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大鼠耳蜗大上皮嵴及小上皮嵴细胞永生细胞系的建立

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临床耳鼻咽喉科杂志 2006年第10期20卷 460-462,465页

作者：张媛郭维维宋巍郑贵亮翟所强解放军总医院耳鼻咽喉研究所北京100853

目的：建立大鼠耳蜗大、小上皮嵴细胞永生细胞系。方法：取P1大鼠耳蜗，分离出耳蜗上皮薄片组织，并与含SV40-LT抗原的逆转录病毒共培养，从而实现细胞的永生化。利用单克隆法纯化细胞系，并通过形态学、免疫组织化学等方法对细胞系进... 详细信息

目的：建立大鼠耳蜗大、小上皮嵴细胞永生细胞系。方法：取P1大鼠耳蜗，分离出耳蜗上皮薄片组织，并与含SV40-LT抗原的逆转录病毒共培养，从而实现细胞的永生化。利用单克隆法纯化细胞系，并通过形态学、免疫组织化学等方法对细胞系进行鉴定。结果：大鼠耳蜗大、小上皮嵴细胞永生细胞系基本保持了细胞原代的表型特征：呈现上皮细胞样的多角形外观；不同世代的细胞均表达Isletl及SV40-LT抗原。该系目前已培养3个月，超过20代，传代时间为3～4d，传代比例为1：5。结论：本实验成功建立了大鼠耳蜗大、小上皮嵴细胞的永生细胞系，这为大、小上皮嵴细胞生物学特性及相关功能，特别是毛细胞再生及前体细胞移植治疗感音神经性聋方面的研究奠定了坚实的实验基础。

关键词：耳蜗大上皮嵴小上皮嵴永生细胞系

Goldenhar综合征家系及散发病例永生细胞系的建立

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第44期13卷 8663-8666页

作者：肖玲谭灿黄雪霜张李洋陈庆林张建湘中南大学湘雅基础医学院组织学与胚胎学系湖南省长沙市410013 中南大学生物科学与技术学院细胞生物学系湖南省长沙市410013 中南大学生物科学与技术学院动物学与发育生物学系湖南省长沙市410013

背景:利用EB病毒转化外周血B淋巴细胞建立各种疾病,特别是罕见疾病永生细胞库,已成为当今永久保存全基因组的首选方法。目的:采用EB病毒转化淋巴细胞技术,建立Goldenhar综合征家系及散发病例外周血B淋巴细胞永生细胞系。设计、时间及地... 详细信息

背景:利用EB病毒转化外周血B淋巴细胞建立各种疾病,特别是罕见疾病永生细胞库,已成为当今永久保存全基因组的首选方法。目的:采用EB病毒转化淋巴细胞技术,建立Goldenhar综合征家系及散发病例外周血B淋巴细胞永生细胞系。设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-03/10在中南大学组织学与胚胎学系实验室完成。对象:湖南怀化地区的一个Goldenhar综合征家系中目前存活的3代20人及4例Goldenhar综合征散发病例及其父母。方法:收集Goldenhar综合征家系20人及4例散发病例及其父母外周血样品进行淋巴细胞分离,以EB病毒转化淋巴细胞,并加入环孢素A抑制T淋巴细胞生长,每个血样采用两线同时培养,转化后进行细胞株的冻存和复苏,检测其建系前后的遗传稳定性。主要观察指标:光镜观察B淋巴细胞的转化情况。细胞冻存后复苏成功率及染色体G带分析情况。结果:培养1周左右,可在倒置显微镜下观察到B淋巴细胞明显母细胞化,细胞明显增大,细胞周边可见明显的胞质突起,形状各异,聚集成团。约15d后,可见白色聚集生长的细胞团,1个月左右细胞增殖形成生长密集的细胞集落。共建成Goldenhar综合征患者外周血永生细胞株8例,建株成功率100%,父母等家庭成员建系成功率为95.8%(23/24)。所有建成的细胞系冻存1,3,6个月后复苏成功率为100%,经染色体G显带分析未见异常,表明建立细胞株的方法稳定。结论:实验成功建立了Goldenhar综合征患者永生细胞系。

关键词： Goldenhar综合征永生细胞系 EB病毒

猪内源性逆转录病毒基因在版纳微型猪近交系骨髓间充质干细胞永生细胞系的整合和表达研究

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四川大学学报（医学版） 2005年第6期36卷 770-772页

作者：于萍刘瑾张立李胜富步宏李幼平程惊秋陆燕蓉龙丹四川大学华西医院卫生部移植工程与移植免疫重点实验室成都610041

目的检测猪内源性逆转录病毒(PERV)在猪细胞长期传代过程中的基因整合和表达。方法通过提取已建立的版纳微型猪近交系(BM I)骨髓间充质干细胞(M SC s)永生细胞系的DNA及细胞总RNA,用PCR、RT-PCR方法检测PERV前病毒gag、po l和env基因的... 详细信息

