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氧化应激介导孕期氰戊菊酯暴露致子代成年小鼠前额叶皮质DNA甲基化和焦虑样行为的改变

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氧化应激介导孕期氰戊菊酯暴露致子代成年小鼠前额叶皮质DNA甲基...

作者：郭梦娟安徽医科大学

学位级别：硕士

目的孕期暴露可通过表观遗传途径传递给后代并引发神经精神疾病,但目前表观遗传在氰戊菊酯暴露引起神经行为损伤中的作用还鲜有探究。本研究通过建立孕期氰戊菊酯暴露以及NAC干预的动物模型,研究孕期氰戊菊酯暴露及NAC干预后对子代成年... 详细信息

目的孕期暴露可通过表观遗传途径传递给后代并引发神经精神疾病,但目前表观遗传在氰戊菊酯暴露引起神经行为损伤中的作用还鲜有探究。本研究通过建立孕期氰戊菊酯暴露以及NAC干预的动物模型,研究孕期氰戊菊酯暴露及NAC干预后对子代成年小鼠焦虑样行为的影响。方法构建孕期氰戊菊酯暴露及补充N-乙酰半胱氨酸的动物模型。购买7周龄ICR小鼠,30只雄鼠60只雌鼠。适应性喂养一周后,按照雌雄2:1的比例合笼,持续五天。再将合笼成功的孕鼠按体重S型分组,每组12只一共四组,对照组灌胃于单纯玉米油乳化液,FEN组灌胃于融入玉米油乳化液的20mg/kg氰戊菊酯,NAC组灌胃于溶于水的100mg/kg的N-乙酰半胱氨酸,FEN+NAC组灌胃于20mg/kg氰戊菊酯和100mg/kg的N-乙酰半胱氨酸。灌胃持续整个孕期,直至分娩。将子代小鼠饲养至成年,一部分进行行为学实验检测小鼠的焦虑样行为,一部分剖杀取前额叶皮质,用于分子实验。行为学实验是测量小鼠焦虑样行为的旷场实验和高架十字迷宫实验;分子实验主要是测量前额叶皮质中5m C和5hm C含量的LC-MS/MS实验,测量Dnmts m RNA表达水平的RT-PCR实验,以及利用试剂盒检测前额叶皮质和血清中GSH、SOD和GSH-Px的含量与活性。结果在旷场实验中,FEN组子代雄鼠的站立次数和粪便颗粒数显著高于对照组,FEN+NAC组子代雄鼠的站立次数和粪便颗粒数显著低于FEN组。LC-MS/MS结果显示,与对照组相比,FEN组的子代雄鼠前额叶皮质中5m C的含量显著升高,与FEN组相比,FEN+NAC组的子代雄鼠前额叶皮质中5m C的含量显著降低。子代雌鼠的前额叶皮质中5m C和5hm C含量无统计学差异。RT-PCR结果显示,FEN组的子代雄鼠前额叶皮质组织中Dnmt3a m RNA表达水平显著上调,与FEN组相比,FEN+NAC组的子代雄鼠前额叶皮质组织中Dnmt3a m RNA表达水平显著下调,而四个组的Dnmt1和Dnmt3b m RNA表达水平未见明显差异。在子代小鼠的前额叶皮质组织中,FEN组的子代雄鼠GSH含量与对照组相比有下降趋势,与FEN组相比,FEN+NAC组的子代雄鼠GSH含量有上升趋势。在血清中,FEN组子代小鼠血清中GSH的含量和子代雄鼠血清GSH-Px活性显著降低,FEN+NAC组子代小鼠血清中GSH的含量增加,子代雄鼠血清GSH-Px活性升高。结论孕期氰戊菊酯暴露以性别依赖的方式增加了子代成年雄鼠的焦虑样行为,补充NAC后雄鼠焦虑样行为减少;孕期氰戊菊酯暴露导致子代雄鼠前额叶皮质组织DNA高甲基化和Dnmt3a m RNA表达上调,补充NAC部分抑制雄鼠前额叶皮质组织的DNA高甲基化和Dnmt3a m RNA表达;孕期氰戊菊酯暴露导致子代小鼠氧化应激,补充NAC部分抑制氧化应激效应。

