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RP-HPLC法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量

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中国实验方剂学杂志 2009年第4期15卷 26-28页

作者：赵丽恋刘韶罗杰英湖南中医药大学湖南长沙410007 中国中医药科技开发交流中心北京100027 中南大学湘雅医院湖南长沙410008

目的：建立RP-HPLC法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量的方法。方法：采用Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-水-0.2%磷酸二氢钠（30∶40∶30）,检测波长328 nm,流速为1.0 ***^-1。结果：氯化两面针碱的线性范... 详细信息

目的：建立RP-HPLC法测定飞龙掌血中氯化两面针碱的含量的方法。方法：采用Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm,5μm）,流动相为乙腈-水-0.2%磷酸二氢钠（30∶40∶30）,检测波长328 nm,流速为1.0 ***^-1。结果：氯化两面针碱的线性范围为0.03-0.48μg,r=0.999 9。平均加样回收率为99.33%,RSD=3.30%。结论：该法简便、准确、重现性好,可用于飞龙掌血的质量控制。

关键词：反相高效液相色谱飞龙掌血氯化两面针碱

氯化两面针碱通过MAPK信号通路抑制乳腺癌及肝癌细胞转移的机制

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中国临床药学杂志 2018年第3期27卷 143-148页

作者：钱峰上海市公共卫生临床中心药剂科上海201508

目的探讨氯化两面针碱(NC)通过MAPK信号通路调控乳腺癌及肝癌细胞转移的机制。方法人乳腺癌细胞MDA-MB-231及肝癌HepG2细胞给予不同浓度的NC处理,利用MTS法检测细胞增殖能力;利用Wound-healing及Matrigelbased transwell invasion实验... 详细信息

目的探讨氯化两面针碱(NC)通过MAPK信号通路调控乳腺癌及肝癌细胞转移的机制。方法人乳腺癌细胞MDA-MB-231及肝癌HepG2细胞给予不同浓度的NC处理,利用MTS法检测细胞增殖能力;利用Wound-healing及Matrigelbased transwell invasion实验检测细胞迁移、侵袭能力;利用荧光定量PCR及Western blot方法检测肿瘤转移相关蛋白的表达情况及MAPK信号通路活性。结果与对照组相比,NC处理后MDA-MB-231及HepG2细胞增殖能力明显受到抑制,且增殖抑制率随着NC浓度的增加逐渐明显(P 0. 05)。结论 NC通过MAPK信号通路,抑制乳腺癌及肝癌细胞转移,为临床用药提供有价值的实验资料。

关键词：氯化两面针碱乳腺癌肝癌肿瘤转移 MAPK信号通路

氯化两面针碱对类泛素化修饰抑制剂MLN4924介导肺癌耐药的作用与机制研究

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上海中医药大学学报 2023年第4期37卷 22-27,101页

作者：李蒙张荔赵伟丽李立辉上海中医药大学附属龙华医院肿瘤研究所上海200032

目的:探索中药药效物质氯化两面针碱对A549 MLN4924耐药肺癌细胞株的影响及作用机制。方法:利用MLN4924低剂量处理A549细胞6个月,并进行细胞半数抑制率(IC50)分析和Western blot检测以确保顺利诱导出MLN4924耐药细胞株(A549-MR);氯化两... 详细信息

目的:探索中药药效物质氯化两面针碱对A549 MLN4924耐药肺癌细胞株的影响及作用机制。方法:利用MLN4924低剂量处理A549细胞6个月,并进行细胞半数抑制率(IC50)分析和Western blot检测以确保顺利诱导出MLN4924耐药细胞株(A549-MR);氯化两面针碱浓度梯度和时间梯度处理A549-MR,并进行ATPLite细胞增殖分析、细胞计数检测其对A549-MR生长的影响;同时收集A549-MR细胞总蛋白进行Western blot检测氯化两面针碱抑制A549-MR生长的分子机制。结果:IC50分析和Western blot实验显示,经低剂量长时间处理A549细胞后,MLN4924对A549细胞的IC50从0.355μmol/L提高至10.643μmol/L,且其不能显著抑制Cullins家族蛋白的类泛素化修饰(neddylation);细胞增殖分析显示,氯化两面针碱显著抑制MLN4924耐药肺癌细胞生长;Western blot结果显示,氯化两面针碱能下调A540-MR细胞内的Cullins蛋白表达并引起其抑癌底物蛋白p21、p27等积聚。结论:氯化两面针碱通过抑制泛素连接酶(CRLs)复合体的活性,导致其下游抑癌蛋白底物积聚,从而抑制neddylation抑制剂MLN4924引起的肺癌耐药细胞增殖。