目的检测猪内源性逆转录病毒(PERV)在猪细胞长期传代过程中的基因整合和表达。方法通过提取已建立的版纳微型猪近交系(BM I)骨髓间充质干细胞(M SC s)永生细胞系的DNA及细胞总RNA,用PCR、RT-PCR方法检测PERV前病毒gag、po l和env基因的整合和表达,并对PERV的亚型进行鉴定。结果从原代BM I-M SC s至连续传代到150、180代的BM I-M SC s细胞基因组中都检测到了PERV前病毒DNA的整合及其mRNA的表达,PERV亚型为PERV-A、B型。结论PERV在BM I近交过程中及猪细胞体外长期传代过程中均未消失,PERV基因已经整合入其天然宿主的基因组内并能稳定表达。

关键词：猪内源性逆转录病毒版纳微型猪近交系永生细胞系异种器官移植人兽共患病

中国儿童孤独症家系外周血淋巴细胞永生细胞系的建立

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中国神经精神疾病杂志 2005年第4期31卷 304-306页

作者：刘青杰李丹马芬封江彬田文雁王晓维陆雪陈德清陈晓宁沈岩国家人类基因组北方研究中心北京100176 华中科技大学同济医学院梨园医院中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所

目的试图建立外周血淋巴细胞、永生化细胞系以保存孤独症患者家系特有的基因组资源,为进一步探讨孤独症的发生机理提供材料。方法在知情同意的情况下收集66个原发性孤独症核心家系成员的外周血样品,采用EB病毒转化技术,将外周血B淋巴细... 详细信息

目的试图建立外周血淋巴细胞、永生化细胞系以保存孤独症患者家系特有的基因组资源,为进一步探讨孤独症的发生机理提供材料。方法在知情同意的情况下收集66个原发性孤独症核心家系成员的外周血样品,采用EB病毒转化技术,将外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系;并用遗传学方法检测其建系前后的遗传稳定性。结果建系成功孤独症病例60例,父母成功132例,所有建成的细胞系冻存后复苏成功率100%,染色体核型分析表明建系前后遗传是稳定的。结论本研究建立的孤独症患者永生细胞系,可为进一步研究孤独症的分子水平发病机理提供随时可取的实验材料。

关键词：儿童孤独症 EB病毒永生细胞系 B淋巴细胞遗传学

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唐氏综合征患者永生细胞系的建立

中华检验医学杂志 2007年第9期30卷 1045-1047页

作者：肖白裴珮钮淑兰雷箴袁海昕范新萍吴燕贾兴元王立荣高斌闫梅王战勇戚豫刘敬忠首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心 100020 北京大学第一医院中心实验室中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所

目的建立唐氏综合征患者永生细胞系,为唐氏综合征的基因诊断提供标准品。方法采集唐氏综合征患者外周血,采用 EB 病毒转化外周血 B 淋巴细胞和加环孢霉素 A 抑制 T 淋巴细胞的技术,建立永生淋巴母细胞系。用细胞遗传学方法、实时荧光定... 详细信息

目的建立唐氏综合征患者永生细胞系,为唐氏综合征的基因诊断提供标准品。方法采集唐氏综合征患者外周血,采用 EB 病毒转化外周血 B 淋巴细胞和加环孢霉素 A 抑制 T 淋巴细胞的技术,建立永生淋巴母细胞系。用细胞遗传学方法、实时荧光定量 PCR 及短串联重复序列(STR)多态性分析技术检测其建系前后的遗传特性及稳定性。结果建系成功,经过传代、冻存和复苏,建系后第10代染色体核型和 DNA 标志未发生改变。建系前后染色体核型均为47,XX,+21。多重荧光相对定量 PCR 鉴定,唐氏综合征患者外周血原代细胞和转化后第10代细胞株的△Ct 值均在-2.55±3s 范围内,与正常对照相比△Ct 值范围无重叠。21号染色体上的 STR 基因座 D21S11多态性分析表明,唐氏综合征患者外周血原代细胞和转化后第10代细胞株均有同样的3种基因型。结论染色体核型和 DNA 分析表明,唐氏综合征患者永生细胞系建立前后遗传特点一致,且稳定,可用作基因诊断试剂盒产品质量检测、质量控制的标准品。

关键词：唐氏综合征基因永生细胞系 EB病毒

广东高本底辐射地区老年居民淋巴细胞永生化细胞系的建立

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中华放射医学与防护杂志 2008年第2期28卷 -页

作者：陆雪封江彬陈德清查永如邹剑明刘青杰中国疾病预防控制中心辐射防护与核安全医学所北京100088 广东省职业病防治院

目的建立辐射高本底地区老年居民外周血永生化细胞系,以保存高本底居民特有的基因组资源,为进一步开展天然本底辐射的遗传学和分子生物学研究提供材料.方法在知情同意的情况下收集20例高本底地区老年男性居民的外周血样品,采用EB病毒... 详细信息

