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利用Caco-2细胞模型对水溶性β-甘草酸跨膜转运的研究

利用Caco-2细胞模型对水溶性β-甘草酸跨膜转运的研究

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作者：王筱萌东北林业大学

学位级别：硕士

甘草是我国著名的传统中药,现代药理学研究表明,甘草酸是甘草中的主要活性成分,具有显著的肾上腺皮质激素样作用。可用于人体抗衰老、抗炎、降压、增强机体免疫力、提高生理机能、抑制癌细胞生长等。然而在临床前药物动力学研究表明,口... 详细信息

甘草是我国著名的传统中药,现代药理学研究表明,甘草酸是甘草中的主要活性成分,具有显著的肾上腺皮质激素样作用。可用于人体抗衰老、抗炎、降压、增强机体免疫力、提高生理机能、抑制癌细胞生长等。然而在临床前药物动力学研究表明,口服甘草酸后,产生了较低的血药浓度。为了研究较低血药浓度是否由于小肠的低吸收而产生的,我们利用Caco-2细胞模型对水溶性β-甘草酸吸收进行了研究,研究结果如下： 1.通过测定Caco-2细胞单分子层跨膜电阻,判断是否成功建立模型。在本实验的培养条件下,经过21天分化后,Caco-2细胞分化成了的单分子层结构,这一单分子层。跨膜电阻值大于300Ωcm2,符合建立模拟药物在小肠吸收转运的体外实验模型的要求。 2.采用MTT比色法研究了水溶性β-甘草酸对Caco-2细胞的细胞毒性。实验结果表明,小于60μM的药物对细胞没有毒性,而大于60μM的药物对细胞呈现毒性。 3.应用Caco-2细胞模型,对6个浓度(0.75μM、1.5μM、3μM、7.5μM、15μM30μM)的水溶性β-甘草酸,分别考察了从AP侧(顶侧)→BL侧(基底侧)和BL侧→AP侧的跨膜转运特性,结果,180min内6个浓度的转运随时间延长而呈线性关系。 4.水溶性β-甘草酸的Papp BL→AP由17.1±4.2×10-6cm/s变化到54.3+6.3×10-6cm/s,而Papp AP→BL则维持在15.6+3.4×10-6cm/s,表明水溶性β-苷草酸跨膜转运以被动扩散为主。 5.在AP侧加入P-糖蛋白的抑制剂维拉帕米和汉防己甲素之后,水溶性p-甘草酸从BL侧到AP侧的流出量大约都减少了50%-60%左右,说明水溶性β-甘草酸是P-糖蛋白的底物。 6.水溶性β-甘草酸的Papp AP→BL维持在15.6±3.4×10-6cm/s,大于10.0×10-6cm/s,暗示水溶性β-甘草酸具有良好的小肠吸收性。综上所述,口服水溶性p-甘草酸后,可以在小肠内较好的吸收,然而较低的血药浓度更可能是由于部分β-甘草酸水解成甘草次酸的缘故。

关键词：水溶性β-甘草酸 Caco-2细胞模型双向转运 P-糖蛋白抑制剂

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