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天山堇菜提取物基于NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制

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中国药理学通报 2024年第5期40卷 929-936页

作者：史玉柱刘燕徐磊王雪新疆维吾尔自治区药物研究所新疆乌鲁木齐830011

目的探究天山堇菜提取物(Viola tianshanica Maxim extract,VTME)改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法BALB/c雌性小鼠,随机分为正常对照组、卵清白蛋白(OVA)模型组、VTME低、中、高剂量(80、160、320 mg·kg^(-1))组、阳性对照药地... 详细信息

目的探究天山堇菜提取物(Viola tianshanica Maxim extract,VTME)改善哮喘小鼠气道炎症的作用及机制。方法BALB/c雌性小鼠,随机分为正常对照组、卵清白蛋白(OVA)模型组、VTME低、中、高剂量(80、160、320 mg·kg^(-1))组、阳性对照药地塞米松组(Dex,80 mg·kg^(-1))组。采用OVA致敏、激发的方法诱导哮喘模型。收集小鼠肺泡灌洗液(BALF)并对炎症细胞进行分类计数;采用ELISA法检测BALF中调节活化的正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)、IFN-γ及TNF-α含量,肺组织中TNF-α、MCP-1、IFN-γ、IL-17含量以及血清中IgE、嗜酸性粒细胞趋化因子(eotaxin)水平;采用HE染色观察肺组织病理改变;采用qRT-PCR法和Western blot法分别检测肺组织NLRP3 mRNA表达水平及GSDMD、caspase-1、IL-1β、NLRP3蛋白表达水平。结果VTME能明显降低哮喘小鼠BALF中各类炎症细胞数量及TNF-α、IFN-γ、Rantes的含量,降低肺组织MCP-1、IFN-γ、IL-17的含量以及血清Eotaxin水平;改善哮喘小鼠肺组织病理状态;降低肺组织NLRP3 mRNA水平以及caspase-1、GSDMD、IL-1β和NLRP3蛋白表达水平。结论VTME可能通过抑制NLRP3/caspase-1/IL-1β信号通路对OVA诱导的哮喘小鼠模型发挥保护作用。

关键词：天山堇菜提取物卵清白蛋白哮喘小鼠气道炎症 NLRP3炎症小体作用机制

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桔梗元参汤对过敏性哮喘小鼠气道炎症和黏液分泌的影响及其机制

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吉林大学学报（医学版） 2024年第1期50卷 10-17页

作者：唐红梅李月蛟王星王志彬袁谢芳王孝芸西南医科大学附属医院炎症与变态反应实验室四川泸州646000

目的:探讨桔梗元参汤(JGYST)对过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌的影响,并阐明其相关作用机制。方法:40只雄性C57BL/J小鼠随机分为对照组、 JGYST组、卵清蛋白(OVA)组及OVA+JGYST组。OVA组和OVA+JGYST组小鼠用50μg OVA腹腔注射致... 详细信息

目的:探讨桔梗元参汤(JGYST)对过敏性哮喘小鼠气道组织炎症和黏液分泌的影响,并阐明其相关作用机制。方法:40只雄性C57BL/J小鼠随机分为对照组、 JGYST组、卵清蛋白(OVA)组及OVA+JGYST组。OVA组和OVA+JGYST组小鼠用50μg OVA腹腔注射致敏,每周2次,致敏后连续7 d用OVA 20μg滴鼻激发哮喘;OVA+JGYST组小鼠每次OVA激发前1 h用JGYST 200μL灌胃,共灌胃7次;对照组用相同剂量的PBS缓冲液腹腔注射、滴鼻和灌胃;JGYST组小鼠用相同剂量PBS缓冲液腹腔注射和滴鼻,用相同剂量JGYST灌胃。采用HE染色和过碘酸-雪夫(PAS)染色观察各组小鼠肺组织病理形态表现并计算炎症评分和PAS评分,流式细胞术检测各组小鼠肺组织中嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、辅助性T淋巴细胞1 (Th1)、辅助性T淋巴细胞2 (Th2)和树突状细胞(DCs)数及成熟DCs百分率和活性氧(ROS)水平,实时荧光定量PCR (RT-qPCR)法检测各组小鼠肺组织中白细胞介素4 (IL-4)、白细胞介素10 (IL-10)和肿瘤坏死因子α (TNF-α)mRNA表达水平。结果:HE染色和PAS染色,对照组小鼠气道和肺泡结构完整、无炎症细胞浸润,无黏液分泌;与对照组比较,OVA组小鼠气道组织周围有大量炎症细胞浸润,炎症评分和PAS评分明显升高(P气道组织炎症细胞浸润减少,炎症评分和PAS评分明显降低(P气道组织炎症和黏液分泌,其作用机制可能与其减少Th2细胞和DCs数量,降低ROS水平和促炎细胞因子表达水平同时升高抗炎细胞因子表达水平有关。