关键词：氯化两面针碱 MLN4924 耐药泛素连接酶复合体

辐射及氯化两面针碱对宫颈癌中IER5基因表达影响的研究

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辐射及氯化两面针碱对宫颈癌中IER5基因表达影响的研究

作者：郭冬梅辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的：本实验旨在研究人宫颈癌组织中IER5基因的表达与辐射剂量的效应关系，以及氯化两面针碱对人宫颈癌Hela细胞中IER5基因表达的影响，初步探讨氯化两面针碱的辐射增敏作用。材料与方法：本实验收集整理44例宫颈癌组织，均取自2011... 详细信息

目的：本实验旨在研究人宫颈癌组织中IER5基因的表达与辐射剂量的效应关系，以及氯化两面针碱对人宫颈癌Hela细胞中IER5基因表达的影响，初步探讨氯化两面针碱的辐射增敏作用。材料与方法：本实验收集整理44例宫颈癌组织，均取自2011年11月至2012年12月期间在辽宁省肿瘤医院的宫颈癌患者的组织标本。其中包括治疗前组、10Gy辐射组、20Gy辐射组、30Gy辐射组、40Gy辐射组、50Gy辐射组和放疗量≧50Gy辐射组。采用werstern blot检测IER5蛋白表达量情况。同时体外培养人宫颈癌Hela细胞为研究对象，用不同浓度的氯化两面针碱处理Hela细胞24小时和48小时，及氯化两面针碱联合辐射处理Hela细胞，用MTT法检测Hela细胞生长抑制情况;用流式细胞仪检测Hela细胞凋亡情况，用werstern blot检测Hela细胞IER5蛋白表达量情况。结果： 1辐射对宫颈癌组织IER5表达：治疗前组灰度值为0.87±0.15，10Gy辐射组灰度值为0.81±0.13，20Gy辐射组灰度值为1.37±0.19，30Gy辐射组灰度值为1.53±0.47，40Gy辐射组灰度值为1.12±0.24，50Gy辐射组组灰度值为0.95±0.83，>50Gy辐射组灰度值为1.05±0.26。10Gy辐射组与治疗前组相比P=0.636>0.05,差异不具有统计学意义;20Gy辐射组、30Gy辐射组及40Gy辐射组分别与治疗前组相比P50Gy辐射组分别与治疗前组相比P>0.05，其差异不具有统计学意义。30Gy辐射组与其他组相比P氯化两面针碱对Hela细胞的影响 ***法检测细胞增殖活性结果显示：氯化两面针碱能够抑制Hela细胞生长,并呈一定的“时间-剂量”依赖性（P氯化两面针碱联合辐射后其“时间-剂量”依赖性依然存在（P氯化两面针碱联合辐射组与单纯用药组相比，对肿瘤细胞的生长抑制率前者高于后者，差异（P氯化两面针碱在4μg/ml组在48小时后抑制率达47.7%接近半数抑制率，使用ORIGIN50软件分析MTT数据及分析画图测出48小时氯化两面针碱IC50为3.97418μg/ml。 2.2流式细胞术检测细胞凋亡结果：氯化两面针碱能够使Hela细胞凋亡,并呈一定的“时间-剂量”依赖性（P氯化两面针碱联合辐射组与单纯用药组相比，在同一时间、同一浓度相比细胞凋亡率前者高于后者（P氯化两面针碱可能诱导IER5表达上调。辐射联合药物组与辐射组相比，IER5表达量是辐射组的1.21倍，IER5表达量是对照组的1.47倍。结论： 1宫颈癌组织中IER5基因在辐射剂量20～40Gy之间时，IER5蛋白表达上调，在一定的辐射剂量下，IER5基因随着辐射剂量增加表达量大致呈先升高在下降的趋势，并且30Gy辐射组IER5基因上调最明显。 2氯化两面针碱能够抑制宫颈癌Hela细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡，并呈一定的“时间-剂量”依赖性（P氯化两面针碱联合辐射后能够抑制宫颈癌Hela细胞生长，促进肿瘤细胞凋亡，呈一定的“时间-剂量”依赖性（P<0.05）。其机制可能与上调辐射敏感基因IER5有关。

