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中药防治肺气血屏障功能障碍的研究进展

中草药 2023年第15期54卷 5075-5087页

作者：杨爽秦泓林李逸轩王曦张荣涛杨剑天津中医药大学省部共建组分中药国家重点实验室天津301617 天津中医药大学中医药研究院天津301617 现代中医药海河实验室天津301617

肺气血屏障由肺泡腔、毛细血管腔及肺间质组成,可保证气体在肺泡与血液间的有效扩散,防止肺泡过度膨胀或塌陷,维持肺部的正常功能。气血屏障功能障碍是急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的主要病理特征,气血屏障一旦被破坏,会导致血浆... 详细信息

肺气血屏障由肺泡腔、毛细血管腔及肺间质组成,可保证气体在肺泡与血液间的有效扩散,防止肺泡过度膨胀或塌陷,维持肺部的正常功能。气血屏障功能障碍是急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的主要病理特征,气血屏障一旦被破坏,会导致血浆蛋白渗漏到肺泡腔中诱发肺水肿,影响正常的气体交换,加重靶器官的缺氧甚至威胁生命。中药治疗ALI已经得到广泛的认可和验证。通过对防治气血屏障损伤的中药复方、单味药材及中药单体进行了综述,为中药防治ALI的应用研究及修复气血屏障功能障碍的可能作用机制提供依据。

关键词：气血屏障中药急性肺损伤肺泡上皮细胞毛细血管内皮细胞屏障稳定性屏障功能性

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肺络构效与肺气血屏障论

中华中医药杂志 2024年第5期39卷 2330-2334页

作者：梁元钰袁佺吕晓东庞立健臧凝子刘勇明王靖宇王佳然邹吉宇盛野赵仲雪辽宁中医药大学沈阳110847 辽宁中医药大学附属医院沈阳110032

文章以络病学说为切入点,运用肺络构效理论创新总结肺络之结构特点和生理效能,肺络驱动全身各级组织响应肺脏调控的现代机制仍不明确,探索肺络构效理论现代内涵意义深远。肺气血屏障是肺泡与血液进行气体交换的执行场所,肺络构效与肺气... 详细信息

文章以络病学说为切入点,运用肺络构效理论创新总结肺络之结构特点和生理效能,肺络驱动全身各级组织响应肺脏调控的现代机制仍不明确,探索肺络构效理论现代内涵意义深远。肺气血屏障是肺泡与血液进行气体交换的执行场所,肺络构效与肺气血屏障乃肺脏体用合一的生动概括。系统梳理肺络构效与肺气血屏障在生理、病理方面的高度相关性,基于“肺络构效-肺气血屏障”指导肺络病临床诊疗实践,旨在拓宽肺络理论之内涵外延,为肺系疾病临床诊疗提供新的方法,为肺络病证治体系构建提供新的思路。

关键词：肺络构效气血屏障呼吸膜肺泡-毛细血管屏障络病理论肺络病

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胎儿肺泡上皮和气血屏障的电镜观察

解剖学报 1992年第1期23卷 102-105页

作者：薄爱华夏苓李海峰安玉兰张竟时何丁戴洁祁晓莉刘洪莲张家口医学院电镜室张家口075029 张家口市第三医院

为阐明不同胎龄肺泡表面上皮和气血屏障的发育状况,对24例受精龄为14～40周的人胎肺脏,进行透射电镜观察。胎龄19周时,即可辨认肺泡Ⅰ型上皮细胞和气血屏障。图像分析表明,气血屏障的厚度,随胎龄的增长而变薄。Ⅱ型肺泡上皮细胞,在胎龄2... 详细信息

为阐明不同胎龄肺泡表面上皮和气血屏障的发育状况,对24例受精龄为14～40周的人胎肺脏,进行透射电镜观察。胎龄19周时,即可辨认肺泡Ⅰ型上皮细胞和气血屏障。图像分析表明,气血屏障的厚度,随胎龄的增长而变薄。Ⅱ型肺泡上皮细胞,在胎龄20周后逐渐分化,22周时胞质内出现板层小体,小体的截面积随胎龄而增大。本文着重对气血屏障及Ⅱ型上皮细胞的形态变化进行了讨论。

