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钙池操纵的钙通道在屋尘螨诱导哮喘小鼠气道上皮屏障破坏中的作用

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武汉大学学报（医学版） 2024年第1期45卷 19-24页

作者：钟剑王畅畅戚世权马如雪曹灿胡家倩李永帅高亚东武汉大学中南医院过敏反应科湖北武汉430071 武汉大学基础医学院免疫学系湖北武汉430071

目的:研究钙池操纵的钙内流(SOCE)在哮喘小鼠气道上皮屏障破坏中的作用及可能机制。方法:建立屋尘螨(HDM)致敏的C57BL/6急性过敏性哮喘小鼠模型,分为正常对照组、哮喘模型组和SOCE阻断剂BTP-2干预的哮喘模型组,剔除造模过程中死亡鼠和... 详细信息

目的:研究钙池操纵的钙内流(SOCE)在哮喘小鼠气道上皮屏障破坏中的作用及可能机制。方法:建立屋尘螨(HDM)致敏的C57BL/6急性过敏性哮喘小鼠模型,分为正常对照组、哮喘模型组和SOCE阻断剂BTP-2干预的哮喘模型组,剔除造模过程中死亡鼠和肺泡灌洗失败小鼠,每组10只。肺组织HE染色评估肺组织炎症,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-13和血清中IgE水平。右旋糖酐通透性实验评估屏障通透性,肺免疫荧光及肺组织化学染色评估连接蛋白(ZO-1和occludin)的分布和表达,RT-PCR和Western Blot评估肺组织中连接蛋白的表达。结果:与正常对照组相比,HDM致敏的小鼠气道炎症加重,肺组织ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达水平显著降低,同时右旋糖酐通透性增高(P气道炎症减轻,ZO-1、occludin的mRNA和蛋白表达水平较哮喘组增高,右旋糖酐通透性亦明显下降(P气道上皮屏障的破坏。

关键词：屋尘螨气道上皮屏障钙池操纵的钙通道哮喘气道炎症

通塞颗粒对AECOPD大鼠气道上皮屏障及EGFR/ERK通路的影响

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中国病理生理杂志 2023年第12期39卷 2204-2213页

作者：魏焱鑫魏毓刘新光田燕歌刘学芳赵迪赵鹏河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南省中医药防治呼吸病重点实验室河南郑州450046 河南中医药大学中医药科学院河南郑州450046

目的:探讨通塞颗粒(TSG)对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)大鼠上皮屏障功能损伤的作用及其机制。方法:24只SD大鼠随机分为对照(control)组、模型(model)组、TSG组和莫西沙星(MXF)+沙丁胺醇(STL)组。第1~8周建立COPD大鼠模型,第9周... 详细信息

目的:探讨通塞颗粒(TSG)对慢性阻塞性肺疾病急性加重期(AECOPD)大鼠上皮屏障功能损伤的作用及其机制。方法:24只SD大鼠随机分为对照(control)组、模型(model)组、TSG组和莫西沙星(MXF)+沙丁胺醇(STL)组。第1~8周建立COPD大鼠模型,第9周第3天,经鼻滴入肺炎克雷伯杆菌建立AECOPD大鼠模型。第9周的第1~2天和4~7天,control组和model组给予生理盐水灌胃,TSG组和MXF+STL组分别给予TSG和MXF+STL灌胃,灌胃结束后处死大鼠。检测大鼠呼气峰流速(PEF)的变化;HE染色观察大鼠肺组织病理变化;检测肺组织白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、MMP9、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、上皮钙黏素(E-Cad)和闭合蛋白(OCC)蛋白表达。采用香烟烟雾提取物(CSE)刺激人支气管上皮细胞BEAS-2B,给予TSG不同活性部位干预,检测ZO-1、E-cad、OCC、表皮生长因子受体(EGFR)、磷酸化EGFR(p-EGFR)、细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化ERK(p-ERK)蛋白水平。结果:TSG可显著降低AECOPD大鼠支气管壁厚度、肺泡平均线性截距,以及肺组织IL-1β、IL-6、TNF-α、MMP2和MMP9表达水平,增加平均肺泡数和PEF,上调ZO-1、E-Cad和OCC蛋白表达(P气道上皮屏障功能,缓解AECO-PD,其机制可能与抑制EGFR/ERK信号通路有关。

