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利用CRISPR/Cas9系统构建水通道蛋白9基因敲除小鼠

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解剖学报 2022年第1期53卷 126-131页

作者：程全成樊婧刘怀存丁慧如方璇王建伟陈春花张卫光北京大学基础医学院人体解剖学教研室北京100191

目的利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前... 详细信息

目的利用CRISPR/Cas9系统敲除小鼠水通道蛋白9(AQP-9)基因,构建稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。方法根据CRISPR/Cas9靶点设计原则,在Ensembl数据库上找到AQP-9基因序列的外显子区域,综合分析选定AQP-9-202的公共外显子2,前期在其两边设计7个小向导RNA(sgRNA)靶点,选择合适靶点,将AQP-9敲除。用PCR以及基因测序手段检测基因敲除效果。获得F1代杂合子小鼠后,继而提供10只野生型小鼠(雌雄各5只)进行繁育,以期得到纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。结果前期设计的7个sgRNA靶点基因活性均在95%以上,选择L2和R2作为最终的sgRNA靶点。注射受精卵74枚,移植60枚,得到6只F0代阳性鼠。经过繁育鉴定,最终得到稳定敲除AQP-9基因的纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。结论利用CRISPR/Cas9系统获得全身敲除AQP-9基因且可稳定遗传的纯合子AQP-9^(-/-)小鼠。

关键词：水通道蛋白9 规律间隔成簇短回文重复序列/相关蛋白9 基因敲除基因型鉴定小鼠

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水通道蛋白9在PCOS大鼠卵巢组织的表达

重庆医学 2022年第5期51卷 735-740页

作者：潘海霞冼佩宜张春仁林菡何晓莹唐慧珍赖毛华广州医科大学附属第一医院中西医结合临床妇科广州510120 广州中医药大学第三附属医院中医妇科广州510120

目的观察水通道蛋白9(AQP9)对来曲唑诱导多囊卵巢综合征(PCOS)发病的影响。方法选取6周龄SD大鼠,采用来曲唑连续灌胃21 d构建PCOS模型,阴道涂片观察大鼠动情周期变化,记录大鼠体重变化,测量大鼠双侧卵巢质量,ELISA测定血清黄体生成素(LH... 详细信息

目的观察水通道蛋白9(AQP9)对来曲唑诱导多囊卵巢综合征(PCOS)发病的影响。方法选取6周龄SD大鼠,采用来曲唑连续灌胃21 d构建PCOS模型,阴道涂片观察大鼠动情周期变化,记录大鼠体重变化,测量大鼠双侧卵巢质量,ELISA测定血清黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)、雄激素、雌二醇和空腹胰岛素,葡萄糖氧化酶法检测空腹血糖,观察卵巢形态组织学变化,免疫组织化学、Western blot检测AQP9定位及蛋白表达变化。结果与正常组比较,模型组大鼠体重和卵巢质量明显升高(P9蛋白在卵巢颗粒细胞、卵泡膜细胞、黄体细胞均有表达,但主要表达在颗粒细胞;与正常组比较,模型组卵巢AQP9蛋白表达降低(P9可能在PCOS大鼠卵泡发育障碍中起一定的作用。

关键词：水通道蛋白9 来曲唑多囊卵巢综合征动物模型颗粒细胞

水通道蛋白9磷酸化对哺乳动物细胞中砷摄入的影响

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中国药学杂志 2012年第9期47卷 679-683页

作者：曹亦菲杨磊邓卢翠黄仙红罗燕何平徐玲李思萱谭晓华杭州师范大学健康管理学院杭州310036 石河子大学新疆地方与民族高发病教育部重点实验室新疆石河子832002 杭州师范大学附属医院检验科杭州310015

目的研究水通道蛋白9(AQP9)mRNA表达水平、水通道蛋白9及p38蛋白表达及其磷酸化水平对肝癌细胞HepG2和肝正常细胞L-02砷摄入的影响,探讨水通道蛋白9磷酸化的调控机制。方法采用电感藕合等离子体质谱法(ICP-MS)测定细胞内砷含量。采用实... 详细信息

