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miR-30a-5p靶向SIRT1调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

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现代免疫学 2020年第5期40卷 372-378页

作者：刘清高陈文革湖北民族大学附属民大医院关节外科恩施445000

为研究miR-30a-5p对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制,运用实时荧光RT-PCR检测人原代OA软骨细胞及正常软骨细胞中miR-30a-5p、沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silent information regulator 1, SIRT1)的表... 详细信息

为研究miR-30a-5p对骨关节炎(osteoarthritis,OA)软骨细胞增殖和凋亡的影响并探讨其机制,运用实时荧光RT-PCR检测人原代OA软骨细胞及正常软骨细胞中miR-30a-5p、沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(silent information regulator 1, SIRT1)的表达。研究分为正常对照组(正常软骨细胞)、OA+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC)、OA+anti-miR-30a-5p组(转染anti-miR-30a-5p)、OA+pcDNA组(转染pcDNA)、OA+pcDNA-SIRT1组(转染pcDNA-SIRT1)、OA+anti-miR-30a-5p+si-NC组(anti-miR-30a-5p和si-NC共转染)、OA+anti-miR-30a-5p+si-SIRT1组(anti-miR-30a-5p和si-SIRT1共转染),用脂质体法进行细胞转染,Western blotting检测各组细胞中SIRT1的表达,MTT试验检测细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞的凋亡情况,双荧光素酶报告基因检测试验检测细胞的荧光活性。结果显示,与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中miR-30a-5p表达显著升高(P关,这可为OA的靶向治疗提供依据。

关键词：微小RNA-30a-5p 沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 骨关节炎软骨细胞增殖凋亡

丹酚酸B对乙醇诱导的HepG2细胞损伤的保护作用

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中国临床药理学杂志 2020年第22期36卷 3643-3646页

作者：邱璐璐初君怡张宁大连医科大学附属第二医院药学部辽宁大连116023 大连医科大学药学院辽宁大连116044

目的通过HepG2细胞体外实验探讨丹酚酸B通过调控AMPKα1/SIRT1通路减轻乙醇损伤的分子机制。方法实验1:HepG2细胞分为空白组、模型组、模型给药组、模型转染组、模型转染给药组。模型转染组和模型转染给药组转染AMPKα1 siRNA,模型给药... 详细信息

目的通过HepG2细胞体外实验探讨丹酚酸B通过调控AMPKα1/SIRT1通路减轻乙醇损伤的分子机制。方法实验1:HepG2细胞分为空白组、模型组、模型给药组、模型转染组、模型转染给药组。模型转染组和模型转染给药组转染AMPKα1 siRNA,模型给药组和转染后的模型转染给药组加入8μmol·L^-1丹酚酸B,其他组加入等体积0.9%NaCl,3 h后,除空白组,其余4组加入100 mmol·L^-1乙醇诱导48 h造模。实验2:HepG2细胞分为空白组、空白给药组、模型组、模型给药组。给药组加入8μmol·L^-1丹酚酸B,空白组和模型组加入等体积0.9%NaCl,3 h后模型组和模型给药组加入100 mmol·L^-1乙醇后孵育48h造模。实验3:HepG2细胞分为空白组、空白给药组、转染组和转染给药组。转染组和转染给药组转染AMPKα1 siRNA,空白给药组和转染给药组加入8μmol·L^-1丹酚酸B,空白组和转染组加等体积0.9%NaCl。以MTT实验测定细胞存活率,以蛋白质印迹法检测AMPKα1、p-AMPKα1、SIRT1蛋白表达水平。结果实验1:空白组、模型组、模型给药组、模型转染组、模型转染给药组的细胞存活率分别为(100.00±1.58)%,(62.21±2.25)%,(81.65±4.16)%,(58.34±3.11)%,(61.64±3.24)%。模型组和空白组相比,模型给药组和模型组相比,模型转染组和模型组相比,差异均有统计学意义(均P2:空白组、空白给药组、模型组、模型给药组细胞中p-AMPKα1/AMPKα1的蛋白表达相对量分别为1.00±0.02,1.35±0.13,0.26±0.08,0.71±0.01,空白给药组与空白组相比,模型组与空白组相比,模型给药组与模型组相比,差异均有统计学意义(P相对量分别为1.00±0.01,2.31±0.15,0.56±0.05,0.60±0.04,SIRT1的蛋白表达相对量分别为1.00±0.02,2.14±0.20,0.43±0.06,0.46±0.04。空白给药组和空白组相比,转染组和空白组相比,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论丹酚酸B通过调控AMPKα1/SIRT1通路发挥抗慢性酒精性肝病的保护作用。

