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氨磺灵、氟乐灵和秋水仙素诱导安祖花多倍体的研究

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园艺学报 2014年第11期41卷 2275-2280页

作者：储丽红彭佳佳王钊赵凯袁素霞明军刘春中国农业科学院蔬菜花卉研究所北京100081 南京林业大学风景园林学院南京210037 宁夏大学农学院银川750021

采用氨磺灵、氟乐灵和秋水仙素对‘Dakota’安祖花组培苗进行浸泡处理,诱导多倍体产生。结果表明,15 mg·L-1氨磺灵处理7 d,死亡率为14.58%,诱导率达48.72%;100 mg·L-1氟乐灵处理5 d,死亡率为16.67%,诱导率达71.79%;0.5%秋水仙素处理5... 详细信息

采用氨磺灵、氟乐灵和秋水仙素对‘Dakota’安祖花组培苗进行浸泡处理,诱导多倍体产生。结果表明,15 mg·L-1氨磺灵处理7 d,死亡率为14.58%,诱导率达48.72%;100 mg·L-1氟乐灵处理5 d,死亡率为16.67%,诱导率达71.79%;0.5%秋水仙素处理5 d,死亡率为31.11%,诱导率达62.96%。

关键词：安祖花氨磺灵氟乐灵秋水仙素多倍体诱导除草剂

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氨磺灵诱导滇杨多倍体及倍性鉴定

西部林业科学 2023年第5期52卷 103-109页

作者：李启少沈伟祥曹正英李子涵余青富李斌辛培尧西南林业大学国家林业和草原局西南风景园林工程技术研究中心云南昆明650224 西南林业大学西南地区生物多样性保育国家林业和草原局重点实验室云南昆明650224 毕节市林业科学研究所贵州毕节551700

氨磺灵是一种三硝基苯胺类除草剂,在应用于植物多倍体的诱导中,取到了较好的诱导效果。本研究以氨磺灵为诱变剂,采用混培法对来自3个不同地点的滇杨材料进行多倍体诱导,探讨氨磺灵对滇杨的多倍化诱导效果,继而对诱导后的材料进行同质化... 详细信息

氨磺灵是一种三硝基苯胺类除草剂,在应用于植物多倍体的诱导中,取到了较好的诱导效果。本研究以氨磺灵为诱变剂,采用混培法对来自3个不同地点的滇杨材料进行多倍体诱导,探讨氨磺灵对滇杨的多倍化诱导效果,继而对诱导后的材料进行同质化处理,鉴定其倍性。结果显示:氨磺灵可诱导滇杨产生多倍体材料,变异率最高的处理组合为预培养4 d后,在添加50 mg/L氨磺灵的分化培养基(1/2 MS+TDZ 0.01mg/L+NAA 0.01mg/L)中培养2 d,变异率可达28.57%。多倍体植株与正常株形态差异明显,且染色体数目增加为76条,多倍体滇杨的荧光通道值约为二倍体滇杨的2倍,表明滇杨材料已加倍为四倍体。研究结果对滇杨乃至木本植物的多倍体育种具有重要的理论及实践意义。

关键词：滇杨氨磺灵多倍体诱导倍性鉴定

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氨磺灵离体诱导半枝莲多倍体的研究

氨磺灵离体诱导半枝莲多倍体的研究

作者：岳敏南京师范大学

学位级别：硕士

半枝莲(Scutellaria barbata ***)为唇形科黄芩属植物,是多年生草本药用植物,全草入药,具有解热、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒和抗氧化等药用价值。本研究首先以半枝莲组培苗为材料,应用氨磺灵(oryzalin)进行多倍体的诱导;然后,对获得... 详细信息