关键词：孕期氰戊菊酯焦虑 DNA甲基化谷胱甘肽

氰戊菊酯过度激活Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路诱发线粒体损伤干扰TM3细胞睾酮合成

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遵义医科大学学报 2023年第11期46卷 1032-1040页

作者：姚金玲李廷兵胡静万小榆孔德营遵义医科大学基础医学院生理学教研室贵州遵义563099

目的利用胞内Ca^(2+)螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA... 详细信息

目的利用胞内Ca^(2+)螯合剂BAPTA-AM和CaM阻断剂TFP探讨Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路在氰戊菊酯(Fen)诱发小鼠睾丸间质细胞(TM3细胞)线粒体损伤和睾酮合成障碍中的作用。方法TM3细胞实验分为对照组、Fen暴露组(25μmol/L Fen)、Fen+BAPTA-AM组(25μmol/L Fen+5 mmol/L BAPTA-AM)、Fen+TFP组(25μmol/L Fen+10μmol/L TFP),Fen暴露时长为24 h。采用ELISA法检测TM3细胞的睾酮和环磷酸腺苷(cAMP)水平,化学比色法检测TM3细胞的ATP水平,Flou-4/AM探针测定细胞内Ca^(2+)水平,JC-1染色法测定TM3细胞的线粒体膜电位(MMP)改变,蛋白免疫印迹法检测CYP11A1、3β-HSD、StAR、CaM、p-CaMKⅡ、CaMKⅡ、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果Fen暴露组TM3细胞的T、ATP和cAMP含量下降,MMP水平降低,睾酮合成的相关蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达减少(P<0.01);同时,TM3细胞胞内的Ca^(2+)水平显著上升(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ、Bax蛋白表达升高(P<0.01),Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01)。Fen+BAPTA-AM组和Fen+TFP组TM3细胞的睾酮、ATP和cAMP含量上升,MMP水平升高(P<0.01),睾酮合成相关的蛋白和酶CYP11A1、3β-HSD、StAR表达增加(P<0.01),CaM、p-CaMKⅡ/CaMKⅡ及Bax蛋白表达下降,Bcl-2蛋白表达增加(P<0.01)。结论Fen诱发的TM3细胞mPTP开放以及睾酮合成障碍可能与Fen暴露后TM3细胞胞内Ca^(2+)超载、CaM和p-CaMKⅡ表达上调引起的Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路过度激活有关。

关键词：氰戊菊酯 TM3细胞睾酮 Ca^(2+)/CaM/CaMKⅡ信号通路 mPTP开放

猪骨氮掺杂碳量子点的制备及对Co2+和氰戊菊酯的检测研究

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猪骨氮掺杂碳量子点的制备及对Co2+和氰戊菊酯的检测研究

作者：钱玟四川农业大学

学位级别：硕士

碳量子点(CQDs)作为一种新型的碳纳米材料,具有光致发光稳定、水溶性、易功能化、生物相容性好、低毒性等优异特性,备受研究者的关注,在检测领域已显示出独特的应用潜力。钴(Co)是人体营养中必不可少的元素,但过量摄入钴会导致哮喘、甲... 详细信息