关键词：肺泡肺泡上皮气血屏障胎儿

体外气血屏障通透性筛检模型的建立及应用测评

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毒理学杂志 2019年第5期33卷 346-350,356页

作者：赵康峰宋予晴董力张兴戴洪兴张宏伟鲁波白雪涛中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所北京100021 北京协和医学院北京100730 北京工业大学环境与能源工程学院北京100124

目的建立气血屏障(ACB)通透性筛检细胞模型,并对其应用效能进行测评。方法以底膜孔径为1μm的细胞插板(12孔板匹配)为模型构建载体,采用肺毛细血管内皮细胞(PCECs)和A549细胞共培养方式建立ACB模型。测定跨内皮细胞电阻(TEER)评估模型... 详细信息

目的建立气血屏障(ACB)通透性筛检细胞模型,并对其应用效能进行测评。方法以底膜孔径为1μm的细胞插板(12孔板匹配)为模型构建载体,采用肺毛细血管内皮细胞(PCECs)和A549细胞共培养方式建立ACB模型。测定跨内皮细胞电阻(TEER)评估模型的屏障特点。荧光黄(LY)作为指示剂,利用建立的模型进行纳米氧化铝(nano-Al2O3)(片状和短棍状)、纳米氧化锌(nano-ZnO)和纳米硫化铅(nano-PbS) 4种纳米材料和硫酸铝[Al2(SO4)3]、乙酸锌[Zn(CH3COO)2]、硝酸铅[Pb(NO3)2]3种化学物的通透性实验,计算通透系数(Pe)用来表示上述物质引起的ACB通透性改变情况。结果建立了由PCECs和A549细胞共同生长于细胞插板底膜(A549和PCECs分别生长于底膜内外表面)的ACB细胞通透性筛检模型,所建立模型的TEER峰值为(97. 2±0. 6)Ω·cm^2。实验测得片状nano-Al2O3、短棍状nano-Al2O3、nano-ZnO、nano-PbS、Al2(SO4)3、Zn(CH3COO)2和Pb(NO3)2对模型Pe分别是(2. 02±0. 31)×10^-3、(1. 49±0. 16)×10^-3、(1. 04±0. 08)×10^-3、(1. 03±0. 16)×10^-3、(1. 55±0. 21)×10^-3、(1. 01±0. 06)×10^-3和(1. 32±0. 06)×10^-3cm/min,其中片状nano-Al2O3、短棍状nano-Al2O3、Al2(SO4)3和Pb(NO3)24种物质Pe值明显高于模型对照组Pe值(1. 02±0. 03)×10^-3cm/min,差异有统计学意义(P屏障通透性功能影响物质(纳米材料及一般化学物)进行快速筛查。

关键词：气血屏障体外模型通透性改变快速筛检

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肺玄府络脉与气血屏障论

中医杂志 2016年第16期57卷 1433-1435页

作者：陆鹏任凤艳潘迪刘丽香黄亚会程倩倩贺三美刘夏曦侯君周龙甫由凤鸣呼永河成都中医药大学临床医学院四川省成都市十二桥路37号610075 成都军区总医院

玄府-络脉是遍及机体五官九窍、内入脏腑、外达肤腠的微观结构,担负着机体气血流通、津血互渗的功能;肺气血屏障是位于肺泡与毛细血管间的组织,是肺泡与毛细血管进行物质及信息交换的门户结构,但现有研究对气血屏障与肺玄府-络脉的相关... 详细信息

玄府-络脉是遍及机体五官九窍、内入脏腑、外达肤腠的微观结构,担负着机体气血流通、津血互渗的功能;肺气血屏障是位于肺泡与毛细血管间的组织,是肺泡与毛细血管进行物质及信息交换的门户结构,但现有研究对气血屏障与肺玄府-络脉的相关性少有述及。系统整理气血屏障与肺玄府-络脉结构、功能、病机、治法内容,旨在进一步完善脏腑微观结构,为指导临床实践提供依据。

关键词：肺玄府络脉气血屏障

ROS-细胞焦亡在PM2.5诱导气血屏障损伤中的机制研究

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ROS-细胞焦亡在PM2.5诱导气血屏障损伤中的机制研究