关键词： IER5 宫颈癌氯化两面针碱 Hela细胞放射增敏

氯化两面针碱体外对人喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响

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中国医药导报 2019年第16期16卷 17-20,36页

作者：董涛吴倩北京市中西医结合医院药剂科北京100039 湖北文理学院附属医院湖北省襄阳市中心医院药学部湖北襄阳441021

目的研究氯化两面针碱体外对人喉癌细胞株Hep-2增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法体外培养Hep-2细胞,以5、10、20、40、60、80μmol/L的氯化两面针碱作用细胞,MTT法检测不同时间和不同浓度的氯化两面针碱对细胞生长的抑制作用;Annexin... 详细信息

目的研究氯化两面针碱体外对人喉癌细胞株Hep-2增殖、凋亡、侵袭及迁移的影响。方法体外培养Hep-2细胞,以5、10、20、40、60、80μmol/L的氯化两面针碱作用细胞,MTT法检测不同时间和不同浓度的氯化两面针碱对细胞生长的抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测10、20、40μmol/L的氯化两面针碱对细胞凋亡的影响;Transwell小室法检测5、10μmol/L的氯化两面针碱对细胞的侵袭和迁移能力的影响。结果在5、10、20、40、60、80μmol/L浓度范围内,氯化两面针碱对Hep-2细胞的生长抑制率随着时间的延长逐渐升高,明显高于对照组同一时间点细胞(P 氯化两面针碱诱导Hep-2细胞凋亡率逐渐增多,与细胞对照组比较,差异有统计学意义(P 氯化两面针碱组比较,20、40μmol/L氯化两面针碱组Hep-2细胞凋亡率明显升高,差异有统计学意义(P 氯化两面针碱可显著降低Hep-2细胞侵袭和迁移细胞数(P 氯化两面针碱组比较,10μmol/L氯化两面针碱组降低得更多(P 氯化两面针碱可抑制人喉癌细胞株Hep-2细胞的生长,该抑制作用与诱导其凋亡及降低其侵袭和迁移能力有关。

关键词：氯化两面针碱 Hep-2 增殖凋亡侵袭迁移

氯化两面针碱对肝癌细胞Bel-7402自噬的影响

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广西医科大学学报 2021年第5期38卷 989-993页

作者：廖艺楠冯洁广西医科大学药学院南宁530021

目的:探讨氯化两面针碱(NC)对肝癌Bel-7402细胞系自噬的影响。方法:选取肝癌Bel-7402细胞株,在透射电子显微镜下观察NC处理Bel-7402细胞24 h后吞噬泡、自噬小体、自噬溶酶体等结构;Western bloting检测微管相关蛋白轻链3(LC3)和P62蛋白... 详细信息

目的:探讨氯化两面针碱(NC)对肝癌Bel-7402细胞系自噬的影响。方法:选取肝癌Bel-7402细胞株,在透射电子显微镜下观察NC处理Bel-7402细胞24 h后吞噬泡、自噬小体、自噬溶酶体等结构;Western bloting检测微管相关蛋白轻链3(LC3)和P62蛋白表达水平的改变;采用CCK-8法检测不同浓度NC(0μmol/L、1.5μmol/L、3μmol/L、6μmol/L、12μmol/L、24μmol/L)在加入或不加入自噬抑制剂氯喹(CQ)处理细胞24 h后对细胞增殖能力的影响。结果:与阴性对照组比较,Bel-7402细胞经过12μmol/L NC处理24 h后,在透射电镜显微镜下观察到细胞产生大量空泡,出现自噬小体和自噬溶酶体等结构;随着药物剂量增大,自噬相关蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值增加(P<0.05),P62表达降低(P<0.05);CCK-8法检测结果表明,随着NC给药剂量增加,细胞死亡增多(P<0.05),加入CQ能减轻NC导致的细胞死亡(P<0.05)。结论:NC能激活肝癌Bel-7402细胞自噬,引起Bel-7402细胞自噬性死亡。

关键词：肝癌 Bel-7402细胞氯化两面针碱自噬

氯化两面针碱抑制肿瘤血管生成相关靶标蛋白的初步筛选

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广西医科大学学报 2017年第5期34卷 650-653页