碳量子点(CQDs)作为一种新型的碳纳米材料,具有光致发光稳定、水溶性、易功能化、生物相容性好、低毒性等优异特性,备受研究者的关注,在检测领域已显示出独特的应用潜力。钴(Co)是人体营养中必不可少的元素,但过量摄入钴会导致哮喘、甲状腺功能减退等疾病。氰戊菊酯(FEN)在提高农业生产力方面发挥了重要作用,但过量摄入会严重影响人体内分泌系统和免疫系统,增加患各种疾病的风险。本文以生物质废弃物猪骨(棒子骨)为碳源,乙二胺为氮源,采用水热法合成猪骨氮掺杂碳量子点(N-CQDs),建立了一种快速检测Co和FEN的碳量子点荧光分析方法,并用于实际样品中Co和FEN的检测。主要内容如下:1.N-CQDs的制备及表征:通过一步水热法,以生物质猪骨为碳源合成高荧光强度的N-CQDs,考察了反应温度、反应时间、骨粉量、乙二胺量等对N-CQDs荧光性能的影响。以荧光强度为考察指标优化得出N-CQDs的最佳制备条件为,反应温度200℃,反应时间12 h,骨粉量6 g,乙二胺量0.8 m L,并测定荧光量子产率为26.4%。采用TEM、XRD、FTIR、XPS、酶标仪、分光光度计等手段对N-CQDs进行表征。结果显示,该N-CQDs具有良好的光学性质、结构性质和稳定性。N-CQDs平均粒径为2.34 nm,最大激发波长417 nm,最大发射波长为488 nm。考察了贮藏时间、紫外照射时间、p H、离子强度等条件对N-CQDs荧光强度的影响。结果表明N-CQDs在4℃条件下保存63天,在紫外照射180 min、不同浓度Na Cl条件和较宽的p H范围内,N-CQDs依然显示出强荧光、良好的稳定性和抗漂白性。2.N-CQDs检测Co:当向N-CQDs溶液中加入15种代表性金属离子时,N-CQDs荧光强度仅被Co选择性猝灭,并研究了食品中常见金属阳离子、阴离子和氨基酸小分子物质是否对N-CQDs检测Co产生干扰。结果表明N-CQDs对Co的检测具有高选选择性和抗干扰能力。基于Co对N-CQDs的荧光猝灭效应,从而建立了一种快速检测Co的新方法。当Co的加入量在0-100μg/m L范围内,N-CQDs的荧光猝灭程度(F/F)随Co浓度的增加而逐渐下降。N-CQDs荧光猝灭强度与Co浓度在0-15μg/m L和30-80μg/m L呈良好的线性关系,检出限为20μg/L。通过体系反应过程的紫外光谱和Stern-volmer方程拟合方法考察N-CQDs荧光探针与Co的猝灭机理,结果表明,Co对N-CQDs的荧光猝灭是一种静态猝灭。实际样品检测中加标回收率为97.26%-109.14%,RSD<3.24%,能够应用于实际水样中Co含量的测定。3.N-CQDs检测FEN:将FEN和几种结构类似物分别添加到N-CQDs的水溶液中,结果显示仅FEN具有猝灭N-CQDs荧光强度的能力,且加入干扰物质后对FEN的测定基本无影响。基于FEN对N-CQDs的荧光淬灭效应,构建了一种灵敏度高、选择性好的荧光检测方法。结果表明随着FEN浓度的增加,N-CQDs在488 nm处的荧光强度逐渐降低。N-CQDs对FEN的线性检出范围为0.01-1μg/m L和8-100μg/m L,检出限为7.3μg/L。通过紫外可见吸收光谱和Stern-volmer方程拟合方法探究了N-CQDs荧光探针与FEN的猝灭机理,结果表明,FEN对N-CQDs的荧光猝灭是一种静态猝灭。实际样品检测中加标回收率为93.00%-107.14%,RSD<3.11%,可有效检测实际样品中的FEN。当Co与FEN共存时,可在N-CQDs溶液中加入乙二胺四乙酸(EDTA),EDTA使得N-CQDs/Co荧光强度得到恢复,而N-CQDs/FEN荧光强度基本无变化。将Co和FEN的混合溶液加入含有EDTA的N-CQDs溶液中,根据FEN的线性关系方程计算FEN含量。同时,将混合溶液加入不含EDTA的N-CQDs溶液中,记录荧光猝灭率,基于荧光相加原理,根据Co线性关系方程计算Co含量。