半枝莲(Scutellaria barbata ***)为唇形科黄芩属植物,是多年生草本药用植物,全草入药,具有解热、抗肿瘤、抗炎、抗菌、抗病毒和抗氧化等药用价值。本研究首先以半枝莲组培苗为材料,应用氨磺灵(oryzalin)进行多倍体的诱导;然后,对获得的多倍体植株进行形态学、细胞学、分子生物学等方面的鉴定;最后,对获得的多倍体植株进行药用成分总黄酮含量的测定和抗性生理指标研究,以期培育出药用价值高的半枝莲新种质。首先,以半枝莲带腋芽的茎段和茎尖为外植体,应用对人和环境危害较小的氨磺灵为诱导剂,采用漂荡处理的方法研究不同浓度和处理时间对半枝莲多倍体离体诱导影响。结果表明,氨磺灵诱导带腋芽茎段的最适处理组合为：10μmol·L-1氨磺灵处理12h;而氨磺灵诱导茎尖的最适处理组合为5μmol·L-1氨磺灵处理48h。应用带腋芽的茎段为外植体处理诱导变异效果比茎尖处理效果显著。再次,对多倍体和对照植株的外部形态、气孔、保卫细胞、保卫细胞叶绿体数、气孔密度、染色体数目、核DNA含量等方面进行比较。结果表明：多倍体植株株型紧凑,叶片宽大,叶色深绿,节间变短,茎杆粗壮,叶形指数变小。与对照植株相比,多倍体植株气孔长和宽、保卫细胞长和宽明显增大,叶绿体数明显增多,气孔密度明显减小。经外部形态及气孔观察鉴定的多倍体,采用压片法对根尖进行染色体数鉴定发现,经氨磺灵处理后的多倍体植株存有四倍体染色体数为2n=4x=52;而对照为正常的二倍体2n=2x=26。流式细胞仪鉴定多倍体半枝莲在相对荧光强度160和相对荧光强度约320出现一个单峰而二倍体仅在相对荧光强度160出现一个单峰。说明经过氨磺灵诱导处理半枝莲其中存有四倍体。最后将加倍后的组培苗进行移栽,测定半枝莲总黄酮含量并测定抗性生理常用指标超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、丙二醛(Malondialdehyde, MDA)及可溶性糖的含量。结果表明,3个株系的多倍体植株总黄酮的含量均显著高于对照二倍体植株,1号株系、3号株系、4号株系总黄酮含量依次增加34.16%、37.13%、40%。3个株系多倍体半枝莲SOD、CAT活性与对照二倍体植株有显著性差异,其中多倍体株系3提高最多,SOD活性较二倍体半枝莲高出44.7%,CAT活性较二倍体半枝莲高出16.8%。3个株系多倍体半枝莲MDA较二倍体植株显著降低,其中株系3降低最多,MDA较二倍体株系低47.6%。3个株系多倍体半枝莲可溶性糖较对照降低,其中株系3可溶性糖低29.5%,株系1与对照无显著性差异。

关键词：半枝莲多倍体氨磺灵诱导鉴定

利用氨磺灵（Oryzalin）进行萝卜四倍体种质创新研究

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利用氨磺灵（Oryzalin）进行萝卜四倍体种质创新研究

作者：姜二花南京农业大学

学位级别：硕士

萝卜(Raphanus sativus L.),十字花科萝卜属一、二年生草本植物,染色体数2n=2x=18,是一种原产中国的重要蔬菜作物。多倍体育种能够提高作物产量,改善品质和抗性,作为中间桥梁促进植物遗传进化。新型微管抑制剂氨磺灵(Oryzalin)作为秋水... 详细信息

萝卜(Raphanus sativus L.),十字花科萝卜属一、二年生草本植物,染色体数2n=2x=18,是一种原产中国的重要蔬菜作物。多倍体育种能够提高作物产量,改善品质和抗性,作为中间桥梁促进植物遗传进化。新型微管抑制剂氨磺灵(Oryzalin)作为秋水仙素的替代品也可以抑制有丝分裂后期纺锤丝的形成,从而实现细胞内染色体加倍,同时还可以弥补秋水仙素诱导存在的弊端。对于Oryzalin诱导萝卜染色体加倍的效果、四倍体萝卜育性降低的机理以及不同倍性萝卜基因表达的研究还未见报道。本研究以二倍体萝卜’Nau-DY’和’Nau-ZQH’为试材,利用生长点滴定法和浸种法,对Oryzalin和秋水仙素诱导萝卜染色体加倍的效果进行比较;利用多倍体普遍存在的早期形态和细胞学特征对诱变植株进行初步筛选,染色体计数法最终确定植株倍性,为萝卜四倍体的高效诱导和倍性鉴定提供理论依据;采用常规制片法对四倍体植株花粉母细胞减数分裂的异常现象进行观察;通过mRNA差异显示技术,进行不同倍性萝卜差异表达基因的分离鉴定,以期为解析多倍化的分子遗传机制提供理论依据。研究结果如下：以’Nau-DY’和’Nau-ZQH’两种不同基因型的萝卜为材料于两叶一心时进行滴定处理。以清水和0.1%秋水仙素处理分别为对照,同时对以上两个不同基因型的萝卜品种于早9点和晚4点各滴定1次连续3天,研究不同浓度Oryzalin (0.01,0.02,0.04,0.06mM)诱导萝卜染色体加倍的效果。结果表明,在处理的2个萝卜品种中均得到了同源四倍体,并以0.04mM的浓度处理得到的加倍效果最好：诱变率分别为30%(Nau-DY)和26.67%(Nau-ZQH),高于秋水仙素诱变效果16.67%和23.33%。经过不同浓度诱导剂浸泡,有些根尖表现加粗且根毛增多的现象,但是移栽到基质中却不能成活。本实验以染色体计数法最终确定植株的倍性,发现四倍体中染色体数目为二倍体的2倍。以诱导加倍的同源四倍体及其对应的二倍体萝卜为材料,观察花粉母细胞减数分裂过程,用荧光染色法对它们的花粉原位萌发和花粉管伸长过程进行研究。结果表明：四倍体花粉粒整齐度差,并出现干瘪花粉粒且萌发率低;花粉管伸长较慢且不整齐;花粉母细胞在减数分裂各个时期均出现不同程度的染色体异常行为。这些因素均从不同程度上影响四倍体萝卜的育性。在二倍体和同源多倍体植物中,某些基因表达时可能表现出等位基因的剂量效应,包括一些与植物生长发育和抗性相关的调节基因。本实验采用mRNA差异显示(DDRT-PCR)技术,分离萝卜二倍体’Nau-ZQH’及其同源四倍体差异表达的基因。共分离到24条差异片段,其中19条与已知或推定功能基因高度同源,其中有17条片段在四倍体中表达上调,结果表明多倍化发生的同时诱导一系列基因快速响应表达,如转录因子、表达调控子、胁迫响应和以及参与细胞代谢、脂类代谢、光合作用的基因。