目的建立辐射高本底地区老年居民外周血永生化细胞系,以保存高本底居民特有的基因组资源,为进一步开展天然本底辐射的遗传学和分子生物学研究提供材料.方法在知情同意的情况下收集20例高本底地区老年男性居民的外周血样品,采用EB病毒转化技术,把外周血B淋巴细胞转化成永生化淋巴母细胞系,冻存复苏后,进行细胞活性检测和排除细菌、支原体污染,并用遗传学方法检测其建系前后的遗传稳定性.结果成功建立20例40株细胞株,所有建成的细胞株冻存后复苏成功率为100%.活性细胞大于90%,无细菌和支原体污染,G显带分析结果为转化后第20代细胞的染色体核型未发生改变.结论本研究建立的高本底地区老年居民永生细胞系在遗传学特性上是稳定的,可用于进一步的天然本底辐射的遗传学和分子生物学研究.

关键词：天然高本底地区老年居民 EB病毒永生细胞系 B淋巴细胞

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中国海南黎族永生B细胞系的建立与保存

第三军医大学学报 2003年第15期25卷 1348-1348,1351页

作者：李冬娜应大君区采莹符生苗褚嘉薛雅丽黄小义第三军医大学基础医学部解剖学教研室重庆400038 海南医学院海口571101 海南省人民医院遗传研究室海口570311 中国医学科学院医学生物学研究所昆明650118 哈尔滨医科大学遗传学教研室哈尔滨150086

继人类基因组计划之后，人类基因组多样性计划（Human Genome Diversity Project，HGDP）已成为世界科学研究的热点之一。从世界各地采集不同人群的标本并建立永生细胞系，是HGDP的重要内容。黎族是中华民族的重要成员，集居海南岛。语... 详细信息

继人类基因组计划之后，人类基因组多样性计划（Human Genome Diversity Project，HGDP）已成为世界科学研究的热点之一。从世界各地采集不同人群的标本并建立永生细胞系，是HGDP的重要内容。黎族是中华民族的重要成员，集居海南岛。语言属汉藏语系壮侗语族黎语义。根据方言、文化特征及人种学上的差异，又分为（左亻右孝）黎、杞黎、本地黎、美孕黎和加茂黎五个支系。由海南省特殊地理环境和历史所铸就的黎族基因组，必将成为我国进行HGDP研究，构造遗传资源中心的重要信息来源。本研究成功地对中国海南省（左亻右孝）、杞黎、本地黎的部分个体建立了永生B细胞系。

关键词：永生细胞系少数民族 EB病毒

用人支气管上皮永生化细胞系观察MNNG的遗传毒理学改变

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癌变．畸变．突变 1995年第6期7卷 329-331页

作者：王卫华郭素萍程书钧中国医学科学院肿瘤研究所北京市耳鼻喉科研究所

本文用姐妹染色单体互换及非同位素原位缺口平移技术观察了Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对人支气管上皮永生细胞系的遗传毒理作用。结果表明ＭＮＮＧ可致人支气管上皮永生细胞系ＤＮＡ损伤，并以ＤＮＡ单链断裂的形... 详细信息

本文用姐妹染色单体互换及非同位素原位缺口平移技术观察了Ｎ－甲基－Ｎ’－硝基－Ｎ－亚硝基胍（ＭＮＮＧ）对人支气管上皮永生细胞系的遗传毒理作用。结果表明ＭＮＮＧ可致人支气管上皮永生细胞系ＤＮＡ损伤，并以ＤＮＡ单链断裂的形式出现。上述方法的建立为人类致癌物的检测及其作用机理的研究建立了有效的实验模型。

关键词： MNNG 遗传毒理永生细胞系支气管

永生细胞系、体细胞和生殖腺细胞中端粒酶活性检测

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延安大学学报（自然科学版） 1999年第2期18卷 75-77页

作者：符兆英 James Mathews 延安大学医学院陕西延安716000 美国柏莱医学研究所

用TRAP法对来自人肺、乳腺和皮肤的恶性肿瘤永生细胞系．和该三种组织来源的正常体细胞，及正常卵巢和睾丸组织进行了端粒酶活性检测。结果发现，三种永生细胞系和卵巢与睾丸组织中均可测到端粒酶活性，而三种组织来源的体细胞不能测到... 详细信息

用TRAP法对来自人肺、乳腺和皮肤的恶性肿瘤永生细胞系．和该三种组织来源的正常体细胞，及正常卵巢和睾丸组织进行了端粒酶活性检测。结果发现，三种永生细胞系和卵巢与睾丸组织中均可测到端粒酶活性，而三种组织来源的体细胞不能测到；提示端粒酶可能对恶性肿瘤细胞永生化、生物种系正常繁衍，和正常体细胞的衰老与寿命起着重要的决定作用。

关键词：端粒酶永生细胞系体细胞生殖腺细胞活性检测