关键词：氮掺杂碳量子点猪骨荧光探针钴离子氰戊菊酯

氰戊菊酯α体和β体在成品质量指标中的地位研究

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中文科技期刊数据库（全文版）工程技术 2022年第8期 152-157页

作者：王建民河南平煤神马东大化学有限公司河南开封475003

氰戊菊酯是近年来合成的非菊酸系拟除虫菊醋类杀虫剂的一个新品种,具有多种异构体的活性物质,本文对不同合成条件下非对映体的量比、非对映体α体(RS+SR)、β体(RR+SS)分离度及保留性进行对比,同时分别运用点滴法、浸渍法、胃毒法对氰... 详细信息

氰戊菊酯是近年来合成的非菊酸系拟除虫菊醋类杀虫剂的一个新品种,具有多种异构体的活性物质,本文对不同合成条件下非对映体的量比、非对映体α体(RS+SR)、β体(RR+SS)分离度及保留性进行对比,同时分别运用点滴法、浸渍法、胃毒法对氰戊菊酯进行生物活性试验进行研究。结果表明:α体(RS+SR)和β体(RR+SS)两对非对映体的量比关系既非等量,又非定比。故提出氰戊菊酯非对映体的比值也应作为该药药效活性质量指标进行考核。

关键词：氰戊菊酯非对映体量比

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氰戊菊酯对雄性大鼠生殖系统的时间毒性

卫生研究 2012年第6期41卷 905-910页

作者：秦粉菊袁红霞陈丽莉姜秉成童建张洁苏州科技学院化学与生物工程学院苏州215009 苏州大学公共卫生学院

目的研究农药氰戊菊酯(Fen)对雄性生殖功能系统的时间毒性及机制。方法选择健康雄性SD大鼠49只,以光照起点时间定为ZT 0,将自然时间转换为授时时间(ZT)。将大鼠分为对照组和6个Fen染毒组。Fen染毒组:以mg/kg BW的灌胃剂量分别在ZT 02、Z... 详细信息

目的研究农药氰戊菊酯(Fen)对雄性生殖功能系统的时间毒性及机制。方法选择健康雄性SD大鼠49只,以光照起点时间定为ZT 0,将自然时间转换为授时时间(ZT)。将大鼠分为对照组和6个Fen染毒组。Fen染毒组:以mg/kg BW的灌胃剂量分别在ZT 02、ZT 06、ZT 10、ZT 14、ZT 18、ZT 22授时时间点给药,连续30d;对照组给予等量食用调和油。制作睾丸HE病理切片,测定每日精子生成量(DSP)、检测精子活率(LSR)、畸形率(ASR)及睾丸标志酶(ACP和γ-GT)活性,应用RIA法测定大鼠睾丸中的睾酮(T)和雌二醇(E2)水平。结果 (1)与对照组相比,Fen引起大鼠睾丸组织病理性改变,且在ZT 18时损伤最为严重;Fen降低了雄性大鼠每日精子生成量、精子活率、睾丸标志酶活性和睾酮含量,增加了雌二醇含量和精子畸形率。(2)Fen引起大鼠雄性生殖指标每日精子生成量、精子活率、睾丸磷酸酶活性的变化具有昼夜节律性,其敏感时间点分别为:ZT 04、ZT 14、ZT 23。结论 Fen对雄性生殖指标具有毒性并在每日精子生成量、精子活率、睾丸磷酸酶活性中表现出一定的昼夜时间节律性。

关键词：氰戊菊酯生殖系统时间毒性雄性

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氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应影响及作用机理

中国药理学与毒理学杂志 2002年第1期16卷 21-24页

作者：张习春肖杭张莉王心如南京医科大学公共卫生学院应用毒理学研究所江苏南京210029

目的　观察氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应的影响并探讨其作用机理。方法　采用顶体反应诱导试验结合细胞染毒 ,以考马斯亮蓝染色法判定精子顶体反应。结果　孕酮或A2 3187诱导的小鼠精子顶体反应 ,可被 2mmol·L- 1EDTA和 1.8mmol·L- 1Mn... 详细信息

