西他滨耐药中的作用。方法:采用Western blot检测吉西他滨诱导不同胰腺癌细胞株对USP22表达情况的影响。利用胰腺癌SW1990亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞... 详细信息

目的:探讨泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)在胰腺癌吉西他滨耐药中的作用。方法:采用Western blot检测吉西他滨诱导不同胰腺癌细胞株对USP22表达情况的影响。利用胰腺癌SW1990亲本细胞株,构建吉西他滨耐药细胞株SW1990/Gem及USP22siRNA稳定表达细胞株(表示为SW1990-sh USP22、SW1990/Gem-sh USP22);采用CCK-8实验检测抑制USP22表达对胰腺癌细胞吉西他滨敏感性的影响。结果:1μmol/L或10μmol/吉西他滨诱导人胰腺癌PANC-1和SW1990细胞后,USP22表达均增高(P22蛋白表达显著高于SW1990亲本细胞株(P22 siRNA稳定表达细胞株SW1990-sh USP22,SW1990/Gem-sh USP22中USP22蛋白表达水平与相应对照组SW1990-NC,SW1990/Gem-NC相比,分别显著下调约65%(P22组对吉西他滨的IC50分别为(1 850.96±87.37)nmol/L和(534.83±49.68)nmol/L,差异具有统计学意义(P22组对吉西他滨的IC50为(2 157.08±120.32)nmol/L,与SW1990/Gem-NC组(29 850.96±345.78)nmol/L相比,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:吉西他滨可诱导胰腺癌细胞USP22表达增高。抑制USP22表达可增加胰腺癌细胞对吉西他滨的药物敏感性,并可有效逆转胰腺癌细胞对吉西他滨的耐药。本研究揭示胰腺癌细胞对吉西他滨耐药的新机制,为改善胰腺癌个体化化疗方案提供新思路。

关键词：泛素特异性肽酶22 胰腺癌吉西他滨耐药

泛素特异性肽酶22、滋养层细胞表面抗原-2表达与鼻咽癌临床病理特征的关系及对预后的影响

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安徽医药 2022年第5期26卷 1011-1015页

作者：王在凡王蕊李海涛安阳市眼科医院耳鼻喉科河南安阳455000 河南医学高等专科学校河南新郑451191

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)、滋养层细胞表面抗原-2(Trop2)表达与鼻咽癌(NPC)病人临床病理特征的关系及对预后的影响。方法选取2014年1月至2016年6月安阳市眼科医院NPC病人及其组织标本92例作为观察组,另选取同期慢性鼻咽炎病人... 详细信息

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)、滋养层细胞表面抗原-2(Trop2)表达与鼻咽癌(NPC)病人临床病理特征的关系及对预后的影响。方法选取2014年1月至2016年6月安阳市眼科医院NPC病人及其组织标本92例作为观察组,另选取同期慢性鼻咽炎病人及其组织标本95例作为对照组,检测对比两组USP22、Trop2蛋白表达水平及USP22、Trop2诊断价值。比较不同临床病理特征病人USP22、Trop2蛋白表达水平及其与NPC临床病理特征关联性。并对比不同USP22、Trop2表达水平病人3年无进展生存期及总生存期。结果观察组USP22(59.78%比12.63%)、Trop2(66.30%比15.79%)蛋白阳性表达率高于对照组(P22、Trop2蛋白表达的影响因素或关联因素(P22、Trop2联合诊断准确性、敏感性高于二者单一诊断;TNM分期Ⅲ~Ⅳ期、低分化、淋巴结转移的NPC病人组织标本中USP22、Trop2蛋白阳性表达率高于TNM分期Ⅰ~Ⅱ期、中高分化、无淋巴结转移者(P22、Trop2蛋白水平与TNM分期、淋巴结转移呈正相关,与分化程度呈负相关(P22、Trop2蛋白阳性表达病人3年总生存率、无进展生存率低于阴性表达病人(P22蛋白、Trop2蛋白高危组、低危组生存率对比,差异有统计学意义(P22蛋白表达水平在NPC病人中呈异常高表达状态,与TNM分期、分化程度、淋巴结转移存在一定关联性,加强Trop2、USP22蛋白表达水平联合检测,对早期识别NPC、评估预后具有重要指导意义。