关键词： HepG2细胞丹酚酸B 沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成的异源三聚体依赖的蛋白激酶α1

丹酚酸B对慢性酒精性肝损伤大鼠肝脏的保护作用

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中国临床药理学杂志 2020年第16期36卷 2419-2421页

作者：邱璐璐蔡钊萌张宁大连医科大学附属第二医院药学部辽宁大连116023 广州中医药大学基础医学院广东广州510006

目的探讨丹酚酸B通过调控丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成的异源三聚体依赖的蛋白激酶α1(AMPKα1)激活沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)减轻酒精性肝损伤(ALD)的作用机制。方法用酒精液体饲料喂养建立ALD大鼠模型;另选大鼠普通饲料喂养作为... 详细信息

目的探讨丹酚酸B通过调控丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成的异源三聚体依赖的蛋白激酶α1(AMPKα1)激活沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)减轻酒精性肝损伤(ALD)的作用机制。方法用酒精液体饲料喂养建立ALD大鼠模型;另选大鼠普通饲料喂养作为空白组和对照组,将造模成功大鼠随机分为3组:模型组、低、高剂量实验组;每组均为8只。对照组、低、高剂量实验组灌胃给予丹酚酸B溶液30,15,30 mg·kg-1;空白组和模型组灌胃给予等量的0.9%NaCl,连续给药8周。用试剂盒检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。用蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测大鼠肝脏组织SIRT1、AMPKα1及p-AMPKα1的蛋白表达情况。结果空白组、对照组、模型组、低、高剂量实验组的血清ALT水平分别为(24.37±2.08),(23.09±1.02),(59.97±3.68),(43.39±2.91)和(39.08±2.17)U·L-1;SIRT1蛋白表达相对水平分别为0.60±0.02,0.75±0.03,0.13±0.02,0.20±0.01,0.27±0.01;p-AMPKα1蛋白表达相对水平分别为1.01±0.01,1.52±0.10,0.45±0.02,0.62±0.04,0.71±0.05。模型组与空白组比较,低、高剂量组与模型组比较,上述指标的差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论丹酚酸B通过调控AMPKα1磷酸化水平激活SIRT1蛋白表达,进而发挥其抗慢性酒精性肝病的保护作用。

关键词：酒精性肝损伤丹酚酸B 沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶组成的异源三聚体依赖的蛋白激酶α1

白藜芦醇对阿尔茨海默病小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ、ADAM10蛋白表达及Tau蛋白磷酸化水平的影响

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贵州医科大学学报 2022年第6期47卷 640-645页

作者：康小红王艺明贵州医科大学附属医院精神科贵州贵阳550004

目的探讨白藜芦醇(Res)对阿尔茨海默病(AD)小鼠前额叶皮质沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)、维甲纬酸受体β(RARβ)、含有解整合素和金属蛋白酶结构域的蛋白10(ADAM10)表达及Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法选取6月龄C57BL/6雄性小鼠6... 详细信息

目的探讨白藜芦醇(Res)对阿尔茨海默病(AD)小鼠前额叶皮质沉默信息调节因子2相关酶I(SIRT1)、维甲纬酸受体β(RARβ)、含有解整合素和金属蛋白酶结构域的蛋白10(ADAM10)表达及Tau蛋白磷酸化水平的影响。方法选取6月龄C57BL/6雄性小鼠6只作为空白对照组(BC组,生理盐水灌胃),6月龄APPswePSEN1dE9(APP/PS1)转基因小鼠12只制备AD小鼠模型后均分为AD组(生理盐水灌胃)、AD+Res组(800 mg/kg Res灌胃),采用Morris水迷宫实验(MWM)检测3组小鼠6月龄和9月龄时找到水中平台的时间;9月龄小鼠完成MWM后麻醉处死,取前额叶皮质,采用荧光实时定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术检测3组小鼠前额叶皮质SIRT 1和ADAM 10 mRNA表达水平,采用免疫蛋白印迹(Western blot)技术检测3组小鼠前额叶皮质SIRT1、RARβ及ADAM10蛋白表达及Tau蛋白磷酸化位点Ser396位点[p-tau(S396)]磷酸化水平。结果9月龄AD组和AD+Res组小鼠小鼠较本组6月龄时找到水中平台的时间延长(P关。

关键词：阿尔茨海默病 Tau蛋白质类白藜芦醇水迷宫沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 维甲纬酸受体β 含有解整合素和金属蛋白酶结构域的蛋白10