作者：魏敏大连医科大学

学位级别：硕士

背景与目的:近年来,空气污染导致全球疾病负担增加,PM因其粒径小对人类健康的威胁大而越来越受到关注。大量研究表明,PM与多种疾病有关,如急性肺损伤、肺癌、动脉粥样硬化、神经退行性疾病等,由于通过呼吸道吸入的PM首先对肺部造成损伤... 详细信息

背景与目的:近年来,空气污染导致全球疾病负担增加,PM因其粒径小对人类健康的威胁大而越来越受到关注。大量研究表明,PM与多种疾病有关,如急性肺损伤、肺癌、动脉粥样硬化、神经退行性疾病等,由于通过呼吸道吸入的PM首先对肺部造成损伤,气血屏障又是肺组织重要的结构和功能屏障,因此,本研究主要通过体外实验探讨PM对气血屏障的损伤及可能机制。方法:***颗粒物的采集和制备使用四级串级撞击器收集大连秋冬季的PM,采用生理盐水将收集好的颗粒物制成40mg/ml的PM悬液用于后续实验。2.获取共培养体系及实验分组将Transwell培养板的背部种HUVEC细胞,贴壁过夜后在Transwell的小室内种A549细胞,共培养几天后得到体外共培养体系。将得到的共培养体系分为5组:（1）对照组:用生理盐水处理共培养体系24h;（2）PM组:用PM处理共培养体系24h;（3）PM+NAC组:在加入PM前用NAC处理2h,然后用PM处理24h;（4）PM+DSF组:在加入PM前用双硫仑处理2h,然后用PM处理24h;（5）PM+PBS组:在加入PM前用PBS处理2h,然后用PM处理24h。3.相关指标检测（1）细胞存活率以及氧化应激检测通过CCK-8检测试剂盒检测PM对A549和HUVEC两种细胞存活率的影响。超氧化物岐化酶（SOD）试剂盒检测体外共培养后各组细胞SOD的活力,丙二醛（MDA）试剂盒检测体外共培养后各组细胞MDA含量。（2）紧密连接的检测通过实时荧光定量PCR技术对ZO-1、Occludin、Claudin-5进行基因水平检测;Western blot测定TJ蛋白的表达;ZO-1蛋白表达用免疫荧光检测。（3）焦亡相关指标检测采用qRT-PCR对体外共培养后各组细胞焦亡相关指标（NLRP3,Caspase-1,GSDMD,IL-1β和IL-18）的基因水平进行检测。Western blot方法检测体外共培养后各组NLRP3,Caspase-1,GSDMD,IL-1β和IL-18的蛋白表达量;共培养后各组GSDMD蛋白的表达水平通过免疫荧光法检测;检测共培养后LDH释放量和SYTOX Green叶酸染料评估细胞膜损伤情况。结果:1.暴露PM后对体外共培养体系损伤的检测qRT-PCR和Western blot结果显示与单独培养的A549与HUVEC细胞相比,共培养后ZO-1、Occludin、Claudin-5的表达量增加,表明共培养的方式可以获得更加紧密的细胞连接,更好的在体外模拟气血屏障。CCK-8结果表明PM对A549和HUVEC细胞的毒性具有浓度依赖性;qRT-PCR和Western blot结果表明,PM处理会造成体外共培养细胞紧密连接蛋白表达量减少;免疫荧光ZO-1结果显示PM暴露后紧密连接会出现断裂和不连续。2.氧化应激检测SOD和MDA检测试剂盒的结果显示,相比于对照组,PM刺激后可以诱导体外共培养细胞SOD活力下降,MDA含量增加。这些结果表明,PM暴露会引起氧化应激反应增强。3.经典细胞焦亡途径检测qRT-PCR结果显示PM刺激后体外共培养后NLRP3,Caspase-1,GSDMD,IL-18和IL-1β的m RNA表达增多;Western blot Western blot研究结果提示,在PM暴露后的体外共培养体系中,NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18和IL-1β的蛋白表达也有所增加;免疫荧光结果表明,经PM处理后,GSDMD表达量较对照组显著增加,这些结果表明PM的暴露引起体外共培养细胞焦亡的发生。LDH检测结果表示PM刺激后体外共培养后的LDH释放量明显增加;SYTOX Green叶酸染色的阳性细胞数增加表明了PM暴露可以引发细胞膜出现损伤及死亡。***处理后体外共培养体系相关指标的变化的检测提前用NAC处理后可以观察到体外共培养的PM+NAC组的氧化应激水平相较于PM+PBS组下降;qRT-PCR和Western blot结果提示NAC预处理后减轻了PM对紧密连接的损伤;ZO-1的免疫荧光实验显示,NAC可以减轻PM诱导的紧密连接损伤。qRT-PCR结果表明NAC处理降低了PM诱导的NLRP3,Caspase-1,GSDMD,IL-18和IL-1β的基因表达;Western blot结果也观察到相同的趋势,NLRP3,Caspase-1,GSDMD,IL-18和IL-1β蛋白的表达在PM+NAC组也低于PM+PBS组;免疫荧光实验观察到,相较于PM+PBS组,PM+NAC组GSDMD表达量的降低;同样,在PM+NAC组也观察到LDH的释放以及SYTOX Green叶酸染料的阳性细胞数减少的现象。5.双硫仑（DSF）处理后体外共培养相关指标变化的检测在使用DSF预处理后,明显降低了由PM诱导

