检索结果-南通市图书馆

siRNA干扰SIAH对细胞活性和α-synuclein泛素化降解通路的影响

中国医学创新 2015年第27期12卷 1-5页

作者：徐晶张馨芝张永进李秀明王敏蔡增林李小民徐州医学院附属连云港医院江苏连云港222002

目的:研究si RNA干扰SIAH基因对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞α-synuclein泛素化、降解通路的影响。方法:用荧光标记的si RNA-FAM转染SH-SY5Y细胞后,专业设计合成3条针对SIAH的si RNA,Western Blot检测蛋白水平SIAH表达的变化,筛选出其... 详细信息

目的:研究si RNA干扰SIAH基因对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y细胞α-synuclein泛素化、降解通路的影响。方法:用荧光标记的si RNA-FAM转染SH-SY5Y细胞后,专业设计合成3条针对SIAH的si RNA,Western Blot检测蛋白水平SIAH表达的变化,筛选出其中最高效的1条si RNA,用CCK-8法检测该si RNASIAH干扰SH-SY5Y细胞活性;流式细胞技术检测该si RNA-SIAH干扰SH-SY5Y细胞凋亡的影响;Western Blot检测α-synuclein、LC3、E1、P53蛋白水平表达的变化;q RT-PCR检测SIAH、α-synuclein、LC3、E1 m RNA水平表达的变化;免疫共聚焦分别检测SIAH、α-synuclein、LC3共定位情况。结果:3条si RNA均成功转染SH-SY5Y细胞,流式细胞术检测si RNA转染SH-SY5Y细胞转染率89%,Western结果显示其中si RNA-2#使细胞中SIAH蛋白表达明显降低,选取该序列进行研究。CCK-8法结果显示该si RNA干扰SIAH后对SH-SY5Y细胞活增高,流式细胞技术检测结果显示该si RNA干扰SIAH可抑制SH-SY5Y细胞的凋亡,与空白对照组、阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P蛋白水平,与空白对照组、阴性对照组比较均明显降低,E1蛋白水平增高,差异均有统计学意义(P泛素-蛋白酶体系统作用减少SH-SY5Y中α-synuclein聚集,SIAH基因有可能成为帕金森病治疗中的一个新靶点。

关键词：帕金森病 E3泛素连接酶 α-synuclein 泛素化蛋白酶体

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