关键词：鼻咽肿瘤泛素特异性肽酶22 滋养层细胞表面抗原-2 病理特征无进展生存期生存曲线 ROC

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泛素特异性肽酶22经Wnt/β-catenin通路调控结直肠癌化疗耐药的机制研究

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中华普通外科学文献（电子版） 2019年第2期13卷 109-113页

作者：李风伟槐敬培河北省衡水市第四人民医院急诊科

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)作用于Wnt/β-catenin信号通路参与结直肠癌的发生和化疗耐药的分子机制。方法采用氟尿嘧啶(5-Fu)处理结直肠癌细胞株HT-29,建立耐药细胞株HT-29/5-Fu;构建USP22 siRNA稳定表达细胞株(表示为HT-29-sh US... 详细信息

目的探讨泛素特异性肽酶22(USP22)作用于Wnt/β-catenin信号通路参与结直肠癌的发生和化疗耐药的分子机制。方法采用氟尿嘧啶(5-Fu)处理结直肠癌细胞株HT-29,建立耐药细胞株HT-29/5-Fu;构建USP22 siRNA稳定表达细胞株(表示为HT-29-sh USP22、HT-29/5-Fu-sh USP22)。CCK-8法检测HT-29/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性、抑制USP22表达后结直肠癌细胞对5-Fu敏感性的影响;采用Western blotting检测不同质量浓度5-Fu诱导下HT-29细胞中USP22蛋白表达,HT-29和HT-29/5-Fu细胞中USP22和β-catenin蛋白表达,以及抑制USP22表达对结直肠癌细胞USP22、β-catenin表达的影响。结果 (1)HT-29与HT-29/5-Fu细胞对5-Fu的IC_(50)值分别为(1.58±0.23)mg/L和(14.58±0.94)mg/L,其中HT-29/5-Fu细胞对5-Fu的敏感性显著下降(n=6,t=8.476,P22蛋白表达水平(USP22/β-actin)显著升高(0.5 mg/L vs 0 mg/L:t=7.618,P22蛋白表达水平为0.92±0.11,显著高于HT-29组的0.18±0.06(t=7.618,P22组对5-Fu的IC_(50)为(0.25±0.23)mg/L,显著低于HT-29组(t=6.662,P22组对5-Fu的IC_(50)为(1.36±0.14)mg/L,显著低于HT-29/5-Fu组(t=7.002,P0.05),抑制USP22表达可增强结直肠癌细胞HT-29对5-Fu的敏感性。(4)HT-29-sh USP22组的USP22蛋白表达水平为0.07±0.01,与HT-29组相比下调(t=7.105,P22组的USP22蛋白表达水平为0.33±0.02,与HT-29/5-Fu组相比,USP22蛋白表达水平下调(t=6.153,P22、HT-29/5-Fu-sh USP22中β-catenin蛋白表达水平与相应对照组HT-29、HT-29/5-Fu相比显著下调(HT-29-sh USP22 vs HT-29:t=8.823,P22vs HT-29/5-Fu:t=7.656,P22表达增高。抑制USP22表达可增加结直肠癌细胞对5-Fu的药物敏感性,其机制可能是抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而有效逆转结直肠癌细胞对5-Fu的耐药。

关键词：结直肠肿瘤泛素特异性肽酶22 Wnt/β-catenin信号通路抗药性,肿瘤

沉默泛素特异性肽酶22对人胃癌细胞增殖的影响及其机制

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中华实验外科杂志 2018年第1期35卷 85-88页

作者：王春芳刘兵孙光徐瑜杰彭勃海南省海口市人民医院胃肠外科 570208

目的探讨泛素特异性肽酶22（USP22）对人胃癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法设计、合成针对USP22特异性小干扰RNA（siRNA）片段，通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot筛选抑制效率最高的siRNA片段以备后续实验... 详细信息