目的研究水通道蛋白9(AQP9)mRNA表达水平、水通道蛋白9及p38蛋白表达及其磷酸化水平对肝癌细胞HepG2和肝正常细胞L-02砷摄入的影响,探讨水通道蛋白9磷酸化的调控机制。方法采用电感藕合等离子体质谱法(ICP-MS)测定细胞内砷含量。采用实时定量PCR、免疫印迹法和免疫共沉淀技术分别检测不同处理后两细胞株中水通道蛋白9 mRNA、水通道蛋白9和p38蛋白表达水平及其磷酸化水平。采用SPSS统计软件分析实验数据。结果 HepG2细胞内砷含量及摄入速度高于L-02细胞。HepG2细胞的水通道蛋白9 mRNA表达水平在6 h内随NaAsO2处理时间延长而显著增加(P水通道蛋白9基因表达水平在各NaAsO2处理浓度均显著增加(P水通道蛋白9蛋白磷酸化水平随NaAsO2处理时间和浓度的增加而增加,而L-02细胞在各时间和浓度处理点水通道蛋白9蛋白磷酸化水平与对照相比明显增加,但处理间无明显差异;p38的磷酸化水平在两种细胞中均随砷处理时间延长而增加;SB203580抑制p38活性后能完全取消L-02细胞水通道蛋白9蛋白的磷酸化,而对HepG2细胞水通道蛋白9蛋白磷酸化无明显影响。结论水通道蛋白9的表达及磷酸化水平可能在调节细胞砷摄入中发挥重要作用,在不同细胞中水通道蛋白9蛋白磷酸化的调控机制有所差异。

关键词：水通道蛋白9 磷酸化 NaAsO2 p38 HepG2 L-02

水通道蛋白9在2型糖尿病大鼠肝脏中的表达变化

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第三军医大学学报 2018年第1期40卷 31-36页

作者：李原侯娇娇任旭霞陈玉琴易耀兴杨美重庆医科大学神经科学中心重庆400016 重庆医科大学第一临床学院2013级临床医学七年制重庆400016

目的探讨水通道蛋白9(Aquaporin-9,AQP9)在2型糖尿病(T2DM)鼠肝脏中的表达情况及其可能的调控机制。方法采用高脂高糖饲养联合低剂量链脲霉素诱导T2DM模型;通过HE染色法检测不同组SD大鼠肝脏的形态学改变;免疫荧光染色法观察不同组大鼠... 详细信息

目的探讨水通道蛋白9(Aquaporin-9,AQP9)在2型糖尿病(T2DM)鼠肝脏中的表达情况及其可能的调控机制。方法采用高脂高糖饲养联合低剂量链脲霉素诱导T2DM模型;通过HE染色法检测不同组SD大鼠肝脏的形态学改变;免疫荧光染色法观察不同组大鼠肝脏中AQP9的分布情况;Western blot检测不同组大鼠肝脏中AQP9和MAPK蛋白水平的表达变化。结果相较于对照组,HE染色显示,2型糖尿病鼠的肝脏细胞排列混乱,细胞间隙增宽,细胞水样变性显著,水肿明显,伴随大量炎性细胞浸润;免疫荧光显示,水通道蛋白9在对照组表达较少,而在糖尿病组大量表达,主要呈环形集中分布在肝细胞朝向肝血窦面的细胞膜上;Western blot分析表明,糖尿病组肝脏AQP9的表达水平明显升高(P0.05)。结论 AQP9的表达水平在T2DM鼠肝脏中显著上升,高糖环境下p38-MAPK,JNK-MAPK可能对AQP9的表达具备调控作用。

关键词：糖尿病肝脏水通道蛋白9 MAPK

水通道蛋白9在子痫前期患者胎盘中的表达及意义

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广东医学 2013年第17期34卷 2663-2665页

作者：王燕燕陈俊虎张秀果向瑾操陈爱兰广东省东莞市厚街医院妇产科 523945 广东医学院第一临床医学院广东湛江524001 广东省湛江市第二人民医院妇产科 524001

目的探讨水通道蛋白9(AQP-9)在子痫前期患者胎盘中的表达和意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化法观察30例正常及60例子痫前期(轻度子痫前期30例,重度子痫前期30例)胎盘组织中AQP-9 mRNA含量及AQP-9蛋白表达。结果... 详细信息