关键词：通塞颗粒慢性阻塞性肺疾病急性加重期气道上皮屏障 EGFR/ERK信号通路

香烟烟雾诱导慢性阻塞性肺疾病模型小鼠气道上皮屏障损伤的机制

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中国病理生理杂志 2022年第7期38卷 1297-1303页

作者：江宇航梅晓峰贾利丹田燕歌赵鹏河南中医药大学呼吸疾病中医药防治省部共建协同创新中心河南省中医药防治呼吸病重点实验室河南郑州450046 河南中医药大学中医药科学院河南郑州450046

目的:探讨香烟烟雾(CS)诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠气道上皮屏障的损伤及其机制。方法:将72只雄性BALB/c小鼠随机分为对照(control)组和CS组,每组36只。第1~8周CS组采用CS熏吸建立COPD模型,每4周检测肺功能,于第4、8、16周末... 详细信息

目的:探讨香烟烟雾(CS)诱导的慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型小鼠气道上皮屏障的损伤及其机制。方法:将72只雄性BALB/c小鼠随机分为对照(control)组和CS组,每组36只。第1~8周CS组采用CS熏吸建立COPD模型,每4周检测肺功能,于第4、8、16周末取材。观察肺功能指标潮气容量(TV)、呼气峰流速度(PEF)及肺组织平均肺泡数(MAN)和肺泡平均截距(MLI)的变化;检测肺组织中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、闭合蛋白(OCLN)、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、磷酸化表皮生长因子受体(EGFR)和磷酸化P38蛋白水平。另取香烟烟雾提取物(CSE)刺激人支气管上皮细胞BEAS-2B,选取6 h和24 h时点收集细胞蛋白,检测样本中OCLN、ZO-1、磷酸化EGFR及磷酸化P38蛋白水平。结果:与control组比较,CS组小鼠TV和PEF于第8周显著降低(P气道上皮细胞OCLN和ZO-1表达,上调细胞中EGFR与P38磷酸化水平(P气道上皮屏障,其机制可能与激活EGFR/P38信号通路有关。

关键词：慢性阻塞性肺疾病香烟烟雾气道上皮屏障

冷刺激敏感型哮喘患者的临床及气道上皮屏障损伤特征

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冷刺激敏感型哮喘患者的临床及气道上皮屏障损伤特征

作者：吴梦重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:探究冷刺激敏感型哮喘患者的临床特征、气道上皮屏障的受损情况及部分炎性因子的表达水平。方法:收集来自于重庆医科大学附属第二医院呼吸内科门诊及住院部初诊或不正规治疗的哮喘患者共76例,根据患者遇到冷空气刺激后是否会出现... 详细信息

目的:探究冷刺激敏感型哮喘患者的临床特征、气道上皮屏障的受损情况及部分炎性因子的表达水平。方法:收集来自于重庆医科大学附属第二医院呼吸内科门诊及住院部初诊或不正规治疗的哮喘患者共76例,根据患者遇到冷空气刺激后是否会出现咳嗽、喘息、气急、胸闷等呼吸道症状或症状加重分为两组:冷刺激敏感组(38例)和冷刺激不敏感组(38例)。收集两组的人口学资料、哮喘控制问卷(asthma control test,ACT)、血中性粒细胞百分比、血嗜酸性粒细胞百分比、免疫球蛋白E(immunoglobulin E,Ig E)、呼出气一氧化氮(fractional exhaled nitric oxide,Fe NO)、肺功能结果及诱导痰标本。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测诱导痰中的可溶性钙粘蛋白E(Soluble E-cadherin,s E-cadherin)、紧密连接蛋白中的claudin-4及白介素(interleukin)-4、IL-8的表达情况,最后进行统计分析。结果:(1)通过对两组临床资料比较,冷刺激敏感组的血嗜酸性粒细胞百分比、Fe NO均低于冷刺激不敏感组(p0.05);冷刺激敏感组哮喘ACT评分、第一秒用力呼气容积(forced expiratory volume in 1 second,FEV)/用力肺活量(forced vital capacity,FVC)(FEV/FVC)、FEV占预计值百分比(FEV%pred)均明显低于冷刺激不敏感组(p0.05);(3)s E-cadherin与FEV/FVC、FEV%pred呈中度负相关关系(r=-0.3743,p<0.001;r=-0.3682,p<0.01),与诱导痰中IL-8有轻度正相关关系(r=0.2771,p<0.05)。结论:冷刺激敏感型哮喘患者的症状及肺功能受损程度较冷刺激不敏感型哮喘更重,前者的黏附连接受损较后者更重,可能与不同的炎症类型及炎性因子参与相关。

关键词：冷刺激哮喘气道上皮屏障气道炎症

多巴胺D1受体激动剂通过调节巨噬细胞炎症反应和气道上皮细胞屏障功能减轻急性肺损伤

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多巴胺D1受体激动剂通过调节巨噬细胞炎症反应和气道上皮细胞屏障...