目的探讨泛素特异性肽酶22（USP22）对人胃癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法设计、合成针对USP22特异性小干扰RNA（siRNA）片段，通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot筛选抑制效率最高的siRNA片段以备后续实验；抑制USP22后，噻唑蓝（MTT）法检测胃癌细胞SGC-7901细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期及凋亡变化；抑制USP22后，Western blot检测周期、凋亡相关蛋白的表达变化。结果成功设计、合成针对USP22 siRNA片段，其抑制效率高达80%；USP22抑制后，胃癌细胞SGC-7901增殖明显受到抑制，细胞停滞于G0/G1期[（52.87±1.41）%比（73.73±1.78）%，t＝15.491，P＝0.000]。同时凋亡率显著增加[（19.63±0.82）%比（4.54±0.46）%，t＝58.051，P＝0.000]；Western blot结果显示bcl-2相关X蛋白（bax）表达水平显著上升（t＝9.580，P＝0.001）、B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）及pro-半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3（Caspase-3）的表达量显著降低（t＝6.674、7.269；P＝0.000、0.000）；磷酸化蛋白激酶B（p-Akt）及下游磷酸化糖原合成酶激酶3β（p-GSK3β）表达水平显著降低（t＝13.512、6.846；P＝0.003）。结论抑制USP22后，可能通过影响Akt活化，抑制胃癌细胞增殖及诱导细胞凋亡。

关键词：泛素特异性肽酶22 胃癌增殖脱噬作用蛋白激酶B

siRNA沉默USP22基因对胃癌细胞增殖的抑制作用

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世界华人消化杂志 2011年第19期19卷 1985-1989页

作者：邓美洲陶凯雄王国斌刘兴华华中科技大学同济医学院附属协和医院腔镜外科湖北省武汉市430022

目的:探讨小干扰RNA(siRNA)沉默泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase22,USP22)对胃癌细胞增殖的影响.方法:针对USP22基因设计3条siRNA及阴性siRNA,用脂质体Lipofectamine 2000转染胃癌AGS细胞,通过实时定量PCR和Western blot检测转染后AGS细胞USP22基因中mRNA和蛋白表达水平的变化情况,流式细胞术检测细胞周期分布变化情况,CCK8法检测细胞增殖率及抑制率.结果:转染48h后,3条siRNA均能显著抑制USP22 mRNA和蛋白的表达.其中,以转染USP22 siRNA3后效果最明显,mRNA和蛋白表达分别下降80.47%±2.99%和79.40%±3.58%.细胞增殖明显受到抑制,USP22 siR-NA3组细胞增殖抑制率为27.33%±3.49%.细胞周期中G0/G1期细胞增多,S期细胞减少.结论:采用RNA干扰技术能够有效地沉默USP22基因的表达,并显著抑制胃癌细胞的增殖.

关键词：泛素特异性肽酶22 小干扰RNA 胃癌 AGS细胞细胞增殖

宫颈病变组织中USP22、HIF-1α表达变化

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山东医药 2015年第38期55卷 56-57页

作者：韩贝贝孔红霞王玉霞陈雁南周俊杰郑州大学第三附属医院郑州450000

目的观察宫颈病变组织中泛素特异性肽酶22(USP22)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达变化。方法选择15例正常宫颈(对照组)、25例CIN(CIN组)、45例宫颈癌(宫颈癌组)患者的宫颈组织,分别用免疫组化法、RT-PCR法检测各组宫颈标本中的USP22、HI... 详细信息

目的观察宫颈病变组织中泛素特异性肽酶22(USP22)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达变化。方法选择15例正常宫颈(对照组)、25例CIN(CIN组)、45例宫颈癌(宫颈癌组)患者的宫颈组织,分别用免疫组化法、RT-PCR法检测各组宫颈标本中的USP22、HIF-1α蛋白及mRNA。结果对照组、CIN组、宫颈癌组USP22蛋白阳性表达率分别为0、32.0%、57.8%,HIF-1α蛋白阳性表达率分别为20.0%、56.0%、82.2%。各组USP22、HIF-1α蛋白阳性表达率比较,P均22 mRNA相对表达量分别为1.047±0.339、2.214±0.866、5.822±5.489,HIF-1αmRNA相对表达量分别为1.048±0.315、2.305±1.083、4.313±3.122,各组USP22、HIF-1αmRNA相对表达量比较,P均22、HIF-1α表达随宫颈病变恶性程度提高而升高,二者共同参与宫颈恶性病变的发生发展过程。

关键词：宫颈上皮内瘤变宫颈癌泛素特异性肽酶22 缺氧诱导因子α

鼻咽癌组织中USP22和C-myc的表达及其与临床预后关系研究

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鼻咽癌组织中USP22和C-myc的表达及其与临床预后关系研究

作者：莫文法广西中医药大学

学位级别：硕士

目的:目前已经发现泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)在人类肺癌、肾癌、肠癌、胃癌、甲状腺癌等多种肿瘤中高表达。有研究发现,USP22与哺乳动物细胞C-myc介导的转录过程有关,USP22基因能够激活C-myc的转录,继... 详细信息