关键词：萝卜氨磺灵倍性鉴定花粉母细胞 mRNA差异显示

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氨磺灵诱导人参果“圆果”多倍体初探

湖南农业科学 2023年第6期 1-6页

作者：李奔杨润伍全会李枝林黄兴龙王玉英云南农业大学园林园艺学院云南昆明650201 石林县经济作物站云南石林652200 云南省农业广播电视学校富源县分校云南曲靖655500

为探寻高效的人参果多倍体诱导条件,以“圆果”为供试品种,以0.02%的氨磺灵溶液为诱变剂,考察不同处理时间(3、6、9、12 h)对人参果组培苗死亡率和变异情况的影响,以变异植株的形态指标、叶片气孔状态和染色体倍性为指标确定最佳处理时... 详细信息

为探寻高效的人参果多倍体诱导条件,以“圆果”为供试品种,以0.02%的氨磺灵溶液为诱变剂,考察不同处理时间(3、6、9、12 h)对人参果组培苗死亡率和变异情况的影响,以变异植株的形态指标、叶片气孔状态和染色体倍性为指标确定最佳处理时间。结果表明:当氨磺灵浓度为0.02%时,随着处理时间的延长,人参果组培苗的死亡率逐渐增加,而变异率逐渐降低;以处理3 h的组培苗死亡率最低,为20%,变异率最高,为58.33%;经计算,0.02%的氨磺灵溶液对人参果“圆果”组培苗的半致死时间为19.40 h;在试验设置的处理时间(3~12 h)内,获得的变异植株呈现出植株矮小、茎段增粗、节间缩短、叶片大且增厚、颜色较深、根增粗、出现变形叶、气孔较二倍体大、单位面积上气孔数量变少等特征;经流式细胞仪分析初步判定变异植株为多倍体。综合结果表明,在0.02%氨磺灵溶液中浸泡3 h,诱导人参果“圆果”组培苗产生多倍体新种质的效果最好。

关键词：人参果氨磺灵诱变变异率半致死时间

氨磺灵和秋水仙素诱导橡胶草四倍体效果的比较研究

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中国农学通报 2021年第20期37卷 35-41页

作者：杨玉双覃碧张继川张立群聂秋海刘实忠中国热带农业科学院橡胶研究所海口571101 北京化工大学材料科学与工程学院北京100029 北京玲珑蒲公英科技发展有限公司北京101102

为探讨不同诱变剂对橡胶草四倍体的诱导效果,以橡胶草幼芽为材料,采用浸芽法,比较分析氨磺灵和秋水仙素2种诱变剂不同浓度和处理时间对橡胶草多倍体的诱导效果及多倍体橡胶草的形态特征变化。结果表明:氨磺灵处理橡胶草的成苗率(60%~75%... 详细信息

为探讨不同诱变剂对橡胶草四倍体的诱导效果,以橡胶草幼芽为材料,采用浸芽法,比较分析氨磺灵和秋水仙素2种诱变剂不同浓度和处理时间对橡胶草多倍体的诱导效果及多倍体橡胶草的形态特征变化。结果表明:氨磺灵处理橡胶草的成苗率(60%~75%)和最高诱变率(14.08%)均高于秋水仙素处理(0~59%和5.56%),其嵌合体率(27.27%)低于秋水仙素处理(75.00%),其中0.04 mmol/L氨磺灵处理30 min,成苗率为71.00%,变异率14.08%,为最佳诱变条件。可见,氨磺灵比秋水仙素更适合用于橡胶草多倍体诱导。诱导后获得的四倍体橡胶草叶片厚度、气孔大小、花和种子大小均显著大于野生型二倍体植株,气孔密度则显著低于野生型植株,这些形态特征可辅助多倍体橡胶草快速筛选和鉴定。本研究初步探明了2种诱变剂对橡胶草染色体加倍的诱导效果,为今后橡胶草多倍体育种提供理论依据和技术支持。