作者：傅宣皓秦悦黄燚燚谢雪平成晓静刘华钢赖泽锋广西医科大学药学院南宁530021 广西医科大学生命科学研究院南宁530021

目的:初步筛选出氯化两面针碱(NC)抑制肿瘤血管生成的分子靶标。方法:将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为空白对照组及不同浓度(30μmol/L和60μmol/L)NC的实验组,采用细胞划痕实验检测经NC干预24h和48h后HUVEC的迁移能力;western blott... 详细信息

目的:初步筛选出氯化两面针碱(NC)抑制肿瘤血管生成的分子靶标。方法:将人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)分为空白对照组及不同浓度(30μmol/L和60μmol/L)NC的实验组,采用细胞划痕实验检测经NC干预24h和48h后HUVEC的迁移能力;western blotting法检测NC干预后HUVEC中血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平。以计算机辅助药物设计软件SYBYL 2.0对NC与肿瘤血管生成相关信号通路受体蛋白进行分子对接,以Pymol软件绘制三维结构图并分析NC与受体蛋白的相互作用。结果:与空白对照组比较,30μmol/L和60μmol/L NC实验组细胞迁移率显著降低(P<0.001),各实验组的VEGF蛋白表达水平均显著下调(P<0.01)。分子对接结果表明,在肿瘤血管生成信号通路中NC与磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和非受体酪氨酸激酶c-Src主要通过氢键和疏水场相互作用,亲和力较强。结论:NC能够下调VEGF的表达来抑制HUVEC的迁移,进而抑制肿瘤血管生成,PI3K和c-Src是NC抑制肿瘤血管生成的潜在靶标。

关键词：氯化两面针碱血管生成分子对接靶标 PI3K c-Src

氯化两面针碱磷脂复合物制备工艺的正交设计研究

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广西医科大学学报 2019年第11期36卷 1839-1843页

作者：叶勇章波檀燕君麦琬婷朱滴新刘华钢黄秋洁广西医科大学药学院南宁530021 广西中医药大学药学院南宁530001

目的:探索氯化两面针碱磷(NC)脂复合物(NC-PC)制备的最佳工艺条件。方法:以NC与磷脂的复合率为评价指标,分别对不同反应溶剂、反应时间、反应温度、药物反应浓度、药物磷脂投料比等因素进行考察,再通过综合的单因素试验和正交试验探究... 详细信息

目的:探索氯化两面针碱磷(NC)脂复合物(NC-PC)制备的最佳工艺条件。方法:以NC与磷脂的复合率为评价指标,分别对不同反应溶剂、反应时间、反应温度、药物反应浓度、药物磷脂投料比等因素进行考察,再通过综合的单因素试验和正交试验探究最佳的制备工艺。结果:最佳的制备条件:以甲醇为溶剂,NC的浓度为0.5 mg/mL,NC与磷脂的投料比为1∶3(mol/mol),反应温度为40℃,反应时间为1.5 h。此条件可使NC与磷脂的复合率达到85%以上。结论:所采用的复合物的制备工艺稳定可行,复合率高,为NC的制剂学研究提供了参考依据。

关键词：氯化两面针碱磷脂复合物制备工艺正交设计

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阳离子树脂纯化两面针中氯化两面针碱

时珍国医国药 2010年第11期21卷 2779-2781页

作者：卢凌春方琳乔龙盛京广西医科大学药学院广西南宁530021

目的筛选富集纯化氯化两面针碱的最佳树脂及最佳工艺。方法通过静态吸附-解吸的方法,以氯化两面针碱和总生物碱的吸附率及解吸附率为指标,综合评判确定最佳纯化工艺。结果 Ls006树脂对氯化两面针碱的分离效果最好。通过Ls006树脂分离纯... 详细信息

目的筛选富集纯化氯化两面针碱的最佳树脂及最佳工艺。方法通过静态吸附-解吸的方法,以氯化两面针碱和总生物碱的吸附率及解吸附率为指标,综合评判确定最佳纯化工艺。结果 Ls006树脂对氯化两面针碱的分离效果最好。通过Ls006树脂分离纯化后,终产品中氯化两面针碱的纯度大于90%,保留率达到56.84%。结论采用Ls006阳离子树脂分离纯化两面针中氯化两面针碱,操作简单,纯化效果突出。

关键词：两面针氯化两面针碱阳离子树脂纯化