作者：孟林林山东中医药大学

学位级别：硕士

目的探讨多巴胺D1样受体激动剂SKF38393(SKF)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)小鼠模型的巨噬细胞炎症反应、氧化应激及气道上皮细胞屏障功能的调节作用及潜在机制。方法体外培养THP-1细胞(诱... 详细信息

目的探讨多巴胺D1样受体激动剂SKF38393(SKF)对脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的急性肺损伤(Acute lung injury,ALI)小鼠模型的巨噬细胞炎症反应、氧化应激及气道上皮细胞屏障功能的调节作用及潜在机制。方法体外培养THP-1细胞(诱导分化为巨噬细胞)和Beas-2B细胞,并用含或不含SKF/ML385的LPS刺激。通过实时定量PCR(q PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞因子(CCL2、IL-6、IL-1β)的表达;共聚焦显微镜及微孔板读数仪检测线粒体活性氧(m ROS)的水平;免疫印迹实验检测相关通路的活化情况;检测Beas-2B细胞单层跨膜电阻(TEER)以反应上皮屏障功能。选用6～8周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为PBS对照组、SKF处理组、LPS造模组、LPS+SKF治疗组及LPS+SKF+ML385抑制剂组。随后收集小鼠肺泡灌洗液(BALF)及肺组织。采用ELISA测定BALF中IL-6、KC、G-CSF和TNF-α的表达水平;组织病理学、免疫组织化学(IHC)和免疫荧光(IF)分析分别检测肺损伤的严重程度、肺内巨噬细胞及气道上皮细胞内D1样多巴胺受体(DRD1、DRD5)的分泌水平和气道上皮细胞中紧密连接蛋白(ZO-1、occludin)的表达情况;免疫印迹实验检测相关炎症通路的活化情况。结果通过使用THP-1细胞衍生的巨噬细胞和Beas-2B细胞,多巴胺D1样受体激动剂SKF有效抑制了LPS激发的促炎细胞因子的表达和线粒体ROS的产生,同时提高了LPS下调的气道上皮细胞(Airway epithelial cell,AEC)单层的TEER和连接蛋白(ZO-1、occludin)的表达。此外,SKF还对多种炎症信号通路具有广泛的抑制作用,包括NF-κB、MAPK和NLRP3/Caspase-1通路。体内实验表明,多巴胺D1样受体D1(DRD1)和D5(DRD5)主要分布在肺巨噬细胞和肺泡上皮细胞中。SKF预处理明显增加了DRD5、抗氧化因子NQO1的表达以及LPS减少的气道上皮细胞中紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达,减少了BALF总细胞、中性粒细胞和淋巴细胞的数量。SKF可以抑制小鼠BALF中总蛋白的渗漏和细胞因子KC、IL-6、G-CSF的产生。此外,SKF可以抑制NF-κB/NLRP3/Caspase-1炎症通路的激活。SKF在体内、体外的保护作用可被Nrf2的抑制剂ML385部分抵消。结论在此,我们发现LPS诱导的ALI肺中巨噬细胞和气道上皮细胞中D1样受体的表达减少,并确定了SKF对这些细胞类型的保护作用,其潜在机制与Nrf2抗氧化系统的激活有关。此外,SKF在减轻ALI小鼠模型的肺部炎症损伤方面也发挥了显著的作用。

关键词：急性肺损伤多巴胺受体 SKF38393 Nrf2 肺巨噬细胞气道上皮屏障

青蒿琥酯对香烟烟雾诱导气道上皮屏障损伤的防护作用及机制

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中国药业 2023年第20期32卷 73-77页

作者：宋韵王斌复旦大学附属华山医院上海200040

目的探讨青蒿琥酯(ART)对气道上皮屏障损伤的防护作用及其机制。方法细胞实验,将人支气管上皮细胞(HBEC)分为对照组(A组,常规培养),香烟烟雾提取物(CSE)组(B组,2.5%CSE处理24 h),ART低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组,1,10,100μmol/L,... 详细信息