关键词：桔梗元参汤哮喘气道炎症活性氧细胞因子

青蒿素基于PI3K/Akt信号通路减轻卵清蛋白哮喘大鼠的气道炎症和气道重塑的分析

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中国实验方剂学杂志 2023年第13期 114-119页

作者：王艳梅梁彦昌甘德堃赵润杨河南省中医院/河南中医药大学第二附属医院

目的：探究青蒿素通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路减轻哮喘气道炎症和气道重塑的分子作用机制。方法：50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、OVA模型组、青蒿素低剂量组、青蒿素中剂量组、青蒿素高剂量组，每组各10只... 详细信息

目的：探究青蒿素通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路减轻哮喘气道炎症和气道重塑的分子作用机制。方法：50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、OVA模型组、青蒿素低剂量组、青蒿素中剂量组、青蒿素高剂量组，每组各10只。OVA模型组、青蒿素低剂量组、青蒿素中剂量组、青蒿素高剂量组建立卵清蛋白(OVA)诱导大鼠哮喘模型，造模成功后，空白对照组、OVA组、青蒿素低剂量组、青蒿素中剂量组、青蒿素高剂量组每天给予尾静脉注射1.0 mL·kg-1生理盐水、1.0 mL·kg-1生理盐水、12.5 mg·kg-1青蒿素、25 mg·kg-1青蒿素、50 mg·kg-1青蒿素，持续7 d。采用氯化乙酰胆碱法测定气道阻力；流式细胞术测定各组肺泡灌洗液中细胞数量、种类变化；苏木素-伊红(HE)染色法测定气道内皮组织形态变化；CytoTox 96法测定细胞凋亡情况；酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体、白细胞介素(IL)-1β和IL-10含量表达；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组肺泡支气管组织p-PI3K/p-Akt磷酸化水平。结果：与空白对照组比较，模型组细胞总数、巨噬细胞总数、嗜酸性粒细胞总数、淋巴细胞总数、中性粒细胞总数明显提高(P气道黏膜水肿明显，炎症细胞大量浸润(P气道黏膜水肿程度减轻，炎症细胞浸润面积大幅减少(P炎症小体激活并减少细胞焦亡，降低炎性细胞表达，可减轻哮喘大鼠的气道炎症表现及气道重塑，可能与PI3K/AKT 磷酸化调控有关，可为青蒿素治疗支气管哮喘提供实验室见解及依据。

关键词：青蒿素哮喘气道炎症气道重塑磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路

miR-155/COX-2/PGE2信号通路在薯蓣皂苷改善哮喘小鼠气道炎症中的作用

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中国呼吸与危重监护杂志 2022年第11期21卷 790-796页

作者：梁敏边俊梅熊诗思李弯江震武汉大学附属同仁医院(武汉市第三医院)儿科湖北武汉430074 武汉市第九医院湖北武汉430074

目的探究薯蓣皂苷(dioscin,Dio)对哮喘小鼠气道炎症的作用及microRNA-155(miR-155)/环氧合酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)/前列腺素E2(prostaglandin E2,PGE2)通路在其中的变化。方法 70只小鼠随机分为对照(control)组、模型组、抑制剂(inhibitor)阴性对照组(inhibitor-NC组)、miR-155 inhibitor组、Dio组、Dio+miR-155模拟物(mimic)阴性对照组(Dio+mimic-NC组)、Dio+miR-155 mimic组,每组10只。采用屋尘螨诱导制备哮喘小鼠模型;酶联免疫吸附试验检测小鼠支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中PGE2、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)、半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotriene 1,CysLTs)、半胱氨酰白三烯受体1(cysteinyl leukotriene receptor 1,CysLTR1)和白细胞介素(interleukin,IL)-4、IL-5、IL-13水平;苏木精–伊红和高碘酸希夫染色观察气道周围炎症细胞的浸润情况及杯状细胞分泌黏液的情况;实时荧光定量聚合酶链反应检测小鼠肺组织miR-155、COX-2 mRNA的表达水平;蛋白印迹法检测小鼠肺组织COX-2蛋白表达。结果 miR-155 inhibitor和Dio能降低哮喘小鼠BALF中PGE2、TNF-α、Cys LTs、Cys LTR1和IL-4、IL-5、IL-13水平,减轻肺组织炎症细胞浸润和杯状细胞黏液分泌情况,并降低肺组织miR-155、COX-2的mRNA和蛋白表达;而miR-155 mimic能明显削弱Dio的抗哮喘作用。结论 Dio的抗哮喘作用可能与抑制miR-155/COX-2/PGE2途径,进而减轻哮喘小鼠气道炎症有关。