关键词： PM2.5 氧化应激气血屏障细胞焦亡双硫仑

纳米二氧化钛颗粒穿越大鼠肺泡气血屏障的电镜研究

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纳米二氧化钛颗粒穿越大鼠肺泡气血屏障的电镜研究

作者：杨平浙江大学

学位级别：硕士

[研究背景]纳米颗粒具有独特的物理、化学和生物特性,越来越广泛地被应用于生产生活的各个领域中。它们在这些领域的应用带来了巨大的经济效益,但同时也产生潜在的生物安全性与环境安全性等问题而引起世界范围的广泛关注。已有研究结果... 详细信息

[研究背景]纳米颗粒具有独特的物理、化学和生物特性,越来越广泛地被应用于生产生活的各个领域中。它们在这些领域的应用带来了巨大的经济效益,但同时也产生潜在的生物安全性与环境安全性等问题而引起世界范围的广泛关注。已有研究结果显示纳米颗粒可引起细胞代谢、凋亡、细胞周期、应激反应、细胞信号转导和炎症反应等一系列的毒性效应。纳米颗粒进入机体后可以转运到各器官,包括大脑和心脏等重要生命器官。转运可以是简单的物理性移位,还可以发生溶解(溶解大多数主要是物理过程,少数有化学变化)和蛋白结合等化学性过程。而多项研究结果表明纳米二氧化钛颗粒(nano-TiO2)易进入上皮和间质部位,nano-TiO2在肺灌洗液中只有20%的在巨噬细胞中可以被检出,提示大多数nano-TiO2颗粒在上皮细胞或转运到间质和循环系统,然而nano-TiO2颗粒究竟是如何被转运的,现有的研究并没有给出直接的证据。[研究目的]利用透射电子显微镜(TEM)观察nano-TiO2颗粒是否可以直接穿越大鼠肺气-血屏障,从而由肺进入血循环。旨在为nano-TiO2的生物安全性评价、危险度管理以及纳米材料在生物医学中的应用提供有益的资料,进一步促进纳米技术和纳米产业的健康发展。[研究方法]本实验采用大鼠支气管灌注实验探究nano-TiO2穿越肺气血屏障的过程,具体观察指标包括：①肺组织病理切片常规HE染色：观察肺组织结构改变及nano-TiO2颗粒在肺泡的组织大体(一般指肉眼可见的)分布;②应用透射电镜技术观察nano-TiO2颗粒在肺泡的微观分布及对肺泡超微结构的影响,特别是对肺气血屏障的作用,并结合X射线能谱仪定性nano-TiO2颗粒的存在;③利用电感耦合等离子体质谱法(ICP-MS)检测灌注后大鼠静脉血中nano-TiO2颗粒在不同时间点的含量变化。[研究结果]1.材料表征X-衍射和透射电镜鉴定结果：试样中锐钛矿相和金红石相的比例为80%：20%,nano-TiO2材料均呈圆形晶体颗粒,测得其平均粒径约为25nm。2.肺组织光镜观察结果：对照组,大鼠肺泡结构正常,肺泡间隔较薄,肺泡腔干净,无明显炎症变化。Nano-TiO2灌注后2h组,肺组织无明显病理性改变,肺泡完整但呈现皱缩,少量纳米颗粒以团聚状态沉积在肺泡内表面,也有少量分布在肺泡隔。