目的　观察氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应的影响并探讨其作用机理。方法　采用顶体反应诱导试验结合细胞染毒 ,以考马斯亮蓝染色法判定精子顶体反应。结果　孕酮或A2 3187诱导的小鼠精子顶体反应 ,可被 2mmol·L- 1EDTA和 1.8mmol·L- 1Mn2 +相应地完全抑制 ;5 0 μmol·L- 1氰戊菊酯则有明显抑制作用。实验还发现氰戊菊酯在精子获能前或后加入 ,对孕酮诱发顶体反应的抑制率不同 ,获能前抑制率低 ,二者存在显著性差异。结论　氰戊菊酯对小鼠精子顶体反应有抑制作用。

关键词：氰戊菊酯精子顶体反应获能作用机理小鼠影响

氰戊菊酯通过干扰雌激素作用引起小鼠海马神经细胞损伤

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中华劳动卫生职业病杂志 2014年第7期32卷 493-499页

作者：陆林玲吕震张龙夏新王取南安徽医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室合肥230032

目的探讨氰戊菊酯（fenvalerate,FEN）能否通过干扰雌激素（E2）的作用引起小鼠海马神经细胞损伤.方法取孕18d的ICR小鼠胚胎海马细胞原代培养,建立小鼠海马神经元和星形胶质细胞的混合培养模型.以氰戊菊酯（FEN,0、1、10、50 μg/ml）... 详细信息

目的探讨氰戊菊酯（fenvalerate,FEN）能否通过干扰雌激素（E2）的作用引起小鼠海马神经细胞损伤.方法取孕18d的ICR小鼠胚胎海马细胞原代培养,建立小鼠海马神经元和星形胶质细胞的混合培养模型.以氰戊菊酯（FEN,0、1、10、50 μg/ml）,FEN（0、10、50 μg/ml）联合雌激素受体抑制剂（ICI 182,780,1μmol/L）,FEN（0、10、50 μg/ml）联合E2（10 nmol/L）对体外培养7d后的细胞染毒48 h.采用免疫荧光细胞化学方法检测神经元和星形胶质细胞的相对数量,测量神经元的突起长度.结果 1 μg/ml FEN组混合培养的小鼠海马神经元数量、神经突起和原浆型星形胶质细胞均无明显改变,10和50μg/ml FEN组海马神经元数目减少,突起长度缩短,原浆型星形胶质细胞比例增加,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.ICI 182,780单独作用组神经元数量、突起长度和原浆型星形胶质细胞均无明显改变.ICI＋ 10 μg/ml FEN组海马神经元数目增加,突起长度延长,原浆型星形胶质细胞比例减少,与10 μg/ml FEN单独作用组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）; ICI＋50 μg/ml FEN组海马神经元数目增加,原浆型星形胶质细胞比例减少,与50 μg/ml FEN单独作用组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.E2单独组神经元数目增加,神经突起长度延长,与对照组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）;E2＋10 μg/ml FEN组和E2＋ 50μg/ml FEN组神经元数目减少,突起长度缩短,原浆型星形胶质细胞比例增加,与E2单独作用组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 FEN可通过干扰E2的经典核受体信号通路引起混合培养的海马神经元丢失,可通过干扰E2的经典核受体信号和膜受体通路抑制神经突起生长,FEN对E2的干扰效应在其神经发育毒性中起重要作用.