关键词：薯蓣皂苷哮喘气道炎症 microRNA-155 环氧合酶2/前列腺素E2

SDF-1表达升高促进骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移减轻哮喘大鼠气道炎症

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第3期39卷 213-219页

作者：朱慧志王坤朱舜之王大伟刘向国安徽中医药大学第一附属医院呼吸科安徽合肥230031 安徽中医药大学研究生院安徽合肥230012 安徽中医药大学中西医结合学院安徽合肥230012

目的观察基质细胞衍生因子1(SDF-1)与骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移及哮喘大鼠气道炎症的相关性。方法取24只清洁级SD大鼠,随机均分为正常对照组、模型组、BMSC组;除对照组外,其余两组予卵清蛋白致敏激发制备哮喘模型,BMSC组于造模完成... 详细信息

目的观察基质细胞衍生因子1(SDF-1)与骨髓间充质干细胞(BMSC)迁移及哮喘大鼠气道炎症的相关性。方法取24只清洁级SD大鼠,随机均分为正常对照组、模型组、BMSC组;除对照组外,其余两组予卵清蛋白致敏激发制备哮喘模型,BMSC组于造模完成当天由尾静脉注射1 mL 106个BMSC。采用HE染色观察肺组织病理形态变化;Wright-Giemsa染色,光镜下计数支气管肺泡灌洗液(BALF)中各种炎细胞数量;ELISA检测BALF中白细胞介素4(IL-4)、IL-5、IL-13、IgE、IgG1、IgG2a含量;反转录PCR检测肺组织中SDF-1、信号转导子与转录激活子6(STAT6)的mRNA表达;免疫荧光细胞化学染色检测支气管上皮细胞中SDF-1的蛋白表达;Western blot法检测肺组织SDF-1、STAT6蛋白水平。结果与对照组相比,模型组BALF中炎细胞计数及IL-4、IL-5、IL-13、IgE、IgG1、IgG2a含量显著升高;肺组织SDF-1、STAT6 mRNA和蛋白表达量显著升高;支气管上皮细胞SDF-1表达明显升高。与模型组相比,BMSC组BALF中炎细胞数目及炎性细胞因子含量均减少;肺组织STAT6 mRNA和蛋白表达降低,SDF-1基因表达量有所升高;支气管上皮细胞SDF-1蛋白表达增加。结论哮喘炎症过程中,受损部位的趋化因子SDF-1的表达升高,并促进BMSC向哮喘大鼠肺组织迁移。BMSC通过归巢至受损肺组织发挥调节Th1细胞/Th2细胞免疫失衡的作用,从而抑制哮喘气道炎症。

关键词：哮喘骨髓间充质干细胞(BMSC) 基质细胞衍生因子1(SDF-1) 气道炎症

基于IL-25/NF-κB信号通路探讨益气温阳护卫汤对支气管哮喘大鼠气道炎症的改善作用

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中成药 2024年第2期46卷 431-436页

作者：夏阿信向双娣苏小璞黄帅亮余建玮江西中医药大学江西南昌330004 江西中医药大学附属医院江西南昌330006

目的基于IL-25/NF-κB信号通路探讨益气温阳护卫汤对支气管哮喘大鼠气道炎症的作用机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组(0.2 mg/mL)和益气温阳护卫汤低、中、高剂量组(1、2、4 g/mL),每组10只,采用卵清蛋白(OVA)... 详细信息