Nano-TiO2灌注后6h组,大量nano-TiO2颗粒团聚物分布在大鼠肺部的呼吸性细支气管、肺泡管、肺泡囊、肺泡和肺间质;肺组织出现明显充血、出血的病理性改变,肺泡腔内有明显的渗出和炎性细胞浸润。Nano-TiO2灌注后12h组,nano-TiO2颗粒团聚物在肺组织中的分布比6h组减少,但病理性改变更加明显,部分肺泡完整性遭到破坏,肺泡结构排列紊乱或肺实变,整个肺泡结构几乎不存在。Nano-TiO2灌注后24h组,肺泡表面少见nano-TiO2颗粒沉积,间质偶见小的团聚颗粒分布,肺泡充血消失,水肿减轻,肺泡也有所修复。3.透射电镜观察结果：在灌注后6h,肺泡腔内出现大量nano-TiO2颗粒大团聚物和链状小团聚物,肺泡腔内游离巨噬细胞形态结构完整,但胞质中有大量无膜包被的nano-TiO2颗粒团聚物。在气血屏障处,有些nano-TiO2颗粒团聚物粘附在肺泡上皮细胞上,有些nano-TiO2颗粒大团聚物已破膜进入气血屏障的肺泡上皮细胞内,有nano-TiO2链状小团聚物跨越肺泡上皮细胞和基膜进入毛细血管内皮。在灌注后12h, nano-TiO2在肺组织中分布与6h相似,可见nano-TiO2颗粒以不同方式穿越气血屏障,进入毛细血管腔,链状结构团聚物是直接穿越气血屏障进入的,块状团聚物以破膜的形式穿越气血屏障进入。在灌注后24h, nano-TiO2颗粒大量进入肺间质,肺泡隔明显增厚,接触nano-TiO2颗粒的细胞呈现细胞损伤,凋亡及坏死,细胞中出现大量空泡,细胞核缩小,线粒体肿大,脊散乱。在有nano-TiO2颗粒的Ⅱ型肺泡上皮细胞中生成大量板层小体,细胞表面微绒毛消失。4. ICP-MS结果：与对照组相比,nano-TiO2颗粒气管灌注组在各时间点(0、2、6、12、24和48h)全血Ti元素均高于对照组,但灌注组不同时间点间比较并没有发现明显差异。[结论]1)本研究实验条件下,25nm粒径的nano-TiO2颗粒支气管灌注后能够跨越气-血屏障进入血液循环,其中小链状结构团聚物是以直接穿越气血屏障进入毛细血管腔的,大块状团聚物则是以破坏气血屏障的形式进入毛细血管腔的。2)本研究实验条件下,25nm粒径的nano-TiO2颗粒支气管灌注后可造成肺充血、肺水肿、肺泡破坏和细胞凋亡等肺损伤。

关键词：纳米二氧化钛气血屏障转移透射电镜

从肺气血屏障损伤角度研究石荠苧总黄酮抗流感病毒作用及其机制

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从肺气血屏障损伤角度研究石荠苧总黄酮抗流感病毒作用及其机制

作者：吴方浙江中医药大学

学位级别：硕士

目的观察石荠苧总黄酮（Mosla Scabra flavonoids,MSF）对甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34引起的小鼠病毒感染性肺炎的治疗作用,并基于MLC/MLCK信号途径,从流感病毒性肺炎引起的小鼠气血屏障功能损伤角度,探讨其作用机制。方法采用水... 详细信息