目的探讨水通道蛋白9(AQP-9)在子痫前期患者胎盘中的表达和意义。方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化法观察30例正常及60例子痫前期(轻度子痫前期30例,重度子痫前期30例)胎盘组织中AQP-9 mRNA含量及AQP-9蛋白表达。结果 (1)RT-PCR结果显示AQP-9在正常足月胎盘中灰度比值为0.064±0.026,轻度子痫前期为0.243±0.031,重度子痫前期为0.366±0.033,3者间差异有统计学意义(P9在胎盘合体滋养细胞有表达,在3者中的表达差异有统计学意义(P90.00%。结论 AQP-9在正常胎盘组织有表达,对维系胎儿的健康发育发挥重要作用。在妊高症中AQP-9表达增高,并与子痫的轻重程度呈正相关,提示AQP-9可能参与子痫前期的发生和发展。

关键词：子痫前期水通道蛋白9 逆转录-聚合酶链反应免疫组化

水通道蛋白9在慢传输型便秘大鼠结肠表达的实验研究

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中国临床药理学杂志 2021年第22期37卷 3119-3122页

作者：赵兵孔鹏飞吴至久唐学贵川北医学院附属医院肛肠科四川南充637000

目的探索水通道蛋白9(AQP9)在慢传输型便秘(STC)大鼠结肠中的表达情况,及其作用机制。方法SD大鼠灌胃给予复方地芬诺酯混悬液建立大鼠慢传输型便秘(STC)模型,并随机分成模型组、对照组及实验组,每组12只;另取12只正常大鼠作为空白组。ST... 详细信息

目的探索水通道蛋白9(AQP9)在慢传输型便秘(STC)大鼠结肠中的表达情况,及其作用机制。方法SD大鼠灌胃给予复方地芬诺酯混悬液建立大鼠慢传输型便秘(STC)模型,并随机分成模型组、对照组及实验组,每组12只;另取12只正常大鼠作为空白组。STC模型建立后,空白组和模型组均灌胃给予0.9%NaCl 4 mL;对照组灌胃给予0.13 mg·mL^(-1)莫沙必利混悬液4 mL;实验组灌胃给予0.15 g·mL^(-1)麻仁丸混悬液4 mL。4组大鼠每天给药1次,连续给药7 d。待末次给药结束后,进行碳末推进实验检测,用Western blot法检测4组结肠组织中AQP9的表达情况。结果实验组、对照组、模型组和空白组的碳末推进率分别为(70.18±2.84)%,(69.28±2.89)%,(51.56±3.41)%和(71.25±5.61)%,AQP9蛋白相对表达量分别为0.34±0.02,0.35±0.03,0.20±0.02和0.42±0.02。模型组的上述指标与其他3组比较,差异均有统计学意义(均P9低表达水平会导致便秘。

关键词：麻仁丸莫沙必利水通道蛋白9 慢传输型便秘

胰岛素对人肝细胞L02水通道蛋白9表达的影响及其调控通路

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中华肝脏病杂志 2010年第6期18卷 455-458页

作者：刘卉梅浙川肖潇重庆医科大学附属第二医院消化内科 400010

目的探讨胰岛素对人肝细胞株L02细胞膜上水通道蛋白9（AQP9）表达的调控及其调控通路. 方法体外培养正常人肝细胞L02,分别给予磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、丝/苏氨酸激酶（AKT）抑制剂A-4-43654,丝裂酶原激活蛋白激酶（M... 详细信息

目的探讨胰岛素对人肝细胞株L02细胞膜上水通道蛋白9（AQP9）表达的调控及其调控通路. 方法体外培养正常人肝细胞L02,分别给予磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂LY294002、丝/苏氨酸激酶（AKT）抑制剂A-4-43654,丝裂酶原激活蛋白激酶（MAPK）抑制剂SB2030580及不同浓度胰岛素干预,逆转录-聚合酶链反应及Western blot检测肝细胞AQP9的mRNA和蛋白质表达.组间数据比较采用单因素方差分析.结果从胰岛素100 nmol/L开始,AQP9的mRNA和蛋白质表达降低（分别为0.55±0.08和0.59±0.08）,胰岛素浓度为500 nmol/L时降低最明显（分别为0.39±0.05和0.40±0.06）,与对照组相比,差异有统计学意义（P值均〈0.05）.从胰岛素作用后3 h开始,AQP9转录逐渐降低,12 h时抑制作用明显,AQP9的InRNA和蛋白质相对表达量分别为0.53±0.08和0.54±0.08（P值均〈0.05）.PI3K抑制剂LY294002及AKT抑制剂A-443654能有效阻断胰岛素对AQP9表达的影响而MAPK抑制剂SB2030580则对胰岛素刺激AQP9表达无明显作用. 结论人正常肝细胞膜上AQP9的表达受胰岛素调控,且与PI3K-AKT通道相关.