目的探讨青蒿琥酯(ART)对气道上皮屏障损伤的防护作用及其机制。方法细胞实验,将人支气管上皮细胞(HBEC)分为对照组(A组,常规培养),香烟烟雾提取物(CSE)组(B组,2.5%CSE处理24 h),ART低、中、高剂量组(C1组、C2组、C3组,1,10,100μmol/L,予2.5%CSE刺激前1 h加入ART共孵育),制备上清液,采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素6(IL-6)水平,采用流式细胞术检测细胞凋亡水平,通过测定跨上皮细胞电阻(TEER)考察上皮屏障完整性,采用免疫印迹法检测细胞间连接蛋白ZO-1、E-cadherin、表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平。动物实验,将25只BALB/c小鼠随机分为对照组(a组,等体积生理盐水),香烟烟雾(CS)组(b组,等体积生理盐水),ART低、中、高剂量组(c_(1)组、c_(2)组、c_(3)组,25,50,100 mg/kg)。使小鼠持续暴露于CS环境(每天2次,每次1 h,持续8周),以建立气道上皮屏障损伤小鼠模型。各组小鼠每日首次CS刺激前1 h腹腔注射相应药物或生理盐水。采用免疫组化染色观察肺组织中细胞连接蛋白ZO-1,E-cadherin和EGFR的表达情况。结果与B组比较,C_(2),C_(3)组细胞TNF-α和IL-6水平显著降低(P气道炎性反应和上皮细胞凋亡,改善气道上皮屏障损伤。其作用机制可能与抑制EGFR表达有关。

关键词：青蒿琥酯香烟烟雾气道上皮屏障表皮生长因子受体小鼠细胞实验动物实验

蛋白酪氨酸激酶6对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响

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中国免疫学杂志 2017年第5期33卷 652-655页

作者：胥青陈灵修周向东重庆医科大学附属第二医院呼吸内科重庆400010

目的:探讨蛋白酪氨酸激酶6(PTK6)对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响及相关机制。方法:体外培养人气道上皮16HBE细胞,予TNF-α刺激,分别转染PTK6 siRNA和recombined PTK6,以转染Scramble siRNA和Empty vector为对照。四甲基偶... 详细信息

目的:探讨蛋白酪氨酸激酶6(PTK6)对TNF-α诱导的人气道上皮屏障功能减损的影响及相关机制。方法:体外培养人气道上皮16HBE细胞,予TNF-α刺激,分别转染PTK6 siRNA和recombined PTK6,以转染Scramble siRNA和Empty vector为对照。四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测细胞活性;跨皮细胞组抗仪检测细胞跨皮细胞阻抗(TER);辣根过氧化物酶(HRP)流量法反应细胞通透性;RT-PCR检测ZO-1、Occludin mRNA水平;Western blot检测PTK6、ZO-1、Occludin、磷酸化细胞外信号调节激酶1/2(p-ERK1/2)、磷酸化c-Jun氨基端激酶1/2(p-JNK1/2)和磷酸化p38(p-p38)蛋白水平。结果:TNF-α刺激后,细胞ZO-1、Occludin转录及蛋白水平、TER值显著降低,细胞通透性增高,同时PTK6、p-ERK1/2、p-JNK1/2和p-p38蛋白水平显著增高(P气道上皮屏障功能减损。

关键词：蛋白酪氨酸激酶6 肿瘤坏死因子-α 气道上皮屏障 c-Jun氨基端激酶1/2 p38MAPK

长链胸腺淋巴细胞生成素对病毒诱发的哮喘气道上皮屏障破坏的影响及机制研究

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长链胸腺淋巴细胞生成素对病毒诱发的哮喘气道上皮屏障破坏的影响...