目的基于IL-25/NF-κB信号通路探讨益气温阳护卫汤对支气管哮喘大鼠气道炎症的作用机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组(0.2 mg/mL)和益气温阳护卫汤低、中、高剂量组(1、2、4 g/mL),每组10只,采用卵清蛋白(OVA)和氢氧化铝配制的混悬液进行腹腔注射,建立哮喘模型,造模后连续灌胃给药2周。每天观察各组大鼠饮食、精神状态、毛发、呼吸等情况,全自动血液分析仪对大鼠肺泡灌洗液(BALF)进行炎症细胞分类计数,HE染色观察肺组织病理变化,免疫组化(IHC)法检测肺组织IL-25蛋白表达,ELISA法检测BALF中IL-4、IL-5、IL-13水平,RT-qPCR检测肺组织IL-25、TRAF6 mRNA表达,Western blot法检测肺组织IL-25、TRAF6、IκBα、p-IκBα、NF-κB p65及p-NF-κB p65蛋白表达。结果与对照组比较,模型组大鼠肺组织严重受损,大量炎性细胞浸润;BALF中各类炎症细胞数量、IL-4、IL-5、IL-13水平升高(P气温阳护卫汤各剂量均可改善肺组织炎性细胞浸润情况,降低BALF中各类炎性细胞数量、IL-4、IL-5、IL-13水平(P气温阳护卫汤可以抑制支气管哮喘大鼠气道炎症,其作用可能与抑制IL-25/NF-κB信号通路活化,减少炎症因子表达有关。

关键词：益气温阳护卫汤支气管哮喘 IL-25 NF-κB 气道炎症 Th2细胞因子

针刺与艾灸对哮喘大鼠肺功能及气道炎症的影响

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中国中西医结合杂志 2023年第4期43卷 469-475页

作者：周竞颖来奕恬任玲邱冉冉来要水张国山刘密湖南中医药大学针灸推拿与康复学院长沙410208 湖南中医药大学第一附属医院妇产科长沙410007 首都医科大学电力教学医院中医科北京100073

目的观察针刺与艾灸改善哮喘大鼠肺功能及气道炎症的作用,并比较疗效差异。方法将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组和艾灸组,每组12只。采用卵清白蛋白致敏和雾化激发制备哮喘大鼠模型。造模成功后,针刺组和艾灸组大鼠分别给... 详细信息

目的观察针刺与艾灸改善哮喘大鼠肺功能及气道炎症的作用,并比较疗效差异。方法将48只SD大鼠随机分为正常组、模型组、针刺组和艾灸组,每组12只。采用卵清白蛋白致敏和雾化激发制备哮喘大鼠模型。造模成功后,针刺组和艾灸组大鼠分别给予双侧“肺俞”穴针刺与艾灸干预30 min,每天1次,连续14天。干预结束后,使用肺功能测定仪测定大鼠肺功能[最大呼气流量(PEF)、肺阻力(RL)、动态肺顺应性(Cdyn)、呼出25%肺活量时最大呼气流量(FEF 25%)、用力呼气量占用力肺活量比(FEV/FVC)、最大呼气中期流量(MMEF)];分别经HE和Masson染色后,光镜下观察大鼠肺组织的病理形态学变化及胶原沉积程度;运用酶联免疫吸附法检测各组大鼠肺组织中半胱氨酸白三烯(LT)、白介素(IL)-17、IL-4、IL-13、IL-33、IL-5、胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)、前列腺素D2(PGD2)表达。结果与正常组比较,模型组PEF、Cdyn、FEF 25%、FEV/FVC、MMEF下降,RL、胶原纤维沉积、肺组织中LT、IL-17、IL-4、IL-13、TSLP、IL-33、PGD2、IL-5表达增加(P气道炎症;且两者在改善肺功能和气道炎症的相关指标上存在一定差异性。

关键词：哮喘针刺艾灸肺功能气道炎症中医

五虎汤加味对RSV感染哮喘小鼠气道炎症及肺组织Muc5AC、STAT3、NF-κB、NLRP3蛋白表达的影响

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中国实验方剂学杂志 2023年第19期29卷 108-115页

作者：于琳琳王婧邹亚程伟伟景晓平上海中医药大学上海201203 上海市儿童医院上海交通大学医学院附属儿童医院上海200062 上海中医药大学附属普陀医院上海200062