关键词：氰戊菊酯海马雌激素

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氰戊菊酯通过干扰雌激素作用致神经发育毒性

中华劳动卫生职业病杂志 2014年第7期32卷 487-492页

作者：吕震王取南陆林玲夏新张龙安徽医科大学公共卫生学院卫生毒理学教研室合肥230032

目的探讨雌激素干扰特性在氰戊菊酯神经发育毒性中的作用.方法 4周龄健康雌性ICR小鼠30只,随机分为6组：假手术组、假手术给予氰戊菊酯（5μg/g）处理组、卵巢切除后对照组、卵巢切除后给予雌激素（E2,10μg/g）处理组、卵巢切除后给... 详细信息

目的探讨雌激素干扰特性在氰戊菊酯神经发育毒性中的作用.方法 4周龄健康雌性ICR小鼠30只,随机分为6组：假手术组、假手术给予氰戊菊酯（5μg/g）处理组、卵巢切除后对照组、卵巢切除后给予雌激素（E2,10μg/g）处理组、卵巢切除后给予氰戊菊酯处理组、卵巢切除后给予雌激素和氰戊菊酯处理组,每组5只,腹腔注射给药,每天1次,连续7d,末次染毒24 h后分离海马.用免疫荧光组织化学技术检测海马CA1、CA3和DG区神经元标志物（NeuN）和星形胶质细胞标志物（GFAP）.结果与假手术组[CA1（54.00±1.73）、CA3（59.00±1.73）、DG（100.00±4.58）]比较,假手术给予氰戊菊酯处理组[CA1（37.67±2.08）、CA3（41.33±1.15）、DG（80.67±0.58）]和卵巢切除后对照组[CA1（44.00±3.00）、CA3（51.00±3.00）、DG（83.00±1.72）]海马各区神经元（NeuN阳性）细胞数均明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.与卵巢切除后对照组比较,卵巢切除后给予氰戊菊酯处理组海马各分区NeuN阳性细胞数无明显改变.与卵巢切除后给予氰戊菊酯处理组[CA1 （47.67±3.21）、DG（87.33±4.04）]比较,假手术后给予氰戊菊酯处理和卵巢切除后给予雌激素和氰戊菊酯处理[CA1 （40.00±1.00）、DG（78.67±2.31）]NeuN阳性细胞数均明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.与假手术组[CA3（11.00±1.12）、DG（10.67±1.15）]比较,假手术后给予氰戊菊酯处理组[CA3（18.67±2.07）、DG（16.33±1.53）]星形胶质细胞（GFAP阳性）细胞明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.与假手术后给予氰戊菊酯处理组比较,卵巢切除后给予氰戊菊酯处理组[CA3（12.00±1.00）、DG（11.68±1.16）]GFAP阳性细胞明显减少,差异有统计学意义（P＜0.05）.与卵巢切除后给予氰戊菊酯处理组比较,假手术后给予氰戊菊酯处理组和卵巢切除后给予雌激素和氰戊菊酯处理组[CA3（16.67±2.13）、DG（15.38±1.42）] GFAP阳性细胞数明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论氰戊菊酯干扰循环雌激素作用是其发挥神经发育毒性的重要作用机制.

关键词：氰戊菊酯海马雌激素

氰戊菊酯染毒大鼠肺泡巨噬细胞超微结构的定量分析

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中国药理学与毒理学杂志 1989年第2期3卷 130-137页

作者：王心如翟为雷南京医学院卫生系南京210005

根据立体学原理和方法,对染毒氰戊菊酯大鼠肺泡巨噬细胞超微结构改变进行了定量分析。主要结构参数包括细胞核、细胞浆、线粒体、溶酶体、高尔基体、粗面和滑面内质网以及脂滴的体密度,脂滴、溶酶体、线粒体外膜的面密度和数密度。绝大... 详细信息

根据立体学原理和方法,对染毒氰戊菊酯大鼠肺泡巨噬细胞超微结构改变进行了定量分析。主要结构参数包括细胞核、细胞浆、线粒体、溶酶体、高尔基体、粗面和滑面内质网以及脂滴的体密度,脂滴、溶酶体、线粒体外膜的面密度和数密度。绝大多数参数呈现明显的剂量依赖关系和时间反应特征。

关键词：氰戊菊酯肺泡巨噬细胞超微结构