产褥期抑郁樽型的建立及白藜芦醇对抑郁症的治疗干预

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产褥期抑郁樽型的建立及白藜芦醇对抑郁症的治疗干预

作者：汪磊江苏大学

学位级别：硕士

第一部分产褥期抑郁模型的建立[目的]探究产褥期抑郁(Postpartum Depression,PPD)模型的最佳建立方法,为产褥期抑郁症的发病机制及治疗的研究提供科学有效的动物模型。[方法]成年雌性ICR妊娠(Gestation,G)小鼠根据不同的干预时间段随机... 详细信息

第一部分产褥期抑郁模型的建立[目的]探究产褥期抑郁(Postpartum Depression,PPD)模型的最佳建立方法,为产褥期抑郁症的发病机制及治疗的研究提供科学有效的动物模型。[方法]成年雌性ICR妊娠(Gestation,G)小鼠根据不同的干预时间段随机分成六组,每个时间段再分为给药组和对照组,给药组分别于妊娠第1天至妊娠第10天(G1-G10)、妊娠第1天至妊娠第21天(G1-G21)、妊娠第1天至产后(Postpartum,P)第 21 天(G1-P21)、妊娠第 10 天至妊娠第 21 天(G10-G21)、妊娠第10天至产后第21天(G10-P21)和产后第1天至产后第21天(P1-P21)连续皮下注射皮质酮构建产褥期抑郁症模型,对照组分别于相应时期注射等量的芝麻油,模型建立完成后分别进行旷场实验、高架十字迷宫实验、强迫游泳实验、悬尾实验等行为学实验验证产褥期抑郁症模型的构建效果。[结果]行为学实验结果显示:强迫游泳实验中G1-G21、G1-P21、G10-G21和G10-P21皮下注射皮质酮组小鼠的静止不动时间明显比对照组增加;悬尾实验中,G1-G21、G1-P21和G10-P21皮下注射皮质酮组小鼠的静止不动时间明显比对照组增加;高架十字迷宫实验中,G10-G21皮质酮注射组小鼠在开放臂的次数比对照组增加,G1-P21皮质酮注射组小鼠进入开放臂的次数比对照组小;旷场实验中,G1-G10皮质酮注射组小鼠运动的总距离以及在中间区域活动的次数都明显大于对照组小鼠,G10-G21皮质酮注射组小鼠运动的总距离明显大于对照组小鼠,P1-P21皮质酮注射组小鼠在中心区域活动的频率明显低于对照组。据实验统计,在妊娠前期(即G1-G10)给予小鼠高剂量皮质酮可导致较高的流产率和母鼠的死亡率。[结论]在G1-G21、G1-P21、G10-G21和G10-P21等四个时间段给予连续皮下注射皮质酮均能诱导抑郁样行为的产生,因妊娠前期给药可导致母鼠高流产率和死亡率,所以,G10-G21和G10-P21可作为产褥期抑郁症模型构建的最佳时间靶点;在G1-P21和P1-P21两个时间段给予连续皮下注射皮质酮均能诱导焦虑样行为的发生,除去妊娠前期给药时间段,P1-P21可作为产褥期焦虑模型构建的最佳时间靶点。第二部分白藜芦醇对抑郁症的治疗干预[目的]探索一种多酚类复合物—白藜芦醇拮抗抑郁症模型小鼠伴发的认知功能障碍及其可能的机制。[方法]成年雄性C57BL/6J小鼠,随机分成四组,分别为对照组(Control)、模型组(Model)、模型+白藜芦醇组(Model+ RSV)、模型+烟酰胺+白藜芦醇组(Model+ NA + RSV),除对照组外,其余三组连续皮下注射皮质酮21天,构建抑郁症动物模型,对照组给予皮下注射等量的生理盐水,注射完成后行糖水偏好实验,验证模型的建立情况,模型建立成功后,模型+白藜芦醇组给予连续强饲白藜芦醇21天,模型+烟酰胺+白藜芦醇组连续强饲白藜芦醇的同时给予腹腔注射烟酰胺21天,应用新物体识别实验、新位置识别实验、水迷宫实验等行为学实验检测小鼠的认知功能。行为学结束后处死小鼠,取脑中海马组织,分别行RT-PCR、western bolting检测海马中沉默信息调节因子2相关酶，(SIRT1),过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)及小清蛋白(PV)的转录和蛋白的表达情况。[结果]小鼠连续皮下注射皮质酮诱导抑郁症模型完成后,进行糖水偏好实验验证抑郁模型构建情况,结果显示模型组小鼠对糖水的消耗百分比明显大于模型组小鼠;继续给予白藜芦醇和烟酰胺后,进行行为学实验,在新物体识别实验中,模型组小鼠对新物体的探索次数比明显低于对照组,而模型+白藜芦醇组小鼠对新物体的探索次数比明显大于模型组;在新位置识别实验中,模型组小鼠对新位置的探索次数比、探索时间比、探索距离比以及新位置的站立次数比都明显低于对照组,而模型+白藜芦醇组能够逆转模型组小鼠对新位置探索次数比、探索时间比、探索距离比以及新位置的站立次数比的减低,事先给予烟酰胺的模型+烟酰胺+白藜芦醇组则不能逆转抑郁模型小鼠对新位置探索次数比、探索时间比、探索距离比以及新位置的站立次数比的降低;在水迷宫实验中,模型组小鼠找到平台的平均时间、平均运动距离明显大于对照组,而模型+白藜芦醇组小鼠则能逆转模型组小鼠寻找平台平均时间、平均运动距离的增加,事先给予烟酰胺的模型+烟酰胺+白藜芦醇组则不能逆转模型组寻找平台时间的增加;在水迷宫探测实验中,模型组小鼠在平台所在的目标象限探索的次数明显低于对照组,而给予白藜芦醇后,抑郁模型小鼠显著增加了在平台所在的目标象限探索的次数;模型组小鼠显著降低了海马组织中SIRT1,PGC-1α及PV蛋白的表达,而白藜芦醇显著增加了抑郁模型伴随的SIRT1,PGC-1α及PV蛋白表达水平,烟酰胺显著降低了白藜芦醇诱导的SIRT1