目的观察石荠苧总黄酮（Mosla Scabra flavonoids,MSF）对甲型流感病毒鼠肺适应株A/PR/8/34引起的小鼠病毒感染性肺炎的治疗作用,并基于MLC/MLCK信号途径,从流感病毒性肺炎引起的小鼠气血屏障功能损伤角度,探讨其作用机制。方法采用水提醇沉、乙酸乙酯萃取法提取石荠苧总黄酮;以理化分析手段鉴定黄酮类成分,以碱性铝盐比色法检测总黄酮含量,采用MTT法检测MSF对A549细胞的毒性,及其抑制流感病毒诱导A549死亡的作用;采用免疫荧光技术,观测细胞骨架蛋白变化,探究MSF对细胞骨架蛋白的影响;采用滴鼻攻毒的方式,建立急性流感病毒感染小鼠模型,以MSF进行治疗,观察MSF对感染小鼠体重、肺指数指标的影响,进行病理切片,观察MSF对感染小鼠肺组织病变的影响;采用小鼠活体成像技术和冰冻切片免疫荧光技术观测MSF对感染小鼠肺气血屏障通透性的影响;采用酶联免疫吸附试验（ELISA）,检测MSF对感染小鼠血清中,细胞因子白介素6（IL-6）和干扰素γ（IFN-γ）水平的影响;采用透射电镜技术,观察MSF对感染小鼠肺组织Ⅱ型肺泡上皮细胞（AT Ⅱ）的影响;采用实时荧光定量PCR技术,检测MSF对感染小鼠肺组织病毒载量及MLCK的mRNA表达水平的影响;采用蛋白印迹技术,检测MSF对感染小鼠肺组织MLC蛋白磷酸化水平的影响;采用免疫组化技术,检测MSF对感染小鼠肺组织中紧密连接蛋白1（ZO-1）表达的影响。结果石荠苧提取物经理化鉴别,主要成分为黄酮类化合物,且经定量分析,总黄酮含量为84.7%;MTT实验证明,与模型对照组相比,MSF可显著抑制流感病毒引起的A549细胞死亡率,且预防给予MSF效果更好,MSF具有抑制流感病毒吸附感染细胞的作用;细胞免疫荧光实验结果显示,MSF可有效抑制流感病毒引起的A549骨架蛋白解聚重构;与模型对照组相比,MSF可有效抑制小鼠因感染流感病毒而造成的体重减轻和肺指数增加,减缓肺部炎症性病理损伤,抑制肺上皮细胞形态改变,保护上皮细胞屏障的完整性;与模型对照组相比,MSF对流感感染小鼠胸腔单位面积荧光强度增强有显著抑制作用;与模型对照组相比,MSF可显著抑制流感感染小鼠血清中细胞因子的水平;与模型对照组相比,MSF可有效抑制流感病毒的体内增殖,抑制流感感染小鼠肺内MLCK mRNA表达和MLC的磷酸化,证实了 MSF通过MLC/MLCK信号通路来调控内皮屏障通透性;与模型对照组相比,MSF可显著提升流感感染小鼠肺组织ZO-1蛋白的表达量,加强了上皮细胞的紧密连接,增强了上皮屏障抵抗病菌的能力。结论MSF可通过抑制细胞骨架蛋白解聚重构,抑制流感病毒对A549的吸附感染,从而减少流感病毒引起的A549细胞死亡;对病毒引起的小鼠肺炎具有明显的改善作用,可通过MLC/MLCK通路信号传导改善内皮细胞的屏障功能,减少ZO-1蛋白的丢失,增强细胞间的紧密连接;抑制上皮细胞形态改变,维持上皮细胞屏障的完整性,从而改善肺气血屏障的屏障功能,起到抗流感性肺炎作用。

关键词：石荠苧总黄酮流感病毒气血屏障肌球蛋白轻链

养阴清肺汤加味调节SMPP小鼠气血屏障的机制研究

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养阴清肺汤加味调节SMPP小鼠气血屏障的机制研究

作者：张天宇辽宁中医药大学

学位级别：硕士

目的:通过观察细胞间紧密连接蛋白(TJs)、水通道蛋白5(AQP5)、黏蛋白5ac(MUC5ac)等相关因子的动态变化,从肺气血屏障的结构与功能角度出发,探讨养阴清肺汤加味对重症肺炎支原体肺炎(SMPP)肺气血屏障受损的调节机制,并与中医的“润燥”... 详细信息