目的:目前已经发现泛素特异性肽酶22(ubiquitin specific peptidase 22,USP22)在人类肺癌、肾癌、肠癌、胃癌、甲状腺癌等多种肿瘤中高表达。有研究发现,USP22与哺乳动物细胞C-myc介导的转录过程有关,USP22基因能够激活C-myc的转录,继而调控下游基因的表达,USP22与C-myc共同调控细胞周期。然而目前国内文献中尚未有USP22和C-myc在鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)组织中联合检测的报道,本研究旨在探讨USP22和C-myc在鼻咽癌组织中的表达及其与临床病理因素和预后的关系。方法:选取资料完整的2013年6月～2014年12月期间在桂林医学院附属医院首次就诊,经病理科确诊为鼻咽癌的82例患者存档石蜡标本作为病例组,另收集同期做了鼻咽组织活检的20例正常人的鼻咽组织(病理诊断为鼻咽黏膜炎)标本作为对照组。采用免疫组织化学法检测USP22和C-myc在82例鼻咽癌组织和20例鼻咽黏膜炎组织中的表达情况;用临床随访法观察记录患者的总生存期(overall survival,OS)和无进展生存期(progression-free survival,PFS);用统计学方法分析二者在鼻咽癌组织中的表达与临床病理因素和预后的相关性。结果:(1)USP22和C-myc在鼻咽癌组织中的阳性表达率分别为57.32%和92.68%,均明显高于鼻咽黏膜炎组织的10.00%和0%(P22和C-myc的阳性表达率与淋巴结转移有相关性(P0.05);(3)USP22和C-myc在鼻咽癌组织中的表达存在正相关性(P22阳性表达患者的3年生存期(OS)和3年无进展生存期(PFS)较USP22阴性表达患者短。结论:(1)USP22和C-myc在鼻咽癌组织中的表达上调,均与淋巴结转移有相关性,且两者具有协同作用;(2)USP22阳性表达的鼻咽癌患者预后较阴性表达者差;(3)检测USP22蛋白的表达有助于鼻咽癌的预后判断,USP22有望成为NPC的治疗靶点。

关键词：鼻咽癌泛素特异性肽酶22 C-myc 免疫组织化学预后

抑制USP22基因对人结直肠癌细胞增殖的影响

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中国现代医学杂志 2019年第21期29卷 14-19页

作者：王静赵成诚荣婉武汉生物工程学院生命科学与技术学院湖北武汉430415 武汉华联科生物技术有限公司湖北武汉430212

目的利用RNA干扰技术探讨泛素特异性肽酶22(USP22)对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法免疫荧光检测结直肠癌组织中USP22的表达;Western blotting检测体外培养的HCT-116、SW480、HC-29结直肠癌细胞株中USP22的表达,筛选出表达量最高的细... 详细信息

目的利用RNA干扰技术探讨泛素特异性肽酶22(USP22)对人结直肠癌细胞增殖的影响。方法免疫荧光检测结直肠癌组织中USP22的表达;Western blotting检测体外培养的HCT-116、SW480、HC-29结直肠癌细胞株中USP22的表达,筛选出表达量最高的细胞作为研究细胞。设计、合成针对USP22特异性siRNA,同时设置阴性对照siRNA,利用脂质体转染结直肠癌细胞后,Western blotting检测siRNA抑制效率;通过MTT法检测细胞的增殖能力;流式细胞术检测细胞的周期及凋亡;Western blotting检测周期相关蛋白CyclinB1、p21、p53、CDK2的表达。结果结直肠癌组织中USP22表达量与癌旁组织比较,差异有统计学意义(P22表达量升高。SW480细胞中USP22的表达量最高,因此作为靶细胞进行后续研究。与对照组比较,USP22 siRNA能够降低USP22的表达(P22抑制后,与对照组比较,能够抑制SW480细胞的增殖,促使SW480细胞停滞于G0/G1期,抑制细胞周期进程,增加细胞凋亡率(P22抑制后,能够抑制结直肠癌细胞的增殖,其机制可能与抑制细胞周期进程、促进细胞凋亡有关。

关键词：结直肠肿瘤泛素特异性肽酶22 细胞增殖细胞周期