关键词：产褥期抑郁症动物模型皮质酮白藜芦醇认知沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1 α 小清蛋白

Sirt1对缺血再灌注损伤心肌的保护作用及信号通路机制研究

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Sirt1对缺血再灌注损伤心肌的保护作用及信号通路机制研究

作者：李珊第四军医大学

学位级别：硕士

研究背景随着社会环境和饮食结构的变化,发病率和死亡率在心血管系统疾病中出现逐年上升趋势,而且发病年龄越来越年轻,特别是冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)、急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)和心力衰竭(Cardiac Fa... 详细信息

研究背景随着社会环境和饮食结构的变化,发病率和死亡率在心血管系统疾病中出现逐年上升趋势,而且发病年龄越来越年轻,特别是冠心病(Coronary Heart Disease,CHD)、急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)和心力衰竭(Cardiac Failure,CHF)等是心血管疾病发病率和死亡率增加的主要原因,也是心脏源性猝死的主要病因之一[1]。在发达国家死亡原因最常见的是冠心病[2]。WHO全球统计数据显示由冠心病和循环系统疾病导致的死亡从1999年至2010年已经上升了1/3,而在2015年每死亡3个人中就有一个是由于冠心病[3],因此预防和治疗冠心病成为人类迫切解决的问题。Sirt1近似同种类的酵母沉默信息调节因子2(Silent Information Regulator-2,Sir2),是依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide,NAD)脱乙酰蛋白酶。Sirtuins有7个家族成员即Sirt1irt7,但是Sirt1一直是被广泛研究的sirtuin蛋白[4]。Sirt1在大脑、心脏、肝脏、胰腺、骨骼肌、脾脏和脂肪组织等身体器官中表达,它存在于细胞核和细胞质中但主要是在细胞核中表达[2]。Sirt1调节的脱乙酰化作用对于许多蛋白质的活性具有重要的作用,调节蛋白质的转录和翻译,蛋白质的翻译在许多生物功能中具有重要的功能,如氧化应激、新陈代谢、细胞增殖和基因组的稳定性[5]。此外,Sirt1一直与老化、代谢疾病、神经退化性疾病、癌症和心血管疾病有关[6]。磷脂酰肌醇-苏氨酸蛋白激酶(Phosphatidyl Inositol 3-kinase/Serine-threomine kinase,PI3k-Akt)信号通路不仅在癌症中具有重要的作用,而且在正常细胞中也具有重要的作用。这条通路在细胞的许多生物学功能中具有重要的作用,如增殖、粘附、迁移、侵入、代谢和存活等[7]。基于上述情况,根据目前国内外有关的研究进展我们提出以下问题:白藜芦醇能否促进Sirt1的表达,并在缺血灌注损伤中保护心肌细胞?Sirt1是否通过上调PI3k-Akt信号通路起到保护心肌细胞的作用呢?研究目标1.观测在缺血再灌注损伤过程中Sirt1是否对心肌细胞有保护作用。2.探讨Sirt1对PI3k-Akt信号通路的影响,明确Sirt1心脏保护作用的发生机制。研究方法1.心肌细胞系(H9c2)随机分为对照组(Control组)和缺氧复氧组(H/R),其中缺氧复氧组分为3组,一组给予含25μM白藜芦醇培养基培养,一组给予含1μM EX527和25μM白藜芦醇培养基,最后一组给予正常培养基,培养2 d-3 d后进行缺氧复氧干预,对照组不做任何处理。2.应用TUNEL免疫荧光染色法,在荧光显微镜下观察各组H9c2心肌细胞系细胞凋亡情况并计算凋亡率。3.应用DHE免疫荧光染色法在荧光显微镜下观察各组心肌细胞的活性氧水平,并计算活性氧比率。4.应用MTT比色法,检测各组心肌细胞的细胞活性。5.采用JC-1免疫荧光染色法,检测各组心肌细胞中线粒体的膜电位,并计算红光与绿光的比值。6.应用抗体免疫荧光检测Sirt1在心肌细胞核中的表达情况。7.采用Western Blotting免疫印迹法检测各组心肌细胞中Sirt1和p-Akt表达情况。8.采用Western Blotting免疫印迹法检测加入Akt特异性抑制剂LY294002后,心肌细胞中Sirt1和p-Akt蛋白的表达水平。研究结果1.与对照组(0.240±0.007)相比,缺氧复氧组(0.487±0.013)凋亡率显著上升(P相比,加入Sirt1激动剂白藜芦醇预处理组(0.255±0.010)凋亡率显著降低(P相比,缺氧复氧组(0.372±0.020)细胞活性氧水平显著上升(P相比,白藜芦醇预处理组(0.256±0.026)活性氧水平显著降低(P相比,缺氧复氧组(0.455±0.002)细胞活性显著降低(P相比,白藜芦醇组(0.587±0.005)细胞活性水平显著上升(P相比,缺氧复氧组(2.579±0.006)线粒体膜电位水平显著降低(P<0.001),与缺氧复氧组(2.5