作者：叶翠萍南方医科大学

学位级别：硕士

背景及目的:哮喘急性发作(Asthma exacerbation)是指由呼吸道病毒等多种诱发因素导致的咳嗽、喘息、胸闷、气促等症状突然发生,或原有症状急剧加重,伴有呼吸困难,以呼气流量降低为特征,通常需要改变治疗药物。哮喘急性发作是导致哮喘疾... 详细信息

背景及目的:哮喘急性发作(Asthma exacerbation)是指由呼吸道病毒等多种诱发因素导致的咳嗽、喘息、胸闷、气促等症状突然发生,或原有症状急剧加重,伴有呼吸困难,以呼气流量降低为特征,通常需要改变治疗药物。哮喘急性发作是导致哮喘疾病风险升高的主要因素,可对机体造成一系列的危害,是哮喘致残和致死的重要原因。气道上皮作为呼吸系统的第一道屏障,其细胞损伤和修复失衡在哮喘发病中扮演了重要角色,特别是在哮喘急性发作时,加速损伤的气道上皮细胞直接影响疾病的转归。关注呼吸道病毒感染在气道上皮屏障功能中的影响,对于阐明哮喘急性发作的发病机制,寻找更加精准的生物治疗具有重要意义。胸腺淋巴细胞生成素(Thymic stromal lymphopoietin,TSLP)在哮喘的预防和治疗中扮演重要角色。研究发现,呼吸道病毒感染哮喘患者原代支气管上皮细胞可诱导TSLP的高表达。由于人气道上皮细胞存在两种不同亚型的的TSLP,即长链TSLP(lfTSLP)和短链TSLP(sfTSLP)发挥着截然不同的生物学作用。我们的课题组前期研究发现,lfTSLP在屋尘螨(HDM)诱导的哮喘细胞模型中高表达,可参与HDM诱导的气道上皮屏障功能破坏,而sfTSLP可以改善HDM与lfTSLP介导的气道上皮屏障功能破坏。然而,lfTSLP在病毒诱发的哮喘气道上皮屏障功能的作用尚不清楚。针对上述问题,本课题拟在体外实验探讨:1.探究病毒感染的哮喘气道上皮细胞的lfTSLP的表达情况?2.探究lfTSLP对病毒诱发的哮喘气道上皮屏障破坏的影响及机制研究。方法:1.使用Western blot、RT-PCR检测poly(I:C)诱导正常人支气管上皮细胞和HDM致敏的人支气管上皮细胞的lfTSLP和sfTSLP的表达变化。2.构建病毒感染哮喘支气管上皮细胞模型,使用Western blot、RT-PCR、ELISA、LDH、细胞免疫荧光检测lfTSLP对polyI:C诱发的哮喘人支气管上皮细胞的RIG-1/NLRP3/caspase1通路的激活情况、焦亡相关蛋白GSDMD的表达和活化水平及炎症因子IL-1β的释放情况。3.构建病毒感染哮喘支气管上皮细胞模型,使用TER、FITC检测lfTSLP对polyI:C诱发的哮喘人支气管上皮细胞屏障功能的影响。结果:1.Poly(I:C)诱导哮喘气道上皮细胞的lfTSLP表达明显增高2.HDM致敏的哮喘气道上皮细胞的抗病毒免疫反应缺陷3.lfTSLP加重poly(I:C)诱导哮喘气道上皮细胞发生细胞焦亡4.Poly(I:C)通过激活RIG-1-NLRP3-caspase1-GSDMD通路诱导哮喘气道上皮细胞发生细胞焦亡,而lfTSLP可加重此过程5.1fTSLP加重poly(I:C)诱发的哮喘气道上皮屏障破坏6.1fTSLP通过TSLPR活化STAT5信号通路加重poly(I:C)诱导哮喘气道上皮细胞发生细胞焦亡,导致气道上皮屏障破坏结论:lfTSLP加重呼吸道病毒诱发的哮喘气道上皮焦亡,功能性地加重气道上皮屏障功能破坏,提示靶向lfTSLP可能可以干预哮喘急性发作的进程,为哮喘急性发作的防治提供新的视角。

关键词：长链胸腺基质淋巴细胞生成素哮喘急性发作气道上皮屏障屋尘螨细胞焦亡

长/短链TSLP在屋尘螨诱导的哮喘气道上皮屏障破坏中的作用机制研究

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长/短链TSLP在屋尘螨诱导的哮喘气道上皮屏障破坏中的作用机制研究

作者：胡亚惠南方医科大学

学位级别：硕士

研究背景及目的:哮喘是一种常见的气道慢性非特异性炎症性疾病,近年来由于人们生活环境的改变,在全球范围内哮喘的发病率和病死率明显增加,在全世界已影响了近3亿人。气道上皮细胞是机体和环境之间的第一道防线,它的主要功能是作为物理... 详细信息