目的:探讨五虎汤加味对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘小鼠气道炎症及黏蛋白(Muc)5AC、转录激活因子3(STAT3)、核转录因子-κB(NF-κB)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达的影响。方法:70只雄性6~8周龄BALB/c小鼠,每组10只,随机分为正常组... 详细信息

目的:探讨五虎汤加味对呼吸道合胞病毒(RSV)感染哮喘小鼠气道炎症及黏蛋白(Muc)5AC、转录激活因子3(STAT3)、核转录因子-κB(NF-κB)、NOD样受体蛋白3(NLRP3)蛋白表达的影响。方法:70只雄性6~8周龄BALB/c小鼠,每组10只,随机分为正常组、哮喘组(卵清蛋白,OVA)、RSV感染哮喘组(OVA+RSV)、五虎汤加味组(高、中、低剂量分别为4.08、2.04、1.02 g·kg^(-1)·d^(-1))、地塞米松组(0.1 g·kg^(-1)·d^(-1))。OVA致敏及雾化激发哮喘模型,经RSV滴鼻连续3次感染(1.0×10^(6) PFU·mL^(-1),50μL),构建RSV感染哮喘模型;五虎汤加味组予五虎汤加味灌胃;地塞米松组给予地塞米松注射液腹腔注射;正常组予等量生理盐水灌胃。末次激发24 h,在2.5%戊巴比妥钠麻醉下,留取肺组织进行苏木素-伊红(HE)、苦味酸-酸性品红(VG)染色观察气道炎症反应,免疫组织化学检测Muc5AC蛋白表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷酸化(p)-STAT3、STAT3、p-NF-κB、NF-κB、NLRP3蛋白表达情况。结果:与正常组比较,OVA组小鼠气道炎性细胞浸润,组织充血水肿,胶原纤维沉积;OVA+RSV组小鼠气道炎性细胞浸润,组织充血水肿较OVA组更显著;与OVA+RSV组比较,五虎汤加味组能显著改善气道周围炎性细胞浸润,组织充血水肿,胶原纤维沉积明显减轻,其中高剂量组作用更加明显。免疫组化结果显示,与正常组比较,OVA组和OVA+RSV组Muc5AC蛋白表达水平均显著升高(P气道炎症,降低Muc5AC、p-STAT3、p-NF-κB、NLRP3蛋白的表达,提示五虎汤加味减轻RSV感染哮喘气道炎症可能与调控STAT3/NF-κB信号通路抑制NLRP3蛋白表达相关。

关键词：五虎汤加味呼吸道合胞病毒(RSV) 哮喘气道炎症 NOD样受体蛋白3(NLRP3)

葛根素抑制支气管哮喘小鼠气道炎症和TSLP介导的Th2免疫作用的研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2022年第10期42卷 1371-1375,1408页

作者：王文璐何权周林福南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院发热门诊江苏南京210093 南京医科大学第一附属医院呼吸与危重症医学科江苏南京210029

目的:研究葛根素对慢性哮喘小鼠模型气道炎症和Th2免疫的影响及其机制。方法:将BALB/c小鼠32只随机均分为正常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组,每组8只。除正常组外,其余各组采用卵白蛋白(ovabumin,OVA)致敏和激发,连续12周,建立慢性... 详细信息

目的:研究葛根素对慢性哮喘小鼠模型气道炎症和Th2免疫的影响及其机制。方法:将BALB/c小鼠32只随机均分为正常组、哮喘组、葛根素组和布地奈德组,每组8只。除正常组外,其余各组采用卵白蛋白(ovabumin,OVA)致敏和激发,连续12周,建立慢性哮喘小鼠模型。末次激发24 h后,使用小鼠肺功能仪进行气道反应性测定,苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织炎性细胞浸润情况,过碘酸雪夫(PAS)染色观察杯状细胞增生情况,用酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测4组小鼠血清总IgE和支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中Th2细胞因子(白介素-4、白介素-13)水平。Western blot观察肺组织胸腺基质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)的蛋白表达。结果:与正常组比较,葛根素组、布地奈德组、哮喘组气道阻力、气道炎症,血清总IgE,BALF中白介素-4、白介素-13以及肺组织TSLP蛋白表达明显增高(P 气道PAS阳性上皮细胞数/支气管较哮喘组下降(P 气道炎症、气道高反应性和Th2免疫,这可能与抑制TSLP的表达有关。

关键词：葛根素哮喘气道炎症 Th2免疫胸腺基质淋巴细胞生成素