关键词：橡胶草氨磺灵秋水仙素四倍体多倍体诱导

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秋石斛同源四倍体诱导与鉴定

园艺学报 2009年第8期36卷 1239-1242页

作者：李秀兰安东南开大学生命科学学院天津300071

为了创制秋石斛同源四倍体新种质,以秋石斛同株异花授粉种子为材料,用组织培养方法,通过种子非共生萌发与原球茎诱导,在原球茎发育的原胚期,以低浓度混合诱变剂进行多倍体诱导。结果用0.01%秋水仙素+5mg.L-1氨磺灵处理8～10d,四倍体(2n=... 详细信息

为了创制秋石斛同源四倍体新种质,以秋石斛同株异花授粉种子为材料,用组织培养方法,通过种子非共生萌发与原球茎诱导,在原球茎发育的原胚期,以低浓度混合诱变剂进行多倍体诱导。结果用0.01%秋水仙素+5mg.L-1氨磺灵处理8～10d,四倍体(2n=4X=76)诱变率达90%以上,未发现嵌合体。与二倍体对照比较,四倍体植株粗壮,叶色深绿,叶片宽厚。

关键词：秋石斛同源四倍体种子原球茎原胚期氨磺灵

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落叶松体细胞胚胎发生诱导多倍体的研究

生物技术通报 2009年第9期25卷 78-82页

作者：张清国韩素英梁国鲁齐力旺西南大学园艺园林学院重庆400716 中国林科院林业研究所细胞生物学实验室北京100091

通过检测细胞系增值率及细胞分裂指数确定细胞系分裂最旺盛时期,利用秋水仙素和氨磺灵诱导落叶松多倍体体细胞胚胎的发生,揭示了两种抗微管物质对落叶松体细胞胚胎发生的影响。秋水仙素在浓度为500 mg·L^-1,浸泡处理36 h时能使多倍体... 详细信息

通过检测细胞系增值率及细胞分裂指数确定细胞系分裂最旺盛时期,利用秋水仙素和氨磺灵诱导落叶松多倍体体细胞胚胎的发生,揭示了两种抗微管物质对落叶松体细胞胚胎发生的影响。秋水仙素在浓度为500 mg·L^-1,浸泡处理36 h时能使多倍体体细胞胚胎发生的比例达到85.2%,体细胞胚发生率达到351.1个/g;氨磺灵在1-5 mg·L^-1的浓度下处理后的细胞系几乎失去体细胞胚分化能力,无法大量获得多倍体体细胞胚。通过细胞压片及去壁-低渗涂片对比观察发现氨磺灵诱导后的细胞系除了染色体数目加倍外还有部分细胞发生程序性死亡。该研究初步证明了秋水仙素较适合落叶松多倍体体细胞胚的诱导,氨磺灵对落叶松毒害明显,不适合其多倍体的诱导。

关键词：秋水仙素落叶松氨磺灵多倍体体细胞胚胎发生

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除草剂对新疆紫草无菌苗生长及变异的影响

新疆农业大学学报 2015年第4期38卷 277-281页

作者：魏欢班娜王芳王明明李驰新疆农业大学农学院乌鲁木齐830052

采用两种除草剂进行浸泡处理,考察了处理方法、浓度、时间及温度对新疆紫草幼苗及无菌苗的影响。氨磺灵点涂适宜浓度为5.0mg/L,其成活率和变异率分别为47.0%和60.0%;氨磺灵浓度为1.0mg/L、浸泡12h、处理温度为20℃时,无菌苗成活率、茎... 详细信息

采用两种除草剂进行浸泡处理,考察了处理方法、浓度、时间及温度对新疆紫草幼苗及无菌苗的影响。氨磺灵点涂适宜浓度为5.0mg/L,其成活率和变异率分别为47.0%和60.0%;氨磺灵浓度为1.0mg/L、浸泡12h、处理温度为20℃时,无菌苗成活率、茎尖萌发率及变异率均最高;变异株的保卫细胞长度、宽度、气孔长度分别较对照增加幅度最大分别达32.74%,19.85%,90.92%,变异株的气孔密度较对照减少幅度最大达73.94%。氟乐灵处理的气孔密度较氨磺灵大。除草剂对新疆紫草无菌苗具有明显抑制作用,采用除草剂诱变可以获得大量变异株。

关键词：新疆紫草氨磺灵氟乐灵无菌苗