关键词：胰岛素 1-磷脂酰肌醇3-激酶蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶水通道蛋白9

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水通道蛋白9与妊娠及相关性疾病的研究进展

现代妇产科进展 2015年第8期24卷 634-635,639页

作者：李建琼管晓静杨建华浙江大学医学院杭州310020 浙江大学医学院附属邵逸夫医院妇产科杭州310020

水通道蛋白9(AQP9)属于水甘油通道家族,对水分子、尿素、甘油等具有通透性。女性生殖系统中,AQP9表达于窦状卵泡、颗粒细胞、胎盘、胎膜、子宫、输卵管等部位,参与调节水和渗透压平衡及能量代谢和细胞凋亡过程,影响卵泡发育、囊胚形成... 详细信息

水通道蛋白9(AQP9)属于水甘油通道家族,对水分子、尿素、甘油等具有通透性。女性生殖系统中,AQP9表达于窦状卵泡、颗粒细胞、胎盘、胎膜、子宫、输卵管等部位,参与调节水和渗透压平衡及能量代谢和细胞凋亡过程,影响卵泡发育、囊胚形成和植入及分娩过程,与妊娠期高血压疾病、羊水量异常、绒毛膜羊膜炎、输卵管妊娠等均有密切关系,具体机制及调节过程仍有待进一步研究。该文就近年AQP9与妊娠及相关疾病的新进展做一综述。

关键词：水通道蛋白9 妊娠妊娠相关疾病

硫酸镁应用对妊娠期高血压疾病患者胎盘中基质金属蛋白酶-9和水通道蛋白-9表达的影响

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中华医学杂志 2016年第30期96卷 2421-2423页

作者：李介岩张为远王欣邹丽颖首都医科大学附属北京妇产医院产科 100026

目的观察妊娠期高血压疾病患者胎盘中基质金属蛋白酶（MMP）－9和水通道蛋白（AQP）－9的蛋白含量及蛋白阳性表达强度，探讨硫酸镁治疗妊娠期高血压疾病的作用机制。方法将妊娠期高血压疾病患者分为治疗组（n＝51）和未治疗组（n＝45）... 详细信息

目的观察妊娠期高血压疾病患者胎盘中基质金属蛋白酶（MMP）－9和水通道蛋白（AQP）－9的蛋白含量及蛋白阳性表达强度，探讨硫酸镁治疗妊娠期高血压疾病的作用机制。方法将妊娠期高血压疾病患者分为治疗组（n＝51）和未治疗组（n＝45），另选择20例同期正常分娩的孕妇作为对照组。3组孕妇均于分娩后取胎盘组织，采用酶联免疫（ELISA）和免疫组织化学法检测各组胎盘中MMP－9和AQP－9的蛋白含量及蛋白阳性表达强度。结果治疗组胎盘组织中MMP－9含量（5.89±0.52） ng/L，蛋白阳性表达强度（灰度值）125.2±0.5；AQP－9含量（4.3±0.5）ng/L，蛋白阳性表达强度（灰度值）110±4；未治疗组胎盘组织中MMP－9含量（1.85±0.26 ）ng/L，蛋白阳性表达强度（灰度值）148.6±5.2；AQP－9含量（ 9.4±0.8） ng/L，蛋白阳性表达强度（灰度值）92±3；对照组胎盘组织中MMP－9含量（6.13±0.84） ng/L，蛋白阳性表达强度（灰度值）120.7±4.4；AQP－9含量（4.1±0.7） ng/L，蛋白阳性表达强度（灰度值）114±3。未治疗组较对照组胎盘组织中MMP－9蛋白含量及蛋白阳性表达强度明显降低，AQP－9蛋白含量及蛋白阳性表达强度明显升高（均P〈0.01）；治疗组较对照组胎盘组织中MMP－9蛋白含量及蛋白阳性表达强度略降低、AQP－9蛋白含量及蛋白阳性表达强度略升高（均P〉0.05）。结论硫酸镁能够上调MMP－9蛋白水平及下调AQP－9的蛋白水平，这可能是其治疗妊娠期高血压疾病的机制之一。

关键词：硫酸镁妊娠期高血压疾病基质金属蛋白酶9 水通道蛋白9