研究背景及目的:哮喘是一种常见的气道慢性非特异性炎症性疾病,近年来由于人们生活环境的改变,在全球范围内哮喘的发病率和病死率明显增加,在全世界已影响了近3亿人。气道上皮细胞是机体和环境之间的第一道防线,它的主要功能是作为物理屏障抵御外部环境中微生物,气体和过敏原等的侵袭。而气道上皮细胞的物理屏障功能是依赖于细胞的完整性和细胞间连接蛋白的相互作用。我们的课题组前期研究已证明屋尘螨可以破坏气道上皮屏障功能,而如何改善过敏原所致的气道上皮的损伤已经成为哮喘防治研究的关注重点。研究表明胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)在哮喘的预防和治疗中扮演重要的角色。新近研究发现TSLP有不同的两个亚型即长链TSLP(1fTSLP)及短链TSLP(sfTSLP),近年来有关sfTSLP和1fTSLP的不同作用已引起了关注,然而,sfTSLP和1fTSLP在哮喘中是否也发挥着不同的作用,现在尚未见到报道。针对上述问题,本课题拟在体内和体外实验探讨:1.1fTSLP是否促进了HDM诱导的气道上皮屏障破坏?2.合成的sfTSLP是否可以保护HDM诱导的气道上皮屏障破坏?3.进一步明确在HDM所导致的哮喘性气道上皮屏障破坏中,1fTSLP发挥破坏作用和sfTSLP发挥保护作用的可能机制。研究方法1.体外实验:1.1人正常支气管上皮细胞系(16HBE)的培养。1.2使用Western blot、RT-PCR、TER、FITC和免疫荧光检测不同时间点及不同浓度的HDM对16HBE细胞的影响。1.3 使用 RT-PCR、TER、FITC 和免疫荧光检测 1α,25-Dihydroxyvitamin D3(1,25D3)对细胞sfTSLP表达及HDM导致的气道上皮细胞屏障的破坏的影响。1.4使用Western blot检测HDM是否通过MAPK通路引起1fTSLP的增高。1.5使用Western blot、TER、FITC和免疫荧光检测1fTSLP对气道上皮细胞屏障的直接影响及STAT5信号通路在这个过程中的作用。1.6使用Western blot、TER、FITC和免疫荧光检测sfTSLP对HDM和1fTSLP诱导的气道上皮屏障的破坏的影响。2.体内实验:2.1BALB/c 小鼠 60 只,随机分为:(1)control(2)1,25D3(3)sfTSLP(4)HDM(5)1,25D3+HDM(6)sfTSLP+HDM。所有小鼠每周连续 5 天进行相应处理,进行8周。2.2小鼠完成最后一次操作24小时后进行动物无创肺功能检测小鼠气道反应性,收集血清使用ELISA检测IgE;收集小鼠的肺泡灌洗液检测IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-13、IL-33、TSLP(1fTSLP)。2.3取出小鼠左肺进行HE染色和E-cadherin、β-catenin和1fTSLP的免疫组织化学染色;取出小鼠右肺组织提取全肺蛋白,使用Western blot检测目的蛋白。3.应用SPSS 19.0分析数据。研究结果:1.在16HBE细胞中,HDM上调1fTSLP的表达和破坏气道上皮屏障。2.在16HBE细胞中,1,25D3上调sfTSLP的表达和抑制了 HDM所导致的气道上皮屏障的破坏。3.在16HBE细胞中,HDM通过激活MAPK信号通路导致1fTSLP的上调。4.在16HBE细胞中,1fTSLP通过激活STAT5信号通路破坏气道上皮屏障。5.在16HBE细胞中,sfTSLP可以保护HDM和1fTSLP导致的气道上皮屏障的破坏。6.在HDM导致的哮喘小鼠模型中,1,25D3和sfTSLP通过抑制ERK和p38信号通路来保护HDM所致的气道炎症和气道屏障蛋白的破坏。研究结论:1.HDM可通过ERK和p38信号通路的磷酸化促进1fTSLP的表达,而高表达的1fTSLP可通过激活STAT5信号通路来破坏16HBE细胞气道上皮屏障功能。2.在16HBE细胞中,1,25D3可上调sfTSLP的表达,而sfTSLP可以修复HDM和1fTSLP导致的气道上皮屏障的破坏。3.在HDM诱导的哮喘小鼠模型中,1,25D3和sfTSLP可通过抑制ERK和p38信号通路来改善HDM所致的气道炎症和气道屏障蛋白的破坏。

关键词：哮喘气道上皮屏障屋尘螨 sfTSLP 1fTSLP