目的:通过观察细胞间紧密连接蛋白(TJs)、水通道蛋白5(AQP5)、黏蛋白5ac(MUC5ac)等相关因子的动态变化,从肺气血屏障的结构与功能角度出发,探讨养阴清肺汤加味对重症肺炎支原体肺炎(SMPP)肺气血屏障受损的调节机制,并与中医的“润燥”治法相关联,为中医药治疗SMPP的研究提供新思路。材料与方法:将120只BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、养阴组、阿奇组及阿奇+养阴组,除正常组小鼠外,各组小鼠经麻醉后使用10CCU/ml的MP菌液滴鼻构建SMPP模型,模型建立成功后开始进行药物干预,分别在第3、7、10、14天进行取材。观察小鼠的一般状态;分别称取小鼠肺组织的干重及湿重,测定小鼠肺组织干/湿重比值;计算小鼠肺指数;采用HE染色的方法光镜下观察小鼠肺组织病理形态改变,并计算病理评分;免疫组织化学法检测肺组织中紧密连接蛋白Occludin、ZO-1的表达;q PCR法对肺组织中Occludin、ZO-1、AQP5、MUC5ac的基因含量进行测定;Western blot法检测小鼠肺组织中Occludin、ZO-1的蛋白表达;ELISA法检测小鼠肺泡灌洗液中MUC5ac的含量。结果:1.从小鼠的一般状态观察看,除正常组外,其余各组小鼠在MP感染后第3天起均出现不同程度的精神倦怠,饮食量减少,活动量减少,甚至部分小鼠出现竖毛反应,鼻腔出现分泌物,其中阿奇+养阴组反应最轻,模型组反应最重。第7天时,模型组及各给药组小鼠状态均为最低水平,后逐渐改善,其中阿奇+养阴组小鼠一般状态改善最为明显,阿奇组次之。2.在MP感染后,各组小鼠肺指数均高于正常组(P0.05),阿奇+养阴组小鼠的肺指数低于养阴组小鼠(P0.05)。3.肺组织病理结果显示,模型组小鼠肺部病理改变明显,渗出大量炎性细胞,毛细血管瘀血严重,呼吸膜明显增厚。养阴组小鼠肺泡内炎性细胞渗出较模型组少,肺泡间隔增宽。阿奇组小鼠有炎性细胞浸润,轻度的肺组织瘀血。阿奇+养阴组小鼠也可见炎症细胞浸润。病理评分结果显示,模型组小鼠的病理评分在各个时间点均高于各个给药组(P0.05),阿奇+养阴组除第3天外,其余各个时间点的病理评分均低于养阴组(P<0.05),且在第14天,阿奇+养阴组的病理评分均低于中药或西药单独给药组(P<0.05)。4.通过免疫组化的方法观察SMPP小鼠肺组织中Occludin及ZO-1的分布发现,正常组小鼠Occludin、ZO-1主要表达于肺泡上皮以及毛细血管内皮细胞,细胞膜及胞浆边缘存在强阳性染色。模型组小鼠Occludin、ZO-1表达定位失去连续性,阳性染色明显减少。养阴组小鼠Occludin、ZO-1的阳性染色强于模型组。阿奇组Occludin、ZO-1在较多的肺泡壁上皮或肺泡间质毛细血管内皮细胞仍呈波浪状分布。阿奇+养阴组Occludin、ZO-1的阳性染色略高于各个单给药组。5.比较各组小鼠肺组织中Occludin、ZO-1 m RNA表达发现,在MP感染后,各组小鼠肺组织中的Occludin ZO-1 m RNA表达均较正常组下降(P<0.05),各给药组对于两者均有不同程度的调节作用,其中联合用药效果最佳。在MP感染后的第3天,各组小鼠肺组织中的AQP5 m RNA含量均较正常组小鼠有不同程度的下降,而MUC5ac m RN A含量均较正常组小鼠有不同程度的升高,阿奇霉素对AQP5及MUC5ac的调节作用早于养阴清肺汤加味,中药主要在SMPP后期发挥调节作用,且与阿奇霉素联合应用效果最佳。6.在MP感染后,各组小鼠肺组织中的Occludin、ZO-1蛋白表达均较正常组下降(P<0.05),各给药组均高于模型组,在第7天下降到谷值;第3天起,养阴组虽高于模型组,但较阿奇组及联合用药组低,且差异有统计学意义(P<0.05)。7.在MP感染后,各组小鼠肺泡灌洗液中的MUC5ac含量均比正常组小鼠高(P<0.05),第3天时,养阴组与模型组小鼠差异无统计学意义(P<0

关键词：重症肺炎支原体肺炎养阴清肺汤加味气血屏障水液代谢