关键词：冠心病缺血再灌注损伤沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 白藜芦醇 EX527

能量限制激活Sirt1减轻心肌细胞缺血/再灌注损伤的作用

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心脏杂志 2016年第4期28卷 405-410页

作者：李珊吕安林王海昌邱翠婷马晓磊姜晓宇郭显第四军医大学西京医院心血管内科陕西西安710032

目的研究能量限制(calorie restriction,CR)激活沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(Sirt1)在缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,I/RI)中对心肌细胞的保护作用及其机制。方法心肌细胞系H9c2以5×105/L接种于6孔细胞培养板中,随机分为... 详细信息

目的研究能量限制(calorie restriction,CR)激活沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ(Sirt1)在缺血/再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,I/RI)中对心肌细胞的保护作用及其机制。方法心肌细胞系H9c2以5×105/L接种于6孔细胞培养板中,随机分为4组:对照(Con)组、缺氧复氧(hypoxia/re-oxygenation,H/R)组、H/R+低糖预处理(H/R+CR)组和H/R+低糖预处理+Sirt1抑制剂EX527(H/R+CR+EX527)组,其中Con和H/R组使用葡萄糖浓度为4.5 g/L的培养基,而H/R+CR组和H/R+CR+EX527组则使用葡萄糖浓度为1.5 g/L的培养基,每组设置3个复孔,进行缺氧5 h复氧1 h,用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)的水平,四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞的活性,末端标记法(TUNEL)染色法检测细胞的凋亡水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Sirt1和磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶(P-AMPK)的表达。结果与H/R组(0.31±0.06)相比,H/R+CR组(0.11±0.02)细胞内ROS的水平明显减少(P27组(0.55±0.06)细胞内ROS的水平明显增多(P23±0.01)相比,H/R+CR组(0.64±0.02)细胞活性明显上升(P27组(0.09±0.005)细胞活性明显下降(P相比,H/R+CR组(0.222±0.556)细胞凋亡水平明显降低(P27组(0.578±0.0129)细胞凋亡水平明显提高(P2.229±0.019)相比,H/R+CR组(3.712±0.010)Sirt1的表达水平明显增加(P27组(1.603±0.134)Sirt1的表达水平明显降低(P相(1.262±0.064)比,H/R+CR组(1.893±0.122)P-AMPK的表达水平明显增加(P27组(0.734±0.069)P-AMPK的表达水平明显降低(P<0.05)。结论在I/RI中,CR可能通过AMPK途径激活Sirt1,进而发挥心肌保护作用。

关键词：能量限制沉默信息调节因子2相关酶Ⅰ 